Un método y unidad para preparar una muestra para el análisis microbiológico de un líquido.

Un método de preparación de una muestra para el análisis microbiológico de un líquido que puede contenermicroorganismos de varios tipos diferentes,

cada uno de los cuales posee características morfológicaspredeterminadas, cuyo método comprende la etapa de hacer una selección de los microorganismos de dichos tiposdiferentes de microorganismos, cuya etapa de hacer una selección comprende:

- la etapa de procurar una unidad (201) para preparar dicha muestra, que comprende un cuerpo generalmentetubular (202) dentro del cual están fijadas una primera (3) y una segunda (4) membranas, cuyo cuerpo (202) tieneuna abertura (207) para introducir dicho líquido, un primer compartimento (226) entre dicha abertura de introducción(207) y dicha primera membrana (3), un segundo compartimento (227) entre dichas primera (3) y segunda (4)membranas, y un tercer compartimento (228) situado sobre el lado opuesto de dicha segunda membrana (4) desdedicha primera membrana (3), cuya primera membrana (3) tiene un primer diámetro de poro predeterminado y cuyasegunda membrana (4) tiene un segundo diámetro de poro predeterminado, menor que dicho primer diámetro deporo predeterminado, de dicha primera membrana (3);

- la etapa de hacer pasar un volumen predeterminado de dicho líquido desde el primer compartimento (226) alsegundo compartimento (227) a través de dicha primera membrana (3);

- la etapa de hacer pasar todo el filtrado, que ha alcanzado de este modo el segundo compartimento (227), desde elsegundo compartimento (227) al tercer compartimento (228) a través de dicha segunda membrana (4) con objeto derecoger dicha muestra sobre dicha segunda membrana (4) con dichos microorganismos seleccionados de dichostipos diferentes de microorganismos que son aquellos cuyo tamaño es menor que el diámetro de poropredeterminado de dicha primera membrana (3) y mayor que el diámetro de poro predeterminado de dicha segundamembrana (4); y

- la etapa de recuperar dicha muestra recogida de este modo sobre dicha segunda membrana (4)caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar unaunidad de preparación (201) en cuyo cuerpo (202) está formada una abertura auxiliar (232) capaz de ser destapadaque comunica con dicho segundo compartimento (227) y por que la etapa de recuperar dicha muestra comprende laetapa de destapar dicha abertura (232), la etapa de depositar un agente para lisar dichos microorganismosseleccionados situados sobre dicha segunda membrana (4) por dicha abertura auxiliar (232) y entonces la etapa dehacer pasar el lisado así formado desde el segundo compartimento (227) al tercer compartimento (228) a través dedicha segunda membrana (4).

Un método y unidad para preparar una muestra para el análisis microbiológico de un líquido La presente invención se refiere a la preparación de una muestra para el análisis microbiológico de un líquido.

Es sabido que existen líquidos que pueden contener diferentes tipos de microorganismos, entre los que el análisis 5 microbiológico solamente debe tener interés por uno o varios tipos.

Estos líquidos existen, por ejemplo, al final de una cadena de fabricación de anticuerpos monoclonales. Más particularmente. tales líquidos que son portadores de células eucarióticas que han permitido producir los anticuerpos, pueden, posiblemente, estar contaminados con bacterias y/o virus.

La presencia de las células eucarióticas puede obstaculizar el análisis microbiológico de las bacterias y virus, o bien por liberación de toxinas que pueden afectar adversamente al crecimiento de los microorganismos en el caso de detección convencional en un medio de crecimiento en estado de gel (detección de falsos negativos) , o bien por perturbación de la lectura de los resultados en el caso de una detección rápida (detección de falsos positivos) por luminiscencia, fluorescencia, por amplificación o hibridación o por cualquier otro método de análisis de los ácidos nucleicos de esos microorganismos.

Con objeto de llevar a cabo un análisis fidedigno de este tipo de líquidos, es apropiado preparar una muestra en la que se haya llevado a cabo una selección de solamente los microorganismos (las bacterias y/o virus en el ejemplo dado anteriormente) pertenecientes a los tipos de microorganismos que se desea detectar.

