Moléculas pequeñas que sustituyen o agonizan la función p53.

Una composición que comprende un compuesto que promueve muerte celular en una célula p53 intacta,

comprendiendo dicho compuesto la fórmula:

donde:

R1 y R4 se seleccionan independientemente del grupo consistente en un grupo amino, un grupo ciano, ungrupo nitro, un grupo carboxilo, halo, hidroxilo, SO2, C1-6 alquilo, C1-6 haloalquilo, C1-8 alcoxil, C1-11 alcoxialquil, C1-6alquilamino, C1-6 aminoalquilo;

R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo consistente en CH, N;

R5 es CH2 u O;

R6 se seleccionan independientemente del grupo consistente CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado o noramificado saturado o no saturado, alcoxi C1-10 ramificado o no ramificado, acilo C1-10 ramificado o no ramificado,aciloxi C1-10 ramificado o no ramificado, alquitio C1-10 ramificado o no ramificado, aminosulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi,arilsulfonilo, heteroarilo heteroariloxi;

R7 se seleccionan independientemente del grupo consistente en H, CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado o noramificado saturado o no saturado, alcoxi C1-10 ramificado o no ramificado, acilo C1-10 ramificado o no ramificado,aciloxi C1-10 ramificado o no ramificado, alquitio C1-10 ramificado o no ramificado, aminosulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi,arilsulfonilo, heteroarilo heteroariloxi;

R8 se selecciona del grupo consistente NO2, OH, COOH;

R9 se selecciona del grupo consistente en H, CH3;

o un éster o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos donde dicho compuesto está en un excipientefarmacéuticamente aceptable.

Moléculas pequeñas que sustituyen o agonizan la función p53.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención pertenece al campo de la oncología. En particular esta invención proporciona compuestos que sustituyen y/o agonizan la función p53 y métodos para identificar tales compuestos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Dos tercios de todos los cánceres de mama manifiestan mutaciones en el supresor de tumor p53 (Lai et al. (2004) Breast Cancer Res. Treat., 83: 57-66) , y un tercio de todos los carcinomas de mama humana avanzados demuestran una marcada reducción en expresión del miembro Bax pro-apoptótico de la familia Bcl-2 (Krajewski et al. (1995) Cancer Res., 55: 4471-4478) . Las mutaciones de Bax y p53 se asocian con un alto porcentaje de todos los tumores humanos. El subgrupo de pacientes que manifiestan mutaciones de p53 o expresión reducida de Bax generalmente responden pobremente a terapia y muestran tumores que crecen rápidamente y una menor supervivencia media (Lai et al., supra; Reed (1996) J. Clin. Invest., 97:2403-2404) . Aunque se ha perseguido extensamente, se desconoce el mecanismo por el que la expresión Bax se regula en células normales, malignas o agonizantes. El único activador endógeno conocido de la expresión Bax es el factor de trascripción p53, que es responsable de inducir muerte celular en células cancerígenas y dañadas (Miyashita y Reed (1995) Cell, 80: 293299) .

WO 95/19367; US 5744310; BYKOV V J N ET AL: “Moléculas pequeñas que reactivan el mutante p53”, EUROPEAN JOURNAL OF CANCER, PERGAMON EXPRESS, OXFORD, GB, vol. 39, nº 13, 1 septiembre 2003 páginas 18281834; LIONATAS ET AL: “CURCUMINA Y RESVERATROL INDUCEN APOPTOSIS Y TRASLOCACIÓN NUCLEARY ACTIVACIÓN DE P53 IN NEUROBLASTOMA HUMANO”, ANTICANCER RESEARCH, INTERNATIONAL INSTITUTE OF ANTICANCER RESEARCH, GR, vol. 24, nº 28, 1 marzo 2004 páginas 987-998; CHOUDHURI T ET AL: “Curcumina induce apoptosis en células de cáncer de mama humano a través de la inducción de Bax dependiente de p53”, FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 512, nº 1-3, 13 febrero 2002, páginas 334-340; LIN ET AL: “Fosforilación de p53 con Serina inducida por Resveratrol causa Apoptosis en una Línea Celular de Cáncer de Próstata de p53 Mutante”, JOURNAL OF UROLOGY, LIPPINCOTT WILLIAMS & WILKINS, BALTIMORE, MD, US vol. 168, nº2, 1 agosto 2002, páginas 748-755; y WATABE MASAHIKO ET AL.: “Éster de fenetil de ácido cafeico induce apoptosis por inhibición de NFkappaB y activación de Fas en células MCF-7 de cáncer de mama humano”, THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY 13 FEB 2004, vol. 279, nº 7, 13 febrero 2004, páginas 6017 se dirigen a métodos para promover la muerte celular en células p53 intactas que comprende el uso de miméticos/agonistas de p53.

