Utilización de ferrofluidos para el fenotipaje sanguíneo y aplicaciones derivadas.

Procedimiento de fenotipaje de grupo sanguíneo, en el que se determina por reacción de aglutinación deeritrocitos la presencia de un antígeno de grupo sanguíneo en la superficie de un eritrocito de una muestra,

caracterizado porque comprende las etapas siguientes:

a) la mezcla de una suspensión de eritrocitos contenidos en la muestra con una solución acuosa de ferrofluidoobtenido o susceptible de ser obtenido a partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe(III) y de por lo menosun metal M(II) de grado II de oxidación para obtener una suspensión homogénea de dichos eritrocitos en lasolución de ferrofluido,

b) la puesta en contacto en un contenedor de la suspensión de eritrocitos obtenida en la etapa a) con unanticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo conocido, estando esta etapa seguida de una etapade incubación;

c) la agitación de la suspensión obtenida en la etapa b) después de la incubación;

d) la aplicación de un campo magnético a dicho contenedor, de tal manera que las partículas magnéticascontenidas en dicho ferrofluido sean arrastradas al fondo de dicho contenedor;

e) la agitación de la suspensión obtenida en la etapa d);

f) la lectura a simple vista y/o mediante cualquier otro sistema de lectura apropiado de la presencia eventual deaglutinados eritrocitarios en el contenedor.

Utilización de ferrofluidos para el fenotipaje sanguíneo y aplicaciones derivadas.

La presente invención se refiere a un procedimiento de fenotipaje de grupo sanguíneo, que utiliza una solución acuosa de ferrofluido obtenido a partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y de por lo menos un metal M (II) de grado II de oxidación. La invención comprende también un dispositivo y un kit que permiten realizar dicho procedimiento.

La transfusión sanguínea consiste hoy día en administrar por vía intravenosa unas preparaciones de concentrado de glóbulos rojos (concentrados globulares) obtenidas a partir de sangre de donantes.

Durante una transfusión sanguínea, el primer riesgo está relacionado con la posibilidad de reunir en el organismo del receptor (persona transfundida) un anticuerpo y su antígeno eritrocitario. En efecto, en la superficie de los eritrocitos,

denominados también glóbulos rojos o hematíes, se encuentran unos antígenos membranarios eritrocitarios, en particular unos antígenos de grupo (o sistema) sanguíneo, capaces de ser reconocidos por el sistema inmunitario y desencadenar una respuesta inmune.

Los glóbulos rojos del donante son denominados compatibles con la sangre del receptor si el receptor no presenta 20 anticuerpos circulantes dirigidos contra un antígeno eritrocitario del donante.

Entre el conjunto de las variantes antigénicas de un antígeno membranario eritrocitario que constituyen los grupos sanguíneos, se han identificado hoy día más de veinte sistemas antigénicos eritrocitarios en el ser humano: sistema ABO con los antígenos A o B, sistema Rhesus con el antígeno D, E o e y C o c, sistema Kell con el antígeno K o k,

Duffy (Fya, Fyb) , Kidd (Jka, Jkb) o también otros sistemas buscados menos frecuentemente en la práctica que existen también tales como MNS, Lewis, etc. Los individuos que presentan una misma asociación de antígenos eritrocitarios pertenecen a un mismo grupo sanguíneo eritrocitario. Los grupos sanguíneos son tanto más complejos y numerosos si utilizan varios sistemas antigénicos.

Aparte de la situación patológica, tal como en el caso de la enfermedad autoinmune, el suero de un individuo puede contener dos tipos de anticuerpos dirigidos contra unos antígenos eritrocitarios.

(i) los anticuerpos denominados regulares y dirigidos contra los antígenos del sistema ABO (por ejemplo anticuerpos anti-A en el individuo de grupo B) . Se trata de inmunoglobulinas de tipo IgM que son capaces de aglutinar los glóbulos rojos in vitro. Este fenómeno se aprovecha para determinar el grupo ABO de un individuo por las pruebas de Beth-Vincent y Simonin, permitiendo la prueba de Beth-Vincent determinar los antígenos transportados por sus glóbulos rojos (fenotipo antigénico) y permitiendo la prueba de Simonin realizar el estudio complementario, es de decir determinar los anticuerpos anti-A y/o anti-B circulantes presentes en el suero del individuo.

En la prueba de Beth-Vincent, los glóbulos rojos del individuo se ponen en contacto con sueros de ensayo, o anticuerpos de ensayos, que poseen cada uno un tipo de anticuerpo preciso, dirigido contra un antígeno del sistema ABO. Se trata por lo tanto de una prueba de aglutinación de los glóbulos rojos con unos sueros de ensayo.

En la prueba de Simonin, denominada también contraprueba, el suero del individuo, que contiene sus anticuerpos circulantes, se pone en contacto con glóbulos rojos de ensayos, o eritrocitos de ensayos, que pertenecen cada uno a un grupo antigénico preciso del sistema ABO. Se trata por lo tanto de un ensayo de aglutinación del suero con unos gl6bulos rojos de ensayo;

(ii) los anticuerpos denominados irregulares (o inmunes) cuya presencia en el suero o plasma es facultativa y que están dirigidos contra unos antígenos de los sistemas no ABO. Se trata lo más frecuentemente de IgG que aparecen con motivo de una estimulación antigénica por unos glóbulos rojos extraños, por ejemplo tras una inmunización contra uno o varios antígenos durante una transfusión sanguínea o también durante un 55 embarazo, por reacción inmunitaria maternal dirigida contra los antígenos eritrocitarios fetales que no pertenecen al grupo sanguíneo maternal, en particular durante el parto.

La búsqueda de estos anticuerpos denominados irregulares se denomina Búsqueda de Aglutinina Irregular (RAI) . Este ensayo se utiliza para detectar la presencia o no en la sangre de un individuo de IgG dirigidos contra diversos 60 antígenos eritrocitarios. Para ello, se busca poner en evidencia la fijación de estas IgG sobre unos glóbulos rojos ensayos de los cuales se conocen los antígenos. Se procede en paralelo sobre numerosos tipos de glóbulos rojos, permitiendo la comparación de los resultados deducir la o las IgG presentes.

El riesgo es más importante para los antígenos más inmunógenos, como el Rh D pero también los otros Rh 65 (E>c>e>C) , el Kell (K) , el Duffy (Fy, a, Fy, b) , el Kidd (Jka, Jkd, b) , etc.

En la práctica, no se puede tener en cuenta todos estos antígenos para realizar una transfusión, de lo contrario no se dispondría jamás del grupo adecuado sanguíneo en el mejor momento, sobre todo porque algunas asociaciones antigénicas son muy raras. La transfusión estándar no tiene en cuenta el grupo en el sistema ABO más el Rh D (Rh+

o Rh-) . En las situaciones con riesgo de aparición de una aglutinina irregular, se tiene en cuenta un cierto número de otros sistemas, en particular los Rh C y E, y el Kell, incluso aún otros sistemas. Se trata entonces, en estas situaciones con riesgos, de respetar la compatibilidad del grupo sanguíneo del donante con el de la sangre del receptor, teniendo en cuenta la presencia o el riesgo de aparición de estas aglutininas irregulares.

Así, en un paciente receptor portador de anticuerpos irregulares anti-eritrocitarios o en una situación de riesgo como, en particular, en los pacientes politransfusionados que no poseen anticuerpos irregulares anti-eritrocitarios y en la mujer embarazada, es indispensable seleccionar las unidades de concentrados eritrocitarios que van a ser transfusionados, de tal manera que los glóbulos rojos del donante deberán estar desprovistos de antígenos contra los cuales los anticuerpos del receptor son dirigidos o susceptibles de aparecer. Esta prueba de compatibilidad es obligatoria en estos pacientes y de manera preventiva en todos los receptores antes de la administración de los concentrados eritrocitarios, efectuando una prueba de compatibilidad directa con los hematíes del donante en presencia del suero o plasma del receptor. No se debe observar ninguna reacción de aglutinación y/o de lisis en las técnicas utilizadas para la RAI.

