Terapias inmunitarias humanas que usan un agonista de CD27 solo o en combinación con otros inmunomoduladores.

Uso de un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo en lapreparación de un medicamento para uso en un método para tratar cáncer,

estando dicho anticuerpo o fragmento opcionalmente unido a un resto efector,seleccionándose dicho anticuerpo o fragmento preferentemente de los siguientes:

(i) un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo seleccionadode un anticuerpo humano, un anticuerpo quimérico preferentemente que contiene una región constantehumana, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo primatizado y anticuerpomonocatenario;

(ii) un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo que contieneal menos un dominio constante humano seleccionado de los dominios constantes de IgG1, IgG2, IgG3,IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD e IgE; o

(iii) un anticuerpo agonista anti CD27 humano que comprende un anticuerpo IgG1 intacto, un anticuerpoIgG2 intacto, un anticuerpo IgG3 intacto, un anticuerpo IgG4 intacto, un anticuerpo IgM intacto, unanticuerpo IgA1 intacto, un anticuerpo IgA2 intacto, un anticuerpo IgA secretor intacto, un anticuerpo IgDintacto, un anticuerpo IgA2 intacto, en el que el anticuerpo está glicosilado en una célula eucariota.

Terapias inmunitarias humanas que usan un agonista de CD27 solo o en combinación con otros inmunomoduladores 5

Campo de la invención La invención se refiere en general al uso de un agonista de CD27, preferentemente un anticuerpo agonista de CD27, como un adyuvante para promover la inmunidad de linfocitos T en el sujeto que lo necesite, por ejemplo, un sujeto con cáncer, infección, enfermedad autoinmunitaria, alergia o trastorno inflamatorio o un sujeto al que se administra una vacuna. Más preferentemente el agonista de CD27 será un anticuerpo intacto humano, humanizado o quimérico o un fragmento del mismo o puede comprender un anticuerpo monocatenario tal como scFv que se une específicamente a CD27 humano. Como alternativa, el agonista puede comprender un anticuerpo modificado por ingeniería genética que se ha modificado para potenciar o reducir sus interacciones con sistemas efectores del

hospedador o para reducir los efectos secundarios adversos. En algunas realizaciones preferidas, la unión de estos anticuerpos agonistas anti CD70 con células inmunitarias no se bloqueará por CD70 o ligandos relacionados.

Adicionalmente, la divulgación proporciona nuevas combinaciones adyuvantes, preferentemente combinaciones sinérgicas, para inducir una respuesta inmunitaria de linfocitos T potenciada en un sujeto que lo necesite que comprenden (i) al menos un agonista de CD27 y (ii) otro inmunoestimulante o inmunomodulador, por ejemplo un anticuerpo de CD40, anticuerpo de CD28, anticuerpo de OX40, anticuerpo de 4-1BB, anti CTLA-4, agonista de TLR (receptor de tipo toll) o un resto que agote los linfocitos T reguladores, o una citocina tal como una interleucina, por ejemplo, IL-2 o un interferón (beta, beta, gamma, etc.) . De forma similar, estas combinaciones de adyuvantes son útiles en el tratamiento de afecciones en las que se desea terapéuticamente inmunidad de linfocitos T potenciada tales como cáncer, enfermedades infecciosas, alergia, autoinmunidad, trastornos inflamatorios y para potenciar la eficacia de vacunas.

Las monoterapias objeto que implican la administración de un agonista de CD27, preferentemente un anticuerpo agonista de CD27 cuya unión con células inmunitarias preferentemente no está bloqueada por CD70 y terapias de combinación que implican la administración de un agonista de CD27 y otro resto tal como otro inmunomodulador o agente terapéutico son útiles en la potenciación de la inmunidad de CTL y proliferación de linfocitos T y supervivencia in vivo. Como se analiza en más detalle posteriormente, la presente invención se basa al menos en parte en la sorprendente observación de los inventores de que se requieren interacciones CD27:CD70 para la actividad agonista de anticuerpos de CD40 (el mAb anti CD70 bloquea completamente la actividad del CD40 35 agonista lo que muestra que se requieren interacciones CD27:CD70 “corriente abajo” del desencadenamiento de CD40) . Esta observación sugirió el potencial terapéutico de los anticuerpos agonistas de CD27 como adyuvantes terapéuticos y para activar e inducir la expansión de linfocitos T específicos de antígeno, particularmente linfocitos T CD8+, es decir, células efectoras y de memoria CD8+ efectoras. Aunque los solicitantes no desean quedar ligados por sus hipótesis, plantean la teoría de que la propiedad agonista de los anticuerpos anti CD27 objeto en linfocitos T puede ser atribuible, al menos en parte, al hecho de que la unión de dichos anticuerpos puede no estar bloqueada por CD70. Sin embargo, la invención no se limita a lo mismo y abarca el uso de cualquier anticuerpo agonista anti CD27 o conjugado o fragmento del mismo que tenga un efecto agonista en la inmunidad de linfocitos T. Como se describe en detalle posteriormente, las presentes monoterapias y terapias de combinación son especialmente útiles en el tratamiento de seres humanos u otros mamíferos con linfomas y otros cánceres o afecciones infecciosas en las 45 que sean terapéuticamente deseables respuestas inmunitarias de CTL específicas de antígeno potenciadas.