CHIO L-C ET AL: “IDENTIFICACIÓN DE INHIBIDORES MUY POTENTES Y SELECTIVOS DE HIDROFOLATO REDUCTASA DE TOXOPLASMA GONDII”, ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, WASHINGTON, DC, US, vol. 37, nº 9, 1 septiembre 1993, páginas 1914-1923, desvela el uso de 5- (4-cloro-fenil) -6-6 (4-nitro-fenoximetil) -pirimidina-2, 4-diamina en el tratamiento de leucemia.

BAKER B R ET AL: “Inhibidores irreversibles de enzima. CXXXIV. Efecto de sustitución de anillo en la inhibición irreversible selectiva de reductasa dihidrofólica de leucemia e hígado de ratón L 1210 por 2, 4- diamino-5- (3, 4diclorofenil) -6- [p- (m-fluorosulfonil-fenilureido) fenoximetil] pirimidina”. JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY ENERO 1969, vol. 12, nº1, Enero 1969 páginas 74-78, describe una composición que comprende EtOH/THF y 5 (3, 4-dicloro-fenil) -6- (4-metil-3-nitro-fenoximetil) -pirimidina-2, 4-diamina.

BAKER B R ET AL: “Inhibidores irreversibles de enzima. CLXVI. Inhibidores irreversibles dirigidos al sitio activo de reductasa dihidrofólica derivados de 2, 4-diamino-5 (3, 4-diclorofenil) pirimidina con 6 sustituyentes y algunos factores en su transporte de pared celular”, JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY ENERO 1970, vol. 13, nº1, Enero 1970 (1970-71) , páginas 82-86, desvela el uso de 5- (3, 4-dicloro-fenil) -6- (fenoximetil) -pirimidina-2, 4-diamina y 5- (3, 4dicloro-fenil) -6- (-2-feniletil) -pirimidina-2, 4-diamina en el tratamiento de leucemia.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Esta invención proporciona sistemas nuevos de cribado adecuados para la identificación de agentes que actúan como miméticos/agonistas de p53. También proporciona miméticos/agonistas de p53 efectivos.

De este modo, en ciertas realizaciones, esta invención proporciona un compuesto que promueve la muerte celular en una célula p53 intacta (por ejemplo, una célula tumoral) . Ciertos compuestos preferentes son los de la Formula I en el presente documento, donde R1 y R4 se seleccionan independientemente del grupo consistente en un grupo amino, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo carboxilo, halo, hidroxilo, SO2, C1-6 alquilo, C1-6 haloalquilo, C18 alcoxil, C1-11 alcoxialquil, C1-6 alquilamino, C1-6 aminoalquilo, y similares; R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo consistente en C, N, y similares; R5 es C u O; R6 y R7 se seleccionan independientemente del grupo consistente en H (solamente R7) , halógeno, CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado o no ramificado saturado o no saturado, alcoxi C1-10 ramificado o no ramificado, acilo C1-10 ramificado o no ramificado, aciloxi C1-10 ramificado o no ramificado, alquitio C1-10 ramificado o no ramificado, aminosulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi, arilsulfonilo, heteroarilo heteroariloxi, y similares; R8 se selecciona del grupo consistente en NO2, OH, COOH, y similares; R9 se selecciona del grupo consistente en H, CH3, y similares, o un éster o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En ciertas realizaciones R6 y R7 son ambos halógenos. En varias realizaciones R1 y R4 son ambos amino. En varias realizaciones R2 y R3 son ambos N. En varias realizaciones R8 es NO2. En ciertas realizaciones el compuesto tiene la fórmula de la fórmula II.

