Proteínas de fusión de alérgenos de gato y utilización de las mismas.

Composición que comprende:

(a) una partícula de núcleo con,

como mínimo, un primer lugar de unión, en la que dicha partícula de núcleoes una partícula de tipo viral (PTV)

(b) como mínimo, un antígeno con, como mínimo, un segundo lugar de unión,

en la que dicho, como mínimo, un antígeno es una proteína Fel d1, en la que dicha proteína Fel d1 es una proteínade fusión que comprende la cadena 1 de la Fel d1 y la cadena 2 de la Fel d1, en la que dicha cadena 2 de la Fel d1está fusionada a través de su extremo C-terminal con el extremo N-terminal de dicha cadena 1 de la Fel d1 biendirectamente o bien a través de un espaciador, y en la que (a) y (b) están covalentemente enlazadas a través dedicho, como mínimo, un primer y dicho, como mínimo, un segundo lugar de unión.

Proteínas de fusión de alérgenos de gato y utilización de las mismas

TÉCNICA ANTERIOR

Sector de la presente invención La presente invención corresponde al sector de la medicina, salud pública, inmunología, biología molecular y virología. La presente invención da a conocer composiciones que comprenden una partícula de tipo viral (PTV) o una partícula viral y, como mínimo, un antígeno, en particular, como mínimo, un antígeno felino, y más particularmente, como mínimo, un antígeno felino que es un alérgeno humano. En ciertas realizaciones, el antígeno es un antígeno Fel d1 o un fragmento del mismo, enlazado covalentemente a la PTV. La presente invención da a conocer además métodos para producir las composiciones. Las composiciones de la presente invención inducen respuestas inmunes eficientes, en particular respuestas de anticuerpos, en mamíferos, particularmente en seres humanos. Las composiciones y métodos de la presente invención son útiles en la producción de vacunas, en particular para el tratamiento y/o la prevención de alergia a la caspa de gato y a otros antígenos y alérgenos de gato.

Técnica relacionada El gato doméstico (Felis domesticus) es una fuente importante de alérgenos en interiores (Lau, S. y otros (2000) Lancet 356, 1392-1397) . De hecho, los gatos se encuentran en aproximadamente el 25% de los hogares en los países occidentales y la alergia a los gatos se encuentra en una gran parte de la población. La gravedad de los síntomas va desde rinitis y conjuntivitis relativamente leves a exacerbación asmática potencialmente mortal.

Aunque los pacientes en ocasiones se sensibilizan a varias moléculas diferentes en la caspa y pieles de gato, el principal alérgeno es Fel d1 (es decir, alérgeno 1 de Felis domesticus, anteriormente Cat 1, es decir, Alérgeno de gato 1) . La importancia de este alérgeno se ha enfatizado en numerosos estudios. De hecho, más de 80% de los pacientes alérgicos a los gatos presentan anticuerpos IgE frente a este potente alérgeno (van Ree, R. y otros (1999)

J. Allergy Clin Immunol 104, 1223-1230) .

Fel d1 es una glicoproteína ácida de 35-39 KDa que contiene un 10-20% de carbohidratos unidos a N y se encuentra en la piel, la saliva y las glándulas lagrimales de los gatos. Está formada por dos heterodímeros enlazados no covalentemente. Cada heterodímero comprende un péptido de 70 residuos (conocido como "cadena 1") y un péptido 78, 85, 90 ó 92 residuos (conocido como "cadena 2") que son codificados por genes separados (véase Duffort, O. A. y otros (1991) Mol Immunol 28, 301-309; Morgenstern, J. P. y otros, (1991) Proc Natl Acad Sci EE.UU. 88, 96909694 y Griffith, I. J. y otros (1992) Gene 113, 263-268) .

Se ha descrito por Kaiser y otros 2.003 (J Biol Chem 278 (39) :37730-5) que la Fel d1 recombinante, que comprende la cadena 2 y la cadena 1 fusionadas conjuntamente sin ningún conector adicional, tiene propiedades inmunológicas indistinguibles de la proteína natural heterodimérica. Grönlund y otros, 2003 (J Biol Chem 278 (41) :40144-51) produjeron una Fel d1 recombinante plegada con propiedades moleculares y biológicas similares a las de su correspondiente natural. Se construyó un gen sintético que codifica la fusión directa del extremo N-terminal de la cadena 2 de Fel d1 a la cadena 1 mediante el solapamiento de oligonucleótidos en PCR. (1992 Gene, 113, 263268) .

