Tratamiento de infecciones fúngicas y/o protistas.

Un polipéptido que tiene hasta 29 aminoácidos o restos miméticos de aminoácidos de la región de unión alreceptor Heparán Sulfato Proteoglicano (HSPG) de apolipoproteína B o apolipoproteína E,

para uso como unmedicamento para el tratamiento de una infección fúngica y/o protista,

donde dicho polipéptido comprende una repetición dimérica en tándem de SEC ID Nº: 5; SEC ID Nº: 6; o SEC ID Nº:7 o restos miméticos de aminoácidos, y donde al menos un resto de aminoácido, distinto de los motivos RKR, puedereemplazarse por una Arginina (R), Tirosina (Y), Metionina (M), Isoleucina (I), Fenilalanina (F), Triptófano (W),Cisteína (C) o restos miméticos de aminoácidos de los mismos.

Tratamiento de infecciones fúngicas y/o protistas La presente invención se refiere a polipéptidos con actividad antifúngica y/o antiprotista para su uso como medicamentos, y también en métodos de tratamiento.

Los péptidos antimicrobianos son un componente clave del sistema inmunitario innato, que contienen generalmente 20-40 aminoácidos, que tienen una carga positiva neta y que se han identificado la mayoría hasta la fecha en especies no mamíferas. Ambos de estos factores limitan su utilidad como compuestos terapéuticos en seres humanos o mamíferos. Esto se debe a dificultades en la producción comercial de dichos péptidos grandes, y el riesgo de efectos adversos de péptidos de origen no humano. En 2006, de las aproximadamente 890 secuencias enumeradas en la base de datos de péptidos antimicrobianos internacional de Trieste (http://www.bbcm.units.it/!tossi/ amsdb.html) , solamente 35 fueron de origen humano, y de estas solamente 3 son de menos de 20 aminoácidos de longitud. También se han desarrollado algunos péptidos antimicrobianos sintéticos cortos. Sin embargo, estos tienen la desventaja de riesgos asociados de efectos antigénicos o tóxicos debido a su origen no humano.

Dichos péptidos se han clasificado en seis grupos (Bradshaw, J. P., Biodrugs, 2003: 17: 235-240) , siendo las tres clases siguientes las más estudiadas (Bowman H. G., Journal of Internal Medicine, 2003: 254: 197-215) :

(i) Péptidos lineales que carecen de cisteínas y con frecuencia con una estructura anfipática ∀ helicoidal en solución, por ejemplo LL-37 Humano (SEC ID Nº: 1) :-LLGDFFRKSKEKIGKEKRI VQRIKDFLRN LVPRTES;

(ii) Péptidos con 3 enlaces disulfuro, que proporcionan a los péptidos una lámina beta dimérica plana, por ejemplo, defensina ∀ Humana:-HNP-1 (SEC ID Nº: 2)

(iii) Péptidos con preferencia inusual en ciertos aminoácidos tales como prolina, arginina, triptófano, o histidina, por ejemplo, PR-39 de cerdo (SEC ID Nº: 3) :-RRRPRPPYLP RPRPPPFFPP RLPPRIPPGF PPRFPPRFP; o indolicidina de vaca (SEC ID Nº: 4) :-ILPWKWPWWP WRR.

Se han descubierto algunos péptidos que tienen la capacidad de inhibir el crecimiento de hongos. Los ejemplos de dichos péptidos incluyen Cecropinas, Buforinas, Pleuoridina, Pirrocoricina, metalnikowina, seperinas, AcAMP1 y Ac-AMP2, Histatinas, Taquiplesina II, Androctonina, Protegrina I, Defensinas ∀ y Defensinas #, Penaeidinas, Taquicitina, Heliomicina, proteína defensina WT1, defensina alfAFP, So-d1-7, DmAMP1. Además, se ha descubierto que algunos péptidos inhiben adicionalmente protozoos (por ejemplo Megainina, y dermaseptina) . Se ha mostrado que otros inhiben tanto hongos como protozoos (por ejemplo Gambicina) . Sin embargo, en la actualidad, el mecanismo de dichos agentes para transmitir sus actividades antifúngicas y/o antiprotozoarias no se entiende completamente.

Varios de los péptidos antibacterianos que se han descrito en la bibliografía científica tienen fuerte carácter catiónico, y con frecuencia consisten en restos de arginina y lisina. Sin embargo, no todos los péptidos que contienen arginina y lisina tienen actividad antimicrobiana. Por ejemplo, Azuma et al. (Peptides, 21: 327-330 (2000) ) han indicado que los derivados peptídicos de apolipoproteína E tienen una fuerte acción antibacteriana, comparable con la de gentamicina. Sin embargo, el péptido de Azuma apoE134-151 (18 aminoácidos de longitud) no tuvo actividad en absoluto a pesar de contener argininas en las posiciones tanto 142 como 147. De forma similar, Azuma demostró

que el péptido apoE134-155 (22 aminoácidos de longitud) tuvo actividad antibacteriana muy baja, y el péptido apoE134159 (26 aminoácidos de longitud) tuvo actividad antibacteriana reducida en gran medida. Finalmente, Azuma et al. solamente investigaron la actividad antibacteriana de los péptidos derivados de apoE, y no evaluaron ningún otro efecto antimicrobiano, por ejemplo, actividad contra hongos o protistas.