En la práctica clínica transfusional, el fenotipaje eritrocitario, que corresponde a la búsqueda y a la identificación de los antígenos de grupo sanguíneo en la superficie de los hematíes (con la excepción del sistema particular ABO en el que se busca además la presencia de los anticuerpos regulares correspondientes) , se refiere asimismo tanto el receptor como el donante.

A nivel del receptor y del donante, existen tres niveles de fenotipo eritrocitario, a fin de poner a disposición del receptor unos concentrados eritrocitarios compatibles en función de las situaciones de riesgo:

- la determinación del fenotipo del grupo ABO (o agrupamiento ABO) y Rh estándar (presencia o ausencia del

antigeno D) ;

- la determinación del fenotipo Rh Kell (presencia o ausencia de los antigenos C, E, c, r y K) ; y

- la determinación del fenotipo extendido (o ampliado) (presencia o ausencia de los antígenos del sistema Duffy, Fy a y Fy b, del sistema Kidd, Jk a y Jk b, y del sistema MNSs (antígenos S y s) , pudiendo buscarse además otros antígenos según la naturaleza del riesgo y/o del anticuerpo irregular puesto en evidencia en el suero del receptor.

Las técnicas habitualmente utilizadas, realizadas para buscar e identificar la presencia o la ausencia de antígeno de grupo sanguíneo en la superficie de eritrocito del donante y/o del receptor, o que tienen como objetivo buscar e identificar la presencia o ausencia de anticuerpos anti-antígeno de grupo sanguíneo, regular (para el grupo ABO) o irregular en el ámbito de la RAI en el suero o plasma del donante y/o del receptor, son bien conocidas por el experto en la técnica y no se describirán aquí.

Para el fenotipaje, estas consisten en general en buscar con la ayuda del suero-ensayo que contiene los anticuerpos apropiados la presencia o la ausencia del antígeno buscado. Preferentemente, estos anticuerpos contenidos en estos sueros de ensayo son de naturaleza aglutinante (IgM o IgA) , lo... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de fenotipaje de grupo sanguíneo, en el que se determina por reacción de aglutinación de eritrocitos la presencia de un antígeno de grupo sanguíneo en la superficie de un eritrocito de una muestra, 5 caracterizado porque comprende las etapas siguientes:

a) la mezcla de una suspensión de eritrocitos contenidos en la muestra con una solución acuosa de ferrofluido obtenido o susceptible de ser obtenido a partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y de por lo menos un metal M (II) de grado II de oxidación para obtener una suspensión homogénea de dichos eritrocitos en la solución de ferrofluido,

b) la puesta en contacto en un contenedor de la suspensión de eritrocitos obtenida en la etapa a) con un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo conocido, estando esta etapa seguida de una etapa de incubación;

c) la agitación de la suspensión obtenida en la etapa b) despues de la incubación;

d) la aplicación de un campo magnético a dicho contenedor, de tal manera que las partículas magnéticas contenidas en dicho ferrofluido sean arrastradas al fondo de dicho contenedor;

e) la agitación de la suspensión obtenida en la etapa d) ;

f) la lectura a simple vista y/o mediante cualquier otro sistema de lectura apropiado de la presencia eventual de aglutinados eritrocitarios en el contenedor. 25

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque dicha solución acuosa de ferrofluido es sin agente tensioactivo.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque dicho ferrofluido es preparado a partir de una

mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y de por lo menos un metal M (II) de grado II de oxidación, preferentemente seleccionado de entre los metales de la primera serie de los metales de transición tales como Fe (II) , Co (II) , Mn (II) , Cu (II) o Ni (II) .

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque dicho ferrofluido es preparado a 35 partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y Fe (II) .