También se proporciona un método para promover la muerte celular en una células p53 intacta (por ejemplo, una célula cancerígena que incluye tumores sólidos, células metastásicas, y cánceres de tumores no sólidos) . El método típicamente implica el contacto de la célula con un compuesto que induce trascripción de ras. En varias realizaciones el compuesto es un compuesto de acuerdo con la Fórmula I como la descrita en el presente documento. En ciertas realizaciones el compuesto es un excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones la célula es una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de colon, una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer uterino, una célula de cáncer de ovario, una célula de cáncer de próstata o una célula de cáncer de colon.

También se proporciona una línea celular para examinar agentes que promueve la muerte celular en una célula p53 intacta. La línea celular comprende típicamente células de mamíferos que contienen una construcción de ácido nucleico que comprende elementos promotores de bax que comprenden un 5’ UTR, una secuencia TATAA, y una o más secuencias de consenso que se enlazan con p53, donde los elementos promotores de p53 están operativamente enlazados con un reportero de tal manera que el enlace de una proteína p53 con una o más de dichas secuencias de consenso induzca o aumente la trascripción de dicho reportero. En ciertas realizaciones el reportero es una proteína fluorescente, luciferasa, cloranfenicol acetil transferasa (CAT) , º-galactosidasa (º-gal) , fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante (PRP) , o una hormona del crecimiento (HC) . En ciertas realizaciones el reportero comprende un gen de luciferina o cADN. En varias realizaciones la célula del mamífero es una célula p53 intacta (por ejemplo, una célula HEK293T) .

Esta invención también proporciona métodos para identificar agentes que promueven la muerte células en células p53 intactas. Los métodos típicamente implican contactar una o más células de la línea celular descrita en el presente documento con uno o más agentes del test; detectar una señal del reportero en la célula donde un aumento en la señal del reportero indica que el agentes es un agente que tiene probabilidades de promover muerte celular en una célula p53 intacta. En ciertas realizaciones un único agente de test se pone en contacto con dicha célula. En varias realizaciones el aumento se mide en relación con un control que carece del agente del test o que comprende el agente del test en una concentración menor. En ciertas realizaciones el método se realiza con un sistema robótico. En varias realizaciones... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un compuesto que promueve muerte celular en una célula p53 intacta, comprendiendo dicho compuesto la fórmula:

donde:

R1 y R4 se seleccionan independientemente del grupo consistente en un grupo amino, un grupo ciano, un grupo nitro, un grupo carboxilo, halo, hidroxilo, SO2, C1-6 alquilo, C1-6 haloalquilo, C1-8 alcoxil, C1-11 alcoxialquil, C1-6 alquilamino, C1-6 aminoalquilo;

R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo consistente en CH, N; R5 es CH2 u O; R6 se seleccionan independientemente del grupo consistente CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado o no ramificado saturado o no saturado, alcoxi C1-10 ramificado o no ramificado, acilo C1-10 ramificado o no ramificado, aciloxi C1-10 ramificado o no ramificado, alquitio C1-10 ramificado o no ramificado, aminosulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi, arilsulfonilo, heteroarilo heteroariloxi;

R7 se seleccionan independientemente del grupo consistente en H, CN, NO2, alquilo C1-10 ramificado o no ramificado saturado o no saturado, alcoxi C1-10 ramificado o no ramificado, acilo C1-10 ramificado o no ramificado, aciloxi C1-10 ramificado o no ramificado, alquitio C1-10 ramificado o no ramificado, aminosulfonilo, arilo, aroilo, ariloxi, arilsulfonilo, heteroarilo heteroariloxi;

R8 se selecciona del grupo consistente NO2, OH, COOH; R9 se selecciona del grupo consistente en H, CH3;

o un éster o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos donde dicho compuesto está en un excipiente farmacéuticamente aceptable.

2. La composición de la reivindicación 1, donde R6 y R7 son ambos halógenos.

3. La composición de la reivindicación 1, donde R1 y R4 son ambos amino.

4. La composición de la reivindicación 1, donde R2 y R3 son ambos N.

5. La composición de la reivindicación 1, donde R8 es NO2.

6. La composición de la reivindicación 1, donde dicho compuesto tiene la fórmