Sistemas y métodos para preparar pegamento de fibrina autólogo.

Un sistema para preparar una red de fibrina sólida adecuada para regenerar tejido en un organismo vivo,

comprendiendo el sistema:

un primer recipiente precintado (10) que incluye un medio de separación (26), pudiendo extraerse sangre alprimer recipiente, siendo capaz el medio de separación (26) de separar plasma (34) de glóbulos rojos (30)cuando el primer recipiente contiene sangre y se centrifuga;

un segundo recipiente (14);

un dispositivo de transferencia (18) capaz de transferir al menos el plasma (34) del primer recipiente (10) alsegundo recipiente (14) mediante diferenciación de presión mientras al menos los glóbulos rojos (30)permanecen en el primer recipiente (10) incluyendo el primer recipiente (10) un fluido de baja densidad y altaviscosidad (28) capaz de bloquear o eliminar el flujo a través del dispositivo de transferencia (18) tras su entradaen el mismo; y

un activador de coagulación de calcio (36) capaz de coagular el plasma (34) cuando entra en contacto con elmismo.

Sistemas y métodos para preparar pegamento de fibrina autólogo.

Remisión a solicitudes relacionadas La presente solicitud es una continuación parcial de y reivindica prioridad a la solicitud de Estados Unidos Nº 09/446.729 presentada el 13 de julio de 2001 que se expidió como patente de Estados Unidos Nº 6.368.298 B1, que es una solicitud de 35 U.S.C. § 371 de y reivindica prioridad a la solicitud internacional Nº PCr/IT98/00173

presentada el 24 de junio 1998, que reivindica prioridad a la solicitud italiana Nº MI97A001490 presentada el 24 de junio de 1997. La presente solicitud reivindica prioridad a cada una de las solicitudes mencionadas anteriormente.

Antecedentes de la invención La presente invención se refiere a sistemas, kits y métodos para preparar una red de fibrina sólida o pegamento de fibrina autólogo.

Se sabe que el pegamento de fibrina es un hemoderivado que se usa en gran medida como adhesivo quirúrgico tópico o agente hemostático. Están disponibles varios kits en el mercado que contienen fibrinógeno concentrado de 20 donantes, asociado a un activador proteico de origen humano o animal, tal como trombina o batroxobina, para obtener pegamento de fibrina heterólogo.

Dichos kits conocidos implican el uso de material de origen humano o animal que, debido a su origen, podría provocar posible contaminación viral y graves riesgos para el destinatario del pegamento de fibrina. En el pasado las autoridades han obligado a suspender la comercialización o incluso a prohibir los hemoderivados obtenidos mediante el uso de material de origen humano o animal. Además, a partir de la bibliografía se conocen casos de rechazo resultantes del reimplante de fibrina producidos por el uso de proteínas humanas o animales en pacientes. Dichos casos de hecho se deben al origen heterólogo, con respecto al organismo receptor, de la proteína sellante que se reimplanta o algunos de los componentes usados para prepararla.

El pegamento de fibrina autólogo, es decir, pegamento de fibrina obtenido de forma autóloga de la propia sangre de un paciente, es más fiable con respecto a los riesgos de rechazo y/o infección. Ya se han descrito varios procedimientos para obtener de forma improvisada pegamento de fibrina autólogo, pero no existe un kit "listo para su uso" disponible en el mercado aunque pueden hallarse algunas referencias relevantes en la bibliografía de patentes.

La patente de Estados Unidos Nº 5.733.545 desvela una concentrado plasmático de capa leuco-plaquetaria a combinar con un activador de fibrinógeno para formar un sellante de heridas de pegamento de plaquetas. El método desvelado en esta patente permite que se procese la sangre de un paciente para obtener pegamento de fibrina autólogo, pero los métodos usan trombina o batroxobina como activador de fibrinógeno. Estos activadores son de naturaleza humana o animal y por lo tanto aún implican el riesgo de rechazo y/o infecciones viral para el paciente.