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque dicho ferrofluido es preparado a partir de una mezcla de polioxoaniones asociada a un catión.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque dicho catión se selecciona de entre H+, CH3+, N (CH3) 4+, N (C2H5) 4+.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque las fuentes de metales de partida seleccionadas para Fe (III) y M (II) para preparar dicho ferrofluido serán, respectivamente, el cloruro férrico y el cloruro 45 ferroso.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque dicho ferrofluido es preparado a partir de una mezcla inicial Fe (III) y de metal M (II) de relación molar comprendida entre 1 y 3.

9. Procedimiento según las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque dicho ferrofluido es preparado a partir de una mezcla inicial Fe (III) y de metal M (II) de relación molar igual a 2 ± 0, 1.

10. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque dicho ferrofluido es susceptible de ser obtenido mediante los procedimientos descritos en los ejemplos 1 a 8 de la solicitud de patente francesa publicada bajo el nº 55 2 461 521.

11. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque dicha solución acuosa de ferrofluido está previamente diluida en un tampón o una solución fisiológica.

12. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque dicha solución acuosa de ferrofluido está diluida del 0, 25 al 10% (v/v) en dicho tampón o dicha solución fisiológica.

13. Procedimiento según una de las reivindicaciones 11 y 12, caracterizado porque dicho tampón es un tampón de baja fuerza iónica. 65

14. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque en la etapa a) dicha solución de ferrofluido es una solución de ferrofluido obtenido susceptible de ser obtenido a partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y de por lo menos un metal M (II) de grado II de oxidación que se ha diluido previamente en un tampón o en una disolución fisiológica en un intervalo comprendido entre 0, 2 y 2% (v/v) .

15. Procedimiento según la reivindicación 14, caracterizado porque dicha solución de ferrofluido obtenido o susceptible de ser obtenido a partir de una mezcla de polioxoaniones de Fe (III) y de por lo menos un metal M (II) de grado II de oxidación se ha diluido previamente en un tampón o en una solución fisiológica en un intervalo comprendido entre 0, 25 y 0, 75% (v/v) .

16. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque antes de la etapa b) , dicha suspensión de eritrocitos contenidos en la muestra se somete previamente a la acción de una enzima proteásica.

17. Procedimiento según la reivindicación 16, caracterizado porque dicha suspensión de eritrocitos está sometida a la acción de la enzima proteásica al final de la etapa a) .

18. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque los anticuerpos de ensayo antiantígeno de grupo sanguíneo conocido son unos anticuerpos aglutinantes.

19. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque la etapa de incubación al final de la etapa b) se efectúa durante un tiempo comprendido entre 5 y 15 minutos.

20. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque la etapa c) de agitación se efectúa durante un tiempo comprendido entre 30 segundos y 2 minutos 30 segundos.

21. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque la etapa d) de aplicación de un campo magnético de dicho contenedor se realiza mediante un imán situado en el exterior debajo de dicho contenedor, de tal manera que las partículas de ferrofluido sean arrastradas al fondo de dicho contenedor según un eje vertical.

22. Procedimiento según la reivindicación 21, caracterizado porque la etapa d) dicho imán es un imán permanente de magnitud comprendida entre 10 000 y 14 000 gauss.

23. Procedimiento según la reivindicación 21 o 22, caracterizado porque en la etapa d) el campo magnético es aplicado durante 2, 5 minutos a 10 minutos en dicho contenedor.

24. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque en la etapa e) , la agitación de la suspensión antes de la lectura se efectúa en dos etapas de agitación sucesivas, siendo la segunda menos larga y menos vigorosa que la primera.

25. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizado porque en la etapa a) , dicha suspensión de eritrocitos procedente de eritrocitos contenidos en la muestra procede de un residuo de eritrocitos obtenido después de la sedimentación de una muestra de sangre total de un individuo.

26. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 25, caracterizado porque en la etapa b) , dicho contenedor es una cúpula de microplaca.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, caracterizado porque en la etapa c) , la agitación se efectúa con la ayuda de un agitador para microplaca a una velocidad comprendida entre 500 y 800 rpm.