El tratamiento de los pacientes alérgicos a los gatos se lleva a cabo actualmente mediante la terapia de desensibilización, que implica inyecciones repetidas con dosis crecientes de un extracto crudo de caspa de gato o péptidos cortos derivados de Fel d1. Lilja y otros y Hedlin y otros han descrito un programa de desensibilización en el curso del cual extractos crudos de caspa de gato se han suministrado a pacientes alérgicos a los gatos (Lilja, Q y otros (1989) J Allergy Clin Immunol 83, 37-44 y Hedlin y otros (1991) J Allergy Clin Immunol 87, 955-964) . Este programa duró como mínimo dos o tres años y los pacientes después de tratamiento de tres años seguían teniendo síntomas sistémicos. La utilización de péptidos cortos derivados de Fel d1 para la desensibilización dio como resultado una diferencia no significativa entre el grupo de péptidos y el grupo de placebo (Oldfield, W. L. y otros (2002) Lancet 360, 47-53) . Sólo se observó eficacia cuando se le dio gran cantidad (750 μg) del péptido corto a los pacientes (Norman, P. S. y otros (1996) Am J Respir Crit Care Med 154, 1623-1628) .

Efectos secundarios alérgicos, tales como reacciones asmáticas tardías, han sido descritos tanto en el tratamiento con extracto crudo de caspa de gato como en el tratamiento con péptidos cortos. Por lo tanto, el choque anafiláctico debido al alérgeno inyectado es de gran preocupación para la seguridad de cualquier programa de desensibilización. Sin embargo, evitar dicho efecto mediante la reducción de la cantidad inyectada de alérgeno, o bien reduce la eficacia del tratamiento o bien prolonga el tratamiento. Por lo tanto, en el sector del tratamiento de la alergia a los gatos, existe una gran necesidad de regímenes alternativos de desensibilización y, en particular, de regímenes de desensibilización que sean capaces de reducir los síntomas alérgicos, pero que no desencadenen reacciones alérgicas secundarias.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

Ahora, los presentes inventores han descubierto que, sorprendentemente las composiciones y vacunas de la presente invención, respectivamente, que comprenden, como mínimo, un antígeno Fel d1 de la presente invención, no sólo son capaces de inducir respuestas inmunes contra Fel d1 y, en particular, respuestas de anticuerpos, sino que son capaces además de desensibilizar a un paciente que sufre de alergia a los gatos y, en particular, dentro de un período corto de tiempo, lo que indica la elevada eficacia de las composiciones y vacunas de la presente invención, respectivamente. Además, los presentes inventores han descubierto que, sorprendentemente, la Fel d1 de la presente invención, cuando se une covalentemente a la PTV, según la presente invención, reduce drásticamente la actividad anafiláctica en comparación con la Fel d1 de la presente invención no enlazada de forma covalente a PTV, manteniendo un elevado grado de antigenicidad y inmunogenicidad. Esta es una gran ventaja sobre la técnica anterior para el tratamiento de la alergia a los gatos, dado que las composiciones y las vacunas de la presente invención, respectivamente, reducen drásticamente el riesgo de provocar un shock anafiláctico en los animales y seres humanos que van a ser inmunizados. Además, las composiciones y las vacunas de la presente invención, respectivamente, permiten que el antígeno se administre en dosis mucho más elevadas en comparación con los tratamientos para alergias a los gatos de la técnica anterior, lo que puede a su vez mejorar la eficacia y/o acortar la totalidad del programa de desensibilización. Por lo tanto, las composiciones y vacunas de la presente invención, respectivamente, inducen respuestas inmunes anti-Fel d1 potentes pero no desencadenan una reacción alérgica.

De este modo, en un primer aspecto, la presente invención da a conocer una composición que comprende (a) una partícula de núcleo con, como mínimo, un primer lugar de unión, en la que dicha partícula de núcleo es una partícula de tipo viral (PTV) , (b) , como mínimo, un antígeno con, como mínimo, un segundo lugar de unión, en el que dicho, como mínimo, un antígeno es la proteína Fel d1, en la que dicha proteína Fel d1 es una proteína de fusión que comprende la cadena 1 de la Fel d1 y la cadena 2 de la Fel d1, en la que dicha cadena 2 de la Fel d1 se fusiona a través del extremo C-terminal al extremo N-terminal de dicha cadena 1 de la Fel d1 bien directamente mediante un enlace peptídico o bien mediante un espaciador, y en el que (a) y (b) están enlazados covalentemente a través de dicho, como mínimo, primer y dicho, como mínimo, segundo lugar de unión.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer una composición de vacuna. Además, se da a conocer un método para la administración de la composición de vacuna a un ser humano o a un mamífero no humano, tal como un perro, que es alérgico a los gatos, preferentemente a la Fel d1 de gato. En una realización preferente, la composición de vacuna comprende además, como mínimo, un adyuvante. Sin embargo, la composición de vacuna de la presente invención es capaz de inducir una fuerte respuesta inmune, en particular respuesta de anticuerpos, sin la presencia de, como mínimo, un adyuvante. De este modo, en una realización preferente, la vacuna está desprovista de un adyuvante. Evitar la utilización de adyuvantes puede reducir... [Seguir leyendo]