El documento WO 98/58689 representa un kit listo para su uso para preparar pegamento de fibrina autólogo. Comprende un recipiente precintado que contiene cloruro de calcio como activador de la coagulación y, posiblemente, ácido tranexámico o ácido épsilon-amino-caproico como estabilizador de fibrina. Para producir 45 pegamento de fibrina autólogo, se extrae sangre venosa de un paciente, por ejemplo usando tubos de ensayo estériles. El tubo de ensayo después se introduce en una centrífuga adecuada. La muestra se centrifuga, separando de este modo los glóbulos rojos del plasma citrado. El tubo de ensayo que contiene el plasma separado se mantiene tapado en condiciones estériles y se coloca verticalmente en un pedestal para recuperar el propio plasma. La parte exterior de la tapa del tubo de ensayo entonces se esteriliza usando alcohol desnaturalizado y después se introduce 50 una aguja estéril, que está conectada a una jeringa estéril, en la tapa del tubo de ensayo. La aguja se lleva hasta 3 a 4 mm del menisco que separa las dos fases, y se extraen 4 ml de plasma. Usando la misma aguja, se perfora la tapa del recipiente mencionado anteriormente, que se ha esterilizado previamente usando alcohol. El plasma citrado contenido en la jeringa se aspira completamente en el recipiente. Éste se agita suavemente y, después de aproximadamente dos minutos a 37 ºC, se obtiene un coágulo de pegamento de fibrina autólogo estéril.

La patente de Estados Unidos Nº 5.555.007 desvela un método y un aparato para preparar plasma concentrado a usar como sellante tisular. El método consiste en separar el plasma de sangre completa y retirar el agua de dicho plasma poniéndolo en contacto con un concentrador para proporcionar plasma concentrado que después de ello puede coagularse con una solución que contenga trombina y calcio. El aparato comprende un primer separador de 60 centrífuga en una primera cámara, un concentrador (por ejemplo, dextranómero o poliacrilamida) incluido en una segunda cámara que comunica con la primera cámara, y un segundo separador. El método desvelado en esta referencia requiere un largo tiempo para obtener el concentrado de plasma necesario para la posterior preparación de pegamento de fibrina autólogo y el aparato es caro y no desechable. El método no desvela el uso de de un activador de la coagulación de calcio, y requiere una etapa de pre-concentración.

Muchos métodos y sistemas requieren la transferencia de un fluido desde un recipiente a otro. Por ejemplo, muchos dispositivos químicos y médicos requieren la transferencia de un volumen necesario de líquido a hacer reaccionar secuencialmente con diversos reactivos y alícuotas volumétricas específicas. Una práctica común es retirar los cierres en dos recipientes y pipetear el líquido de un recipiente en el otro. Esta práctica, sin embargo, expone la muestra a contaminantes ambientales. Por ejemplo, esta técnica se usa para transferir plasma que se ha separado de los glóbulos rojos en una muestra de sangre. Se requiere una técnica especial, sin embargo, para retirar el plasma en el menisco de contacto. Frecuentemente los glóbulos rojos de alta densidad, indeseables, de la fracción inferior contaminan la muestra aspirada. Para evitar este problema, la pipeta frecuentemente se mantiene a una distancia segura del menisco (es decir el separador entre el plasma y los glóbulos rojos) , provocando de este modo una transferencia incompleta de la muestra. La transferencia incompleta de la fracción deseable produce una producción volumétrica inferior al óptimo y proporciones no estequiométricas de los reactivos de muestra y los del segundo recipiente. Esta segunda condición puede ser una seria fuente de variación del rendimiento del producto.Éste es el caso en muchas reacciones enzimáticas en que las velocidades de reacción son máximas en ciertas proporciones estequiométricas y disminuyen rápidamente a proporciones superiores o inferiores.

Globalmente, se desean métodos y sistemas para preparar pegamento de fibrina autólogo o fibrina sólida que sea capaz de regenerar tejido en un organismo vivo.

Descripción detallada de los dibujos La Figura 1 es una vista en perspectiva de una primera realización de la invención.

La Figura 2 es una vista en sección transversal de un primer recipiente de la primera realización mostrada en la Fig. 1.

La Figura 3 es una vista en sección transversal de una diferente realización del primer recipiente de la Fig. 2.

La Figura 4 es una vista en sección transversal de una diferente realización del primer recipiente de la Fig. 2. La Figura 5 es una vista parcial ampliada en sección transversal de una parte de la primera realización de la Fig. 1 que representa un primer extremo de un dispositivo de transferencia empezando a perforar un primer recipiente precintado. Figura 6 es una vista similar a la expuesta en la Fig. 5 que representa el primer extremo del dispositivo de transferencia perforando completamente el primer recipiente precintado y un segundo extremo del dispositivo de transferencia perforando completamente un segundo recipiente precintado. La Figura 7 es una vista similar a la Fig. 2 que muestra el primer tubo y sus contenidos invertidos. La Figura 8 es una vista superior en planta de la primera realización mostrada en la Fig. 1. La Figura 9 es una vista parcial en sección transversal de la Fig. 8 que muestra el primer recipiente, el segundo recipiente y el dispositivo de transferencia acoplado, y los contenidos del primer recipiente transfiriéndose al segundo recipiente. La Figura 10 es una vista superior en planta de un kit que plasma la invención. La Figura 11 es una vista en perspectiva de un sistema integrado. La Figura 12 es una vista en sección transversal del sistema mostrado en la Fig. 11. La... [Seguir leyendo]

1. Un sistema para preparar una red de fibrina sólida adecuada para regenerar tejido en un organismo vivo, comprendiendo el sistema:

un primer recipiente precintado (10) que incluye un medio de separación (26) , pudiendo extraerse sangre al primer recipiente, siendo capaz el medio de separación (26) de separar plasma (34) de glóbulos rojos (30) cuando el primer recipiente contiene sangre y se centrifuga; un segundo recipiente (14) ;

un dispositivo de transferencia (18) capaz de transferir al menos el plasma (34) del primer recipiente (10) al segundo recipiente (14) mediante diferenciación de presión mientras al menos los glóbulos rojos (30) permanecen en el primer recipiente (10) incluyendo el primer recipiente (10) un fluido de baja densidad y alta viscosidad (28) capaz de bloquear o eliminar el flujo a través del dispositivo de transferencia (18) tras su entrada en el mismo; y

un activador de coagulación de calcio (36) capaz de coagular el plasma (34) cuando entra en contacto con el mismo.

2. El sistema de la reivindicación 1, donde el activador de coagulación de calcio (36) es al menos uno de cloruro cálcico, fluoruro cálcico, carbonato cálcico, gluconato cálcico, fumarato cálcico, piruvato cálcico y combinaciones de 20 los mismos.

3. El sistema de la reivindicación 1 o 2, donde el medio de separación (26) es al menos uno de un gel, perlas de plástico y un dispositivo flotante polimérico.

4. El sistema de una de las reivindicaciones 1 a 3, donde el segundo recipiente (14) se evacúa.

5. El sistema de una de las reivindicaciones 1 a 4, donde el primer recipiente (10) incluye un anticoagulante (25) .

6. El sistema de una de las reivindicaciones 1 a 5, donde el activador de coagulación de calcio (36) entra en contacto 30 con el plasma (34) en el segundo recipiente (14) .

7. El sistema de una de las reivindicaciones 1 a 6 donde el primer recipiente (10) incluye una primera presión y el segundo recipiente (14) incluye una segunda presión, y donde la segunda presión es menor que la primera presión.

8. Un método para preparar una red de fibrina sólida capaz de regenerar tejido en un organismo vivo, comprendiendo el método:

extraer sangre de un paciente en un primer recipiente (10) que tiene un medio de separación (26) capaz de separar plasma (34) y glóbulos rojos (30) ;

centrifugar el primer recipiente (10) a una velocidad suficiente para separar el plasma (34) de los glóbulos rojos (30) ; conectar un montaje de aguja (18, 28) con el primer recipiente (10) y con un segundo recipiente (14) de modo que el montaje de aguja proporcione comunicación fluida entre el primer recipiente y el segundo recipiente; transferir al menos el plasma (34) del primer recipiente (10) al segundo recipiente (14) a través del montaje de 45 aguja mediante diferenciación de presión mientras al menos los glóbulos rojos (30) permanecen en el primer recipiente (10) bloqueando o eliminando el flujo a través del dispositivo de transferencia tras su entrada en el mismo por un fluido de baja densidad y alta viscosidad (28) en dicho primer recipiente; y poner en contacto el plasma (34) con un activador de coagulación de calcio (36) para activar el fibrinógeno en el plasma.

9. El método polimérico de la reivindicación 8, donde el medio de separación (26) es al menos uno de un gel, perlas de plástico y un dispositivo flotante polimérico.

10. El método de la reivindicación 8 o 9, donde el segundo recipiente (14) se evacúa. 55

11. El método como en las reivindicaciones 8 a 10, donde el activador de coagulación de calcio (36) se selecciona de cloruro cálcico, fluoruro cálcico, carbonato cálcico, gluconato cálcico, fumarato cálcico, piruvato cálcico y combinaciones de los mismos.

12. El método de una de las reivindicaciones 8 a 11, donde poner en contacto el plasma (34) con el activador de coagulación de calcio (36) incluye añadir el activador de coagulación de calcio (36) al segundo recipiente (14) .

13. El método de una de las reivindicaciones 8 a 12, donde el primer recipiente (10) incluye una primera presión y el

segundo recipiente (14) incluye una segunda presión, y donde la segunda presión es menor que la primera presión. 65