Como se ha observado el agonista de CD27 puede administrarse solo o junto con otros restos terapéuticos tales como otros adyuvantes inmunitarios o inmunoestimuladores o inmunomoduladores, con o sin un antígeno adecuado, tal como un péptido de cáncer. Por ejemplo, en una realización el agonista de CD27 puede administrarse en asociación con un anticuerpo agonista de CD40. En esta realización de la invención el agonista de CD40 puede comprender un anticuerpo quimérico agonista anti CD40 humano denominado en el presente documento LOB 7/4 o una variante humanizada del mismo. Se ha demostrado por los inventores que este anticuerpo quimérico induce efectos antitumorales potentes en una serie de tumores que expresan CD40 y que potencia la inmunidad celular. Basándose en estos resultados el uso de este anticuerpo quimérico y variantes del mismo, por ejemplo, versiones 55 humanas o humanizadas del mismo como un adyuvante inmunitario o producto terapéutico para tratar diversas enfermedades crónicas incluyendo cánceres (positivos y negativos para CD40) , especialmente tumores sólidos así como su uso como un adyuvante inmunitario para tratar enfermedades infecciosas, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades alérgicas e inflamatorias se enseñan en una solicitud de patente anterior por algunos de los inventores del presente documento.

En realizaciones preferidas de la invención el agonista de CD27 objeto es un anticuerpo que se usa para tratar cáncer, enfermedades infecciosas, trastornos autoinmunitarios, trastornos alérgicos o trastornos inflamatorios solo o con un antígeno, o se administra junto con una vacuna u otros agentes terapéuticos o inmunoterapéuticos, por ejemplo, un anticuerpo para CD40, OX40, CD28, CTLA-4 o 4-1BB; un agonista de TLR; un resto que agota los 65 linfocitos T reguladores; una citocina; un agente antiangiogénesis; o un producto quimioterapéutico. A lo largo de la presente solicitud cuando se mencionan terapias de combinación, debería entenderse que los restos respectivos tales como anticuerpos agonistas pueden administrarse por separado o en combinación, por ejemplo en la misma o diferentes composiciones, y puede efectuarse administración de los restos respectivos en cualquier orden. Además, se pretende que estas terapias de combinación y monoterapias abarquen la administración de restos adicionales útiles en el tratamiento de la enfermedad o afección particular.

Antecedentes de la invención Se reconoce ahora ampliamente que la generación de inmunidad protectora depende no solamente de la exposición al antígeno, sino también del contexto en el que se encuentra el antígeno. Existen numerosos ejemplos en los que la introducción de un nuevo antígeno en un hospedador en un contexto no inflamatorio genera tolerancia inmunológica en lugar de inmunidad a largo plazo mientras que la exposición al antígeno en presencia de un agente inflamatorio (adyuvante) induce inmunidad (Mondino et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 93: 2245 (1996) ; Pulendran et al., J. Exp. Med. 188: 2075 (1998) ; Jenkins et al., Immunity 1: 443 (1994) ; y Kearney et al., Immunity 1: 327 (1994) ) . Puesto que puede significar la diferencia entre la tolerancia y la inmunidad, se ha puesto mucho esfuerzo en descubrir los “adyuvantes” presentes dentro de agentes infecciosos que estimulan las rutas moleculares implicadas en la creación del contexto inmunogénico apropiado de la presentación de antígenos.

El CD27 es un miembro de la superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral (TNFR) que también incluye TNFR tipo I y II (CD120a y b) , receptor del factor de crecimiento nervioso (NGFR) , CD30, Fas/Apo-1 (CD95) , CD40, 4-1BB y OX40. Se sabe que estas proteínas desempeñan papeles clave en el crecimiento, supervivencia y diferenciación celular así como apoptosis o muerte celular programada. La homología entre estos miembros de la familia se restringe a la región extracelular y se caracteriza por la presencia de un motivo de nudo de cisteína que aparece tres veces en CD27 (McDonald et al., Cell 73: 4121-424 (1993) ) .