El documento WO 02/15923 describe polipéptidos que se usan para el tratamiento de infecciones fúngicas que conducen a complicaciones cardiovasculares.

El documento WO 2005/039534 describe partículas que comprenden uno o varios polipéptidos de unión a lípidos (incluyendo dominio de unión a receptor de LDL ApoE o ApoB) y uno o más agentes bioactivos.

Continuando a partir de la investigación llevada a cabo por Azuma et al., el inventor de la presente invención investigó la acción de ciertos polipéptidos basados en apolipoproteínas B y E, contra virus. El inventor estableció que ciertos polipéptidos tienen actividad antiviral. Los resultados de su investigación se describen en los documentos PCT/GB2004/005438 y PCT/GB2004/005360. Estos polipéptidos antivirales comprenden repeticiones en tándem, y variantes de las mismas, de los péptidos: apoE141-149 (LRKLRKRLL -SEC ID Nº: 5) y apoB3359-3367 (RLTRKRGLK -SEC ID Nº: 6) así como repeticiones de modificaciones estrechamente relacionadas de SEC ID Nº: 5 o SEC ID Nº: 6.

Estos péptidos derivan de o comprenden la región de unión al receptor de LDL / receptor HSPG de las apolipoproteínas E y B. Aunque el inventor no desea quedar ligado a ninguna hipótesis, considera probable que estos polipéptidos antivirales ejerzan sus acciones antivirales por varios mecanismos, estando particularmente favorecidos los que afectan a la unión viral. El inventor sugiere que la dimerización de péptidos derivados de la región de unión al receptor HSPG / receptor de LDL de estas apolipoproteínas (como una repetición en tándem o variantes de la misma) es importante para un efecto antiviral.

A pesar del hecho de que los agentes antivirales no están relacionados con agentes antibacterianos debido a sus modos diferentes de acción en virus y bacterias, respectivamente, el inventor también decidió investigar si los polipéptidos, basados en los péptidos antivirales analizados anteriormente, también tenían alguna propiedad antiviral. Los resultados de esta investigación se describen en el documento PCT/GB2005/000769. Para su sorpresa, el inventor descubrió que, además de la actividad antiviral, estos polipéptidos también mostraban actividad antibacteriana.

El inventor de la presente invención continuó sus investigaciones sobre estos polipéptidos basándose en las apolipoproteínas B y E. En consecuencia, a pesar del hecho de que los agentes antivirales y agentes antibacterianos no están relacionados con agentes antifúngicos y agentes que muestran actividad para otros microorganismos, debido a sus modos diferentes de acción en virus, bacterias y hongos, respectivamente, el inventor de la presente invención también decidió investigar si los polipéptidos, basados en los péptidos antivirales/antibacterianos analizados anteriormente, tuvieron alguna propiedad antifúngica, o mostraron alguna actividad contra cualquier otro microorganismo.

Específicamente, el inventor se planteó si la construcción de una repetición (por ejemplo repeticiones en tándem) de péptidos derivados de la región de unión al receptor HSPG / receptor de LDL de estas apolipoproteínas puede tener

otros efectos antimicrobianos, por ejemplo, contra hongos u otros microorganismos, tales como protozoos. En particular, el inventor se planteó si las repeticiones de la región apoE141-149 podrían mostrar inesperadamente actividad antifúngica y/o antiprotista. Para su sorpresa, descubrió que los polipéptidos, como se definen posteriormente, muestran actividad antifúngica, y también actividad contra otros microorganismos, además de las actividades antivirales y antibacterianas, que se habían demostrado previamente.

De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona la reivindicación 1.

Por la expresión “derivado o análogo del mismo”, los inventores entienden un polipéptido dentro del que se reemplazan restos de aminoácidos por restos (aminoácidos naturales, aminoácidos no naturales o miméticos de aminoácidos) con propiedades de cadena principal peptídica o cadenas laterales similares. Adicionalmente, uno o ambos terminales de dichos péptidos pueden protegerse por grupos protectores N y C terminales, por ejemplo, grupos con propiedades similares a los grupos acetilo o amida. Se apreciará que la secuencia de aminoácidos puede variarse, truncarse o modificarse una vez que se forme el polipéptido final o durante el desarrollo de los péptidos repetidos (por ejemplo, el nonámero) .