Ya se conocen métodos de preparación de muestras para el análisis de un líquido en el que los microorganismos a detectar se seleccionan basándose en las diferencias de características morfológicas (físicas y/o químicas) que existen entre los diferentes tipos de microorganismos.

Más particularmente, ya se conoce un método de preparación que comprende una etapa de selección que consiste en añadir al líquido a analizar un reactivo adaptado para llevar a cabo una lisis específica de los microorganismos que pertenecen a los tipos de microorganismos que no se desea mantener en la muestra, filtrar después el líquido sobre una membrana para recoger de este modo sobre esa membrana una muestra que contiene únicamente los microorganismos a detectar y que no han reaccionado específicamente con el agente de lisis (los que han sufrido la lisis han sido destruidos y han atravesado la membrana) . La muestra así recogida se recupera luego para analizarla por medio de técnicas de análisis microbiológico, convencionales o rápidas.

Otro método de preparación de la muestra consiste en separar de los otros los microorganismos a mantener, en virtud de sus diferencias de masa, por centrifugación a baja velocidad.

También se conoce ya otro método, que comprende la etapa de procurar una unidad con dos membranas, cada una de las cuales tiene un diámetro diferente de poro (una membrana para separar los contaminantes. y la segunda para recoger los microorganismos) , conforme al documento US 2004/0.219.628.

La invención se refiere a la preparación de una muestra según un método similar que, al mismo tiempo, tiene un comportamiento mejorado y que es más sencillo y más conveniente para realizar.

A este fin, la invención proporciona un método de `preparación de una muestra para el análisis microbiológico de un líquido que puede contener microorganismos de varios tipos diferentes, cada uno de los cuales posee características morfológicas predeterminadas, cuyo método comprende la etapa de realizar una selección de los microorganismos de dichos tipos de microorganismos , cuya etapa de realizar una selección comprende:

- la etapa de procurar una unidad para prepara dicha muestra, que comprende un cuerpo generalmente tubular

dentro del cual están fijadas una primera y una segunda membranas, cuyo cuerpo tiene una abertura para introducir dicho líquido, un primer compartimento entre dicha abertura de introducción y dicha primera membrana, un segundo compartimento entre dichas primera y segunda membranas, y un tercer compartimento situado sobre el lado opuesto de dicha segunda membrana desde dicha primera membrana, cuya primera membrana tiene un primer diámetro de poro predeterminado y cuya segunda membrana posee un segundo diámetro de poro predeterminado,

menor que dicho primer diámetro de poro predeterminado, de dicha primera membrana;

- la etapa de hacer pasar un volumen predeterminado de dicho líquido desde el primer al segundo compartimento a través de dicha primera membrana;

- la etapa de pasar todo el filtrado, que ha alcanzado de este modo el segundo compartimento, desde el segundo al tercer compartimento a través de dicha segunda membrana con objeto de recoger dicha muestra sobre dicha

segunda membrana con dichos microorganismos seleccionados de dichos tipos diferentes de microorganismos que son aquellos cuyo tamaño es menor que el diámetro de poro predeterminado de dicha primera membrana y mayor que el diámetro de poro predeterminado de dicha segunda membrana; y

- la etapa de recuperar dicha muestra recogida de este modo sobre dicha segunda membrana; caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar una unidad de preparación en cuyo cuerpo está formada una abertura auxiliar capaz de ser destapada, que comunica con dicho segundo compartimento y por que la etapa de recuperar dicha muestra comprende la etapa de destapar dicha abertura, la etapa de depositar un agente para lisar dichos microorganismos seleccionados, sobre dichas

segunda membrana mediante dicha abertura auxiliar, y después la etapa de hacer pasar el lisado formado de este modo desde el segundo al tercer compartimento a través de dicha segunda membrana.

En el método según la invención, la muestra formada con los microorganismos a analizar (bacterias y/o virus, por ejemplo) se recoge sobre la segunda membrana después de haber sido separada de los microorganismos indeseados (por ejemplo, células eucarióticas) de tamaño demasiado grande para atravesar la primera membrana.

Una selección tal de los microorganismos basada en sus diferencias de tamaño es particularmente eficaz, frecuentemente más que la selección de los métodos de la técnica anterior anteriormente citados.

Una explicación de este hecho parece ser que, en el caso de la centrifugación, una parte de los microorganismos a recoger queda retenida por fuerza centrífuga en los microorganismos a eliminar; y, en el caso de lisis química, que el agente de lisis nunca es perfectamente selectivo de tal modo que una proporción pequeña, . no cero, de los microorganismos a recoger sufre lisis y, por tanto, no queda recogida sobre la membrana, mientras que en el método según la invención (selección por tamaño) , tales efectos marginales son desdeñables o incluso no existen-

Según características preferidas, por razones de sencillez y de conveniencia con respecto tanto a la fabricación como al uso, la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar una unidad de preparación cuyo cuerpo comprende una primera parte a la cual está fijada dicha primera membrana y una segunda parte a la cual está fijada dicha segunda membrana, pudiendo separar dichas partes una de otra.

Así pues, es posible, mediante un cuerpo formado con dos parte separables, además de la apertura proporcionada en tal cuerpo, tener acceso a la segunda membrana y más particularmente, a la cara de la segunda membrana sobre la que ha sido recogida la muestra.

Según otras características preferidas, por las mismas razones que las establecidas anteriormente:

-la etapas de hacer pasar dicho líquido a través de dichas membranas se llevan a cabo colocando dicho tercer compartimento a presión reducida;

- las etapas de hacer pasar dicho líquido a través de dichas membranas se llevan a cabo colocando dicho primer compartimento a presión aumentada;

- la etapas de hacer pasar dicho líquido a través de dichas membranas se llevan a cabo por centrifugación de dicha 30 unidad de preparación;

- la etapa de conseguir una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar como dicha primera membrana, una membrana de diámetro de poro mayor que 1 !m;

- la etapa de conseguir una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar como dicha segunda membrana, una membrana de diámetro de poro menor que 0, 65 !m; y/o

- la etapa de conseguir una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar como dicha segunda membrana,... [Seguir leyendo]

1. Un método de preparación de una muestra para el análisis microbiológico de un líquido que puede contener microorganismos de varios tipos diferentes, cada uno de los cuales posee características morfológicas predeterminadas, cuyo método comprende la etapa de hacer una selección de los microorganismos de dichos tipos diferentes de microorganismos, cuya etapa de hacer una selección comprende:

- la etapa de procurar una unidad (201) para preparar dicha muestra, que comprende un cuerpo generalmente tubular (202) dentro del cual están fijadas una primera (3) y una segunda (4) membranas, cuyo cuerpo (202) tiene una abertura (207) para introducir dicho líquido, un primer compartimento (226) entre dicha abertura de introducción

(207) y dicha primera membrana (3) , un segundo compartimento (227) entre dichas primera (3) y segunda (4)

membranas, y un tercer compartimento (228) situado sobre el lado opuesto de dicha segunda membrana (4) desde dicha primera membrana (3) , cuya primera membrana (3) tiene un primer diámetro de poro predeterminado y cuya segunda membrana (4) tiene un segundo diámetro de poro predeterminado, menor que dicho primer diámetro de poro predeterminado, de dicha primera membrana (3) ;

- la etapa de hacer pasar un volumen predeterminado de dicho líquido desde el primer compartimento (226) al 15 segundo compartimento (227) a través de dicha primera membrana (3) ;

- la etapa de hacer pasar todo el filtrado, que ha alcanzado de este modo el segundo compartimento (227) , desde el segundo compartimento (227) al tercer compartimento (228) a través de dicha segunda membrana (4) con objeto de recoger dicha muestra sobre dicha segunda membrana (4) con dichos microorganismos seleccionados de dichos tipos diferentes de microorganismos que son aquellos cuyo tamaño es menor que el diámetro de poro

predeterminado de dicha primera membrana (3) y mayor que el diámetro de poro predeterminado de dicha segunda membrana (4) ; y

- la etapa de recuperar dicha muestra recogida de este modo sobre dicha segunda membrana (4)

caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar una unidad de preparación (201) en cuyo cuerpo (202) está formada una abertura auxiliar (232) capaz de ser destapada que comunica con dicho segundo compartimento (227) y por que la etapa de recuperar dicha muestra comprende la etapa de destapar dicha abertura (232) , la etapa de depositar un agente para lisar dichos microorganismos seleccionados situados sobre dicha segunda membrana (4) por dicha abertura auxiliar (232) y entonces la etapa de hacer pasar el lisado así formado desde el segundo compartimento (227) al tercer compartimento (228) a través de dicha segunda membrana (4) .

2. Un método según la reivindicación 1, caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar una unidad de preparación (201) cuyo cuerpo (202) comprende una primera parte (209) a la que está fijada dicha primera membrana (3) y una segunda parte (210) a la que está fijada dicha segunda membrana (4) , cuyas partes pueden separarse una de otra.

3. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado por que las etapas de hacer pasar

dicho líquido a través de dichas membranas (3, 4) se realizan colocando dicho tercer compartimento (28) a presión reducida.

4. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado por que las etapas de hacer pasar dicho líquido a través de dichas membranas (3, 4) se realizan colocando dicho primer compartimento (26) a presión aumentada.

5. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado por que las etapas de hacer pasar dicho líquido a través de dichas membranas (3, 4) se realizan centrifugando dicha unidad de preparación (201) ,

6. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación (201) comprende la etapa de seleccionar como dicha primera membrana (3) , una membrana de diámetro de poro mayor que 1 !m.

7. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar como dicha segunda membrana (4) , una membrana de diámetro de poro menor que 0, 65 !m.

8. Un método según la reivindicación 7, caracterizado por que la etapa de procurar una unidad de preparación comprende la etapa de seleccionar como dicha segunda membrana, una membrana de diámetro de poro menor que 50 0, 1 !m.

9. Una unidad para preparar una muestra adecuada para la implementación del método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende un cuerpo generalmente tubular (202) en el interior del cual están fijadas una primera (3) y una segunda (4) membranas, cuyo cuerpo (202) tiene una abertura (207) para introducir dicho líquido, un primer compartimento (226) entre dicha abertura de introducción (207) y dicha primera membrana (3) , un segundo compartimento (227) entra dichas primera (3) y segunda (4) membranas, y un tercer compartimento (228) sobre el lado opuesto de dicha segunda membrana (4) desde dicha primera membrana (3) , cuya primera membrana (3) tiene un primer diámetro de poro predeterminado y cuya segunda membrana /4) tiene un segundo diámetro de poro predeterminado menor que dicho primer diámetro de poro predeterminado de dicha primera membrana (3) ;

estando adaptada dicha unidad para pasar un volumen predeterminado de dicho líquido desde el primer al segundo compartimento por dicha primera membrana (3) y hacer pasar luego todo el filtrado, que ha alcanzado de este modo el segundo compartimento (227) , desde el segundo al tercer compartimento a través de dicha segunda membrana (4) con objeto de recoger dicha muestra sobre dicha segunda membrana (4) , cuyo cuerpo comprende también medios (232) para recuperar dicha muestra recogida de este modo sobre dicha segunda membrana (4) ,

caracterizado por que dichos medios de recuperación comprenden una abertura (232) capaz de ser destapada, formada en dicho cuerpo (202) , y que comunica con dicho segundo compartimento (227) .

10. Una unidad según la reivindicación 8, caracterizada por que dicha primera membrana (3) es permeable al aire cuando está húmeda.

11. Una unidad según la reivindicación 10, caracterizada por que los poros de dicha primera membrana (3) tienen 15 un diámetro mayor que 1 !m.

12. Una unidad según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizada por que los poros de dicha segunda membrana (4) tienen un diámetro menor que 0, 65 !m.

13. Una unidad según la reivindicación 12, caracterizada por que los poros de dicha segunda membrana (4) tienen un diámetro menor que 0, 1 !m.

14. Una unidad según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, caracterizada por que dicho cuerpo (202) comprende una primera parte (209) a la que está fijada dicha primera membrana (3) y una segunda parte (210) a la que está fijada dicha segunda membrana (4) .

15. Una unidad según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, caracterizada por que dicho cuerpo (202) comprende un receptáculo (230) que delimita dicho tercer compartimento (228) .

16. Una unidad según la reivindicación 15, caracterizada por que dicho receptáculo (230) puede separarse.