28. Procedimiento según la reivindicación 26 o 27, caracterizado porque en la etapa e) , la agitación se efectúa en 2 etapas con la ayuda de un agitador para microplaca, una primera agitación durante 1 a 2 minutos 30 segundos comprendida entre 800 y 1000 rpm, y una segunda agitación durante 30 segundos a 1 minuto a una velocidad comprendida entre 350 y 550 rpm.

29. Procedimiento según una de las reivindicaciones 26 a 28, caracterizado porque en la etapa b) :

- se pone en contacto en dicha cúpula de 40 μl a 50 μl de la suspensión de eritrocitos obtenida en la etapa a) con unos anticuerpos de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo conocido contenidos en forma desecada en el fondo de la cúpula.

30. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 29, para el grupo sanguíneo ABO de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque en la etapa b) :

- se pone en contacto en distintos contenedores la suspensión de eritrocitos procedentes de la muestra obtenida en la etapa a) con un anticuerpo de ensayo anti-A y un anticuerpo de ensayo anti-B; y

- se pone en contacto en distintos contenedores distintos la suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo A y de grupo B obtenida en la etapa a) después de la mezcla de una suspensión de eritrocitos de ensayo con una solución acuosa de ferrofluido, con una muestra de plasma o de suero del individuo,

caracterizado porque en la etapa f) se evalúa mediante lectura a simple vista y/o mediante cualquier otro sistema de lectura apropiado, la presencia eventual de aglutinados eritrocitarios en cada uno de dichos contenedores, permitiendo el conjunto de estas lecturas determinar el grupo ABO del individuo.

31. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 29, para el fenotipaje sanguíneo, fuera de la prueba de Simonin, de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque en la etapa b) :

- se ponen en contacto en distintos contenedores la suspensión de eritrocitos procedentes de la muestra obtenida en la etapa a) con un anticuerpo de ensayo específico del antígeno de grupo sanguíneo, del cual se

busca determinar la presencia o la ausencia sobre los eritrocitos de la muestra, conteniendo cada contenedor una sola especificidad de anticuerpos,

caracterizado porque en la etapa f) se evalúa por lectura a simple vista y/o mediante cualquier otro sistema de lectura apropiado, la presencia eventual de aglutinados eritrocitarios en cada uno de dichos contenedores, 20 permitiendo el conjunto de estas lecturas determinar el fenotipo del individuo para los antígenos de grupo sanguíneo buscados.

32. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 30, para el fenotipaje sanguíneo, prueba de Simonin incluida, de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque en la etapa b) : 25

- se ponen en contacto en distintos contenedores la suspensión de eritrocitos procedente de la muestra obtenida en la etapa a) con un anticuerpo de ensayo anti-A y un anticuerpo de ensayo anti-B, y

- se ponen en contacto en otros contenedores distintos la suspensión de eritrocitos procedente de la muestra

obtenida en la etapa a) con un anticuerpo de ensayo específico del antígeno de grupo sanguíneo, fuera del antígeno A y B, del cual se busca determinar la presencia o la ausencia sobre los eritrocitos de la muestra,

conteniendo cualquier otro contenedor una sola especificidad de anticuerpo; y

- se ponen en contacto en distintos contenedores la suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo A y de grupo

B obtenida en la etapa a) , después de la mezcla de una suspensión de eritrocitos de ensayo con una solución acuosa de ferrofluido, con una muestra de plasma o de suero del individuo,

caracterizado porque en la etapa f) se evalúa mediante lectura a simple vista y/o mediante cualquier otro sistema de lectura apropiado, la presencia eventual de aglutinados eritrocitarios en cada uno de dichos contenedores, 40 permitiendo el conjunto de estas lecturas determinar el grupo ABO del individuo y determinar el fenotipo del individuo para los otros antígenos de grupo sanguíneo buscados.