Los polipéptidos de acuerdo con la invención comprenden dímeros o polímeros de péptidos ligados N terminal a C terminal de una manera que se conocería por un experto en la materia como una repetición en tándem. En consecuencia, a no ser que el contexto dicte... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que tiene hasta 29 aminoácidos o restos miméticos de aminoácidos de la región de unión al receptor Heparán Sulfato Proteoglicano (HSPG) de apolipoproteína B o apolipoproteína E, para uso como un medicamento para el tratamiento de una infección fúngica y/o protista, donde dicho polipéptido comprende una repetición dimérica en tándem de SEC ID Nº: 5; SEC ID Nº: 6; o SEC ID Nº: 7 o restos miméticos de aminoácidos, y donde al menos un resto de aminoácido, distinto de los motivos RKR, puede reemplazarse por una Arginina (R) , Tirosina (Y) , Metionina (M) , Isoleucina (I) , Fenilalanina (F) , Triptófano (W) , Cisteína (C) o restos miméticos de aminoácidos de los mismos.

2. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde la sustitución de aminoácidos es un resto de Arginina (R) , Fenilalanina (F) o Triptófano (W) , o un resto mimético de aminoácidos de los mismos.

3. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, donde el polipéptido tiene la fórmula;

{abcRKRxyz} + {a’b’c’RKRx’y’z’} (fórmula I)

donde a y a’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) ; Cisteína (C) ; o se suprime; b y b’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Cisteína (C) ; o se suprime; c y c’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ;

Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) ; Treonina (T) ; Cisteína (C) ; o se suprime; x y x’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) ; Glicina (G) ; Cisteína (C) ; o se suprime; y y y’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) ; Cisteína (C) ; o se suprime; z y z’ = se selecciona de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) ; Cisteína (C) ; o se suprime.

4. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 3, donde el polipéptido comprende al menos un aminoácido adicional, que puede seleccionarse de forma independiente de Arginina (R) ; Tirosina (Y) ; Metionina (M) ; Isoleucina (I) ; Fenilalanina (F) ; Triptófano (W) ; Leucina (L) ; Lisina (K) ; Histidina (H) , y añadiéndose dicho aminoácido adicional antes del aminoácido en la posición “a” en el péptido de fórmula I en el extremo N terminal.

5. El polipéptido para uso de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, donde el polipéptido comprende una repetición del péptido apoE141-149 (SEC ID Nº: 5) o un resto mimético de aminoácido del mismo.

6. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la repetición en tándem comprende al menos

dos sustituciones de aminoácidos seleccionadas de forma independiente de sustituciones de Triptófano (W) , 45 Arginina (R) , Lisina (K) , Tirosina (Y) o Fenilalanina (F) .

7. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 5 o 6 donde el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos como se define por una cualquiera de SEC ID Nº.

8. 34.

8. Los polipéptidos para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el polipéptido comprende repeticiones de un péptido derivado de una región de unión al receptor HSPG de apoB.

9. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 8, donde el polipéptido deriva de un grupo B de dominio

de unión al receptor de LDL de apolipoproteína B humano. 55

10. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, donde el polipéptido comprende repetición de apoB3359-3367 (SEC ID Nº: 6) o un resto mimético de aminoácido del mismo.

11. El polipéptido para uso de acuerdo con la reivindicación 10, donde el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos como se define por una cualquiera de SEC ID N.

36. 55.

12. El polipéptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en la prevención o tratamiento de una infección por Ascomycete.

13. El polipéptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en la prevención o tratamiento de una infección con un hongo seleccionado de forma independiente de un grupo que consiste en Aspergillus spp.;

Candida spp.; y Fusarium spp.

14. El polipéptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en la prevención o tratamiento de una infección por Sarcodina. 5

15. El polipéptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para uso en la prevención o tratamiento de una infección con Plasmodium spp o Acanthamoeba spp.

16. Un método ex vivo para prevenir y/o tratar una contaminación fúngica y/o protista que comprende recubrir un

objeto o una superficie que lo necesite con una cantidad de un polipéptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente que es eficaz para destruir o evitar el crecimiento de hongos o protistas.

17. Un método de acuerdo con la reivindicación 16 donde un objeto se recubre y se selecciona de: dispositivos médicos, lentes, lentes de contacto, catéteres, endoprótesis, apósitos de curación de heridas, anticonceptivos, 15 implantes quirúrgicos y articulaciones de reemplazo.

18. Un método de acuerdo con la reivindicación 16 donde una superficie se recubre y la superficie se selecciona de: superficies de pabellones hospitalarios, superficies de quirófanos, superficies de cocinas y superficies sanitarias.

19. Un uso de un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en una solución para prevenir y/o tratar una contaminación fúngica y/o protista de un objeto inanimado o superficie.