1. Composición que comprende:

(a) una partícula de núcleo con, como mínimo, un primer lugar de unión, en la que dicha partícula de núcleo es una partícula de tipo viral (PTV)

(b) como mínimo, un antígeno con, como mínimo, un segundo lugar de unión,

en la que dicho, como mínimo, un antígeno es una proteína Fel d1, en la que dicha proteína Fel d1 es una proteína de fusión que comprende la cadena 1 de la Fel d1 y la cadena 2 de la Fel d1, en la que dicha cadena 2 de la Fel d1 está fusionada a través de su extremo C-terminal con el extremo N-terminal de dicha cadena 1 de la Fel d1 bien directamente o bien a través de un espaciador, y en la que (a) y (b) están covalentemente enlazadas a través de dicho, como mínimo, un primer y dicho, como mínimo, un segundo lugar de unión.

2. Composición, según la reivindicación 1, en la que dicha cadena 2 de la Fel d1 está fusionada a través de su extremo N-terminal con el extremo C-terminal de dicha cadena 1 de la Fel d1 a través de un espaciador, en el que dicho espaciador está compuesto preferentemente por una secuencia de aminoácidos que tiene 1-20 residuos de aminoácidos, en la que preferentemente dicho espaciador consiste en una secuencia de aminoácidos que tiene 1-20 residuos de aminoácidos.

3. Composición, según la reivindicación 2, en la que dicho espaciador es (GGGGS) 3.

4. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que dicha proteína de fusión comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que comprende:

(a) Sec. No. Id.: 24;

(b) Sec. No. Id.: 54; y

(C) Sec. No. Id.: 55;

5. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que dicha cadena 1 de la Fel d 1 comprende una secuencia de Sec. No. Id.: 22 o una secuencia homóloga a la misma, en la que dicha secuencia homóloga tiene una identidad con la Sec. No. Id.: 22 mayor del 80%, preferentemente mayor del 90%, o aún más preferentemente mayor del 95%.

6. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que dicha cadena 2 de la Fel d 1 comprende una secuencia de Sec. No. Id.: 23, Sec. No. Id.: 25 o Sec. No. Id.: 26, o una secuencia homóloga a las mismas, en la que dicha secuencia homóloga tiene una identidad con las Sec. No. Id.: 23, Sec. No. Id.: 25 o la Sec. No. Id.: 26 mayor del 80%, preferentemente mayor del 90%, y aún más preferentemente mayor del 95%.

7. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en la que dicha partícula de tipo viral es una partícula de tipo viral de un bacteriófago de ARN, en la que dicho bacteriófago de ARN se selecciona de Qβ, fr, GA o AP205.

8. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho primer lugar de unión comprende, o preferentemente es, un grupo amino, preferentemente un grupo amino de una lisina.

9. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho segundo lugar de unión comprende, o preferentemente es, un grupo sulfhidrilo, preferentemente un grupo sulfhidrilo de una cisteína.

10. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicha partícula de tipo viral con dicho, como mínimo, un primer lugar de unión, se enlaza con dicha, como mínimo, una proteína Fel d1 con dicho, como mínimo, un segundo lugar de unión a través de un enlace covalente no peptídico.

11. Composición, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un conector, en la que dicho conector se fusiona con el extremo C-terminal de dicha proteína Fel d1, y en la que preferentemente dicho conector comprende dicho segundo lugar de unión.

12. Vacuna que comprende la composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en la que dicha vacuna comprende además, como mínimo, un adyuvante.

13. Composición farmacéutica que comprende:

(a) la composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-9; y

(b) un portador aceptable farmacéuticamente.

14. Método de producción de la composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, que comprende:

(a) proporcionar una partícula de núcleo con, como mínimo, un primer lugar de unión, en el que dicha partícula de núcleo es una partícula de tipo viral (PTV) ;

(b) proporcionar, como mínimo, un antígeno con, como mínimo, un segundo lugar de unión, en el que dicho antígeno es una proteína Fel d1, en el que dicha proteína Fel d1 es una proteína de fusión que comprende la

cadena 1 de la Fel d1 y la cadena 2 de la Fel d1, en el que dicha cadena 2 de la Fel d1 se fusiona a través de su extremo C-terminal con el extremo N-terminal de dicha cadena 1 de la Fel d1 bien directamente o bien a través de un espaciador; y

(c) enlazar dicha partícula de núcleo y dicho, como mínimo, un antígeno para producir dicha composición, en la que dicho, como mínimo, un antígeno y dicha partícula de núcleo están enlazados a través de dicho, como 10 mínimo, un primer y dicho, como mínimo, un segundo lugar de unión.

15. Utilización de la composición, según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la alergia a los gatos.