CD27 es una proteína transmembrana glicosilada de tipo I de aproximadamente 55 kilodalton y existe como homodímeros con un enlace disulfuro que une los dos monómeros. El enlace disulfuro está en el dominio extracelular cerca de la membrana (Camerini et al., J Immunol. 147: 3165-69 (1991) ) . El ligando para CD27, CD70, pertenece a la familia de ligandos de TNF. CD70 es una proteína transmembrana de tipo II con un peso molecular aparente de 50 kd (Goodwin et al., Cell 73: 447-456 (1993) ) . Basándose en la homología con TNF alfa y beta, se predijo que CD70 tendría una estructura trimérica compuesta de tres subunidades idénticas que interaccionan... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo en la preparación de un medicamento para uso en un método para tratar cáncer,

estando dicho anticuerpo o fragmento opcionalmente unido a un resto efector, seleccionándose dicho anticuerpo o fragmento preferentemente de los siguientes:

(i) un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo seleccionado de un anticuerpo humano, un anticuerpo quimérico preferentemente que contiene una región constante humana, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo primatizado y anticuerpo monocatenario;

(ii) un anticuerpo agonista anti CD27 humano o un fragmento de unión a antígeno del mismo que contiene al menos un dominio constante humano seleccionado de los dominios constantes de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD e IgE; o

(iii) un anticuerpo agonista anti CD27 humano que comprende un anticuerpo IgG1 intacto, un anticuerpo IgG2 intacto, un anticuerpo IgG3 intacto, un anticuerpo IgG4 intacto, un anticuerpo IgM intacto, un anticuerpo IgA1 intacto, un anticuerpo IgA2 intacto, un anticuerpo IgA secretor intacto, un anticuerpo IgD intacto, un anticuerpo IgA2 intacto, en el que el anticuerpo está glicosilado en una célula eucariota.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 donde el anticuerpo agonista o fragmento del mismo posee al menos una de las siguientes propiedades:

(i) reconoce una parte extracelular de CD27 humano;

(ii) la unión del mismo con CD27 no se ve afectada de forma apreciable por CD70 humano o ligandos 25 relacionados con CD70;

(iii) compite con CD70;

(iv) está modificado por ingeniería genética para modificar la unión con los sistemas efectores de anticuerpo, pudiendo ser dicha modificación a) potenciación de la unión, o b) reducción de la unión;

(v) está modificado para alterar al menos uno de glicosilación de Fc, unión con FcR, unión con FcRn, e interacción con proteínas del sistema de complemento;

(vi) comprende una o más modificaciones que se seleccionan de modificaciones que reducen o potencian la

interacción con proteínas del sistema de complemento, o reducen toxicidad indeseable incluyendo la 35 liberación indeseable de citocinas;

(vii) promueve las respuestas inmunitarias de linfocitos T en seres humanos;

(viii) promueve la inmunidad de Th1;

(ix) promueve la proliferación o supervivencia de linfocitos T específicos de antígeno incluyendo al menos uno de linfocitos T CD8+ vírgenes o no vírgenes, linfocitos efectores CD8+ o células de memoria, o linfocitos T que opcionalmente pueden estar modificados por ingeniería genética que se han expandido in vitro y después se han transferido a seres humanos;

(x) induce proliferación, supervivencia y/o respuesta lítica de linfocitos citotóxicos (CTL) de linfocitos T CD8 potenciadas en un sujeto que lo necesite;

(xi) promueve la generación de linfocitos T de memoria específicos de antígeno in vivo; o 45 (xii) conduce la expansión de linfocitos T de una manera dependiente de antígeno in vivo.

3. Uso se acuerdo con la reivindicación 1 o 2 donde el método para tratar cáncer comprende además administrar al menos un anticuerpo agonista anti CD40, OX-40, 4-IBB o CTLA-4 y/o al menos un antígeno o alérgeno; en el que dichos restos pueden administrarse por separado o administrarse en combinación.

4. El uso de la reivindicación 3 donde el método para tratar cáncer da como resultado al menos uno de los siguientes:

(i) promoción de las respuestas inmunitarias de linfocitos T; 55 (ii) promoción de la generación de linfocitos T de memoria específicos de antígeno;

(iii) promoción de la expansión de linfocitos T de una manera dependiente de antígeno;

(iv) promoción de la inmunidad de Th1;

(iv) promueve la proliferación o supervivencia de linfocitos T específicos de antígeno incluyendo al menos uno de linfocitos T CD8+ vírgenes o no vírgenes, células efectoras CD8+, o células de memoria, o linfocitos T que opcionalmente pueden estar modificados por ingeniería genética que se han expandido in vitro y después se han transferido a seres humanos;

(xii) promoción de la generación de linfocitos T de memoria específicos de antígeno in vivo;

(xiii) conduce la expansión de linfocitos T de una manera dependiente de antígeno in vivo; o (xiii) induce la proliferación, supervivencia y/o respuesta lítica de linfocitos citotóxicos (CTL) de linfocitos T 65 CD8 potenciadas en un sujeto que lo necesite.

5. El uso de la reivindicación 4 en el que dicho anticuerpo agonista de CD27 anti CD27 humano o fragmento de unión a antígeno del mismo se administra en combinación con otro resto terapéutico, por ejemplo, uno seleccionado del grupo que consiste en:

(i) otro agonista inmunitario,

(ii) anticuerpo, por ejemplo, un anticuerpo agonista o antagonista anti CD40, por ejemplo, proteína de fusión de CD40L soluble LOB 7/4 013 o fragmento de CD40 soluble o un conjugado de los mismos,

(iii) un anticuerpo anti OX40,

(iv) un anticuerpo anti 4-IBB, 10 (v) un anticuerpo anti CD70,

(vi) un anticuerpo anti B7.1,

(vii) un anticuerpo anti B7.2,

(viii) un anticuerpo anti CTLA-4,

(iix) un anticuerpo anti CD28, 15 (ix) un resto que agota o bloquea los linfocitos T reguladores,

(x) una citocina,

(xi) un producto quimioterapéutico,

(xii) un producto radioterapéutico,

(xiii) un inmunomodulador, 20 (xiv) un inmunoestimulador,

(xv) un anticuerpo estimulador inmunitario o proteína que actúa como un coestimulador positivo,

(xvi) un anticuerpo inmunitario o proteína que actúa como un coestimulador negativo,

(xvii) un anticuerpo u otro resto que bloquea las señales inhibidoras a linfocitos T, y

(xviii) un anticuerpo que se une a células tumorales o vasculatura o estroma. 25

6. El uso de la reivindicación 4 en el que el antígeno es un antígeno asociado a tumor o cáncer seleccionado del grupo que consiste en un péptido asociado a tumor (TAA) , lisado tumoral, células tumorales apoptóticas y células dendríticas portadoras de tumores, por ejemplo, un antígeno de melanoma y la combinación potencia (refuerza) la respuesta inmunitaria inducida contra las células tumorales que expresan el antígeno diana.

7. El uso de la reivindicación 4 que comprende el uso de (i) al menos un agonista de CD27, por ejemplo, un anticuerpo agonista de CD27 o una proteína de fusión de CD70 soluble o un fragmento soluble o conjugado soluble del mismo y (ii) al menos un agonista seleccionado de un agonista de CD40, por ejemplo, un anticuerpo quimérico, humano o humanizado que se une específicamente con CD40 humano, más preferentemente SC26, CP-870, 693, 35 LOB 714 o un derivado de los mismos o un anticuerpo que posee la misma especificidad epitópica; un anticuerpo de 4-IBB (CD 137) , un anticuerpo de OX-40, un anticuerpo de CD28 y un anticuerpo de CTLA-4 y donde dichos agonistas se administran por separado, en cualquier orden, o en combinación donde dicha administración que da como resultado la inducción de forma aditiva o sinérgica de una respuesta de linfocitos T potenciada que comprende administrar al sujeto que lo necesite una cantidad aditiva o sinérgicamente eficaz de (i) al menos un agonista de 40 CD27 y (ii) al menos un agonista seleccionado de un agonista de CD40, un anticuerpo de 4-IBB (CD 137) , un anticuerpo de OX-40, un anticuerpo de CD25 y un anticuerpo de CTLA-4, y en el que dichos agonistas se administran por separado, en cualquier orden, o en combinación y opcionalmente que incluye además la administración de un antígeno, por ejemplo, seleccionado de un antígeno tumoral, antígeno bacteriano, antígeno viral, antígeno parasitario, alérgeno y autoantígeno y dicho uso incluye además opcionalmente la administración de 45 al menos un producto quimioterapéutico o citocina, por ejemplo, un interferón, interleucina, factor de necrosis tumoral o factor estimulante de colonias.

8. El uso de la reivindicación 7 donde dichos agonistas se administran en un intervalo de un día entre sí, más preferentemente en un intervalo de 8 horas entre sí o en un intervalo de 1-4 horas entre sí. 50

9. El uso de la reivindicación 7 que se usa para tratar cáncer que expresa CD40 o un cáncer seleccionado del grupo que consiste en: cáncer de mama, de hígado, ovárico, colorrectal, de pulmón, de estómago, de riñón, melanoma, ovárico o renal y linfoma, por ejemplo, linfoma no de Hodgkin.

10. Un anticuerpo agonista anti CD27 humano, o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y/o al menos un antígeno o alérgeno para uso simultáneo, separado o secuencial en un método para tratar cáncer.

11. Un anticuerpo agonista anti CD27 humano, o un fragmento de unión a antígeno del mismo para uso en el

tratamiento de cáncer. 60

12. El anticuerpo agonista anti CD27 humano, o un fragmento de unión a antígeno del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 11 en el que el anticuerpo o fragmento posee al menos una de las propiedades definidas en la reivindicación 2.