33. Procedimiento según la reivindicación 30 o 32, caracterizado porque en la etapa b) la muestra de plasma o de suero del individuo se pone en contacto también con una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo O obtenida 45 en la etapa a) .

34. Dispositivo para la determinación por reacción de aglutinación de eritrocitos de la presencia de un antígeno del grupo sanguíneo en la superficie de un eritrocito de una muestra, caracterizado porque comprende:

a) un contenedor que contiene una solución de ferrofluido tal como se define en las reivindicaciones 1 a 13;

b) un contenedor que contiene la suspensión de eritrocitos de la muestra que se debe ensayar;

c) uno o varios contenedores de reacción que contiene un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo 55 sanguíneo.

d) por lo menos un imán o un conjunto de imanes que pueden estar dispuestos en el exterior de dicho o de dichos contenedores y debajo de dicho o dichos contenedores;

e) un sistema de agitación de dicho o dichos contenedores.

35. Dispositivo según la reivindicación 34, caracterizado porque dicho contenedor de reacción es una cúpula de microplaca.

36. Dispositivo según la reivindicación 34 o 35, para el grupo sanguíneo ABO de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque:

-dichos contenedores que contienen una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo conocido contienen 5 distintamente una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo A, una suspensión de eritrocitos de ensayo

de grupo B; y

-dichos contenedores que contienen un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo contienen

distintamente un anticuerpo anti-A y un anticuerpo anti-B. 10

37. Dispositivo según la reivindicación 34 o 35, para el fenotipaje sanguíneo, fuera de la prueba de Simonin, de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque:

-dichos contenedores contienen distintamente un anticuerpo de ensayo específico del antígeno de grupo 15 sanguíneo del cual se busca determinar la presencia o la ausencia sobre los eritrocitos de la muestra.

38. Dispositivo según la reivindicación 34 o 35, para el fenotipaje sanguíneo, prueba de Simonin incluida, de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque:

- dichos contenedores que contienen una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo conocido contienen distintamente una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo A, una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo B; y

-dichos contenedores que contienen un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo contienen

distintamente un anticuerpo anti-A, un anticuerpo anti-B y un anticuerpo de ensayo específico del antígeno de grupo sanguíneo, fuera de ABO, del cual se busca determinar la presencia o la ausencia sobre los eritrocitos de la muestra.

39. Kit para la determinación por reacción de aglutinación de eritrocitos de la presencia de un antígeno del grupo 30 sanguíneo en la superficie de un eritrocito de una muestra, caracterizado porque comprende:

a) uno o varios contenedores de reacción que contienen distintamente un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguineo;

b) una solución de ferrofluido tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 13; y

c) uno o varios imanes pueden ser dispuestos en el exterior debajo del o de los contenedores de reacción.

40. Kit según la reivindicación 39, para el agrupamiento sanguíneo ABO de una muestra de sangre total procedente 40 de un individuo, caracterizado porque:

-dichos contenedores, que contienen además una suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo A, y una

suspensión de eritrocitos de ensayo de grupo B; y

- dichos contenedores que contienen un anticuerpo de ensayo anti-antígeno de grupo sanguíneo contienen distintamente un anticuerpo anti-A y un anticuerpo anti-B.

41. Kit según la reivindicación 40, para el fenotipaje sanguíneo, prueba de Simonin incluida, de una muestra de sangre total procedente de un individuo, caracterizado porque comprende además por lo menos tantos 50 contenedores que contienen distintamente anticuerpos de ensayo específico del antígeno de grupo sanguíneo, diferente del antígeno A y B, del cual se busca determinar la presencia o la ausencia sobre los eritrocitos de la muestra a fenotipar.

42. Kit según una de las reivindicaciones 39 a 41, caracterizado porque dichos anticuerpos de ensayo anti-antígeno 55 de grupo sanguíneo contenidos en dichos contenedores están en forma desecada.

43. Kit según una de las reivindicaciones 39 a 42, caracterizado porque dichos contenedores son unas cúpulas de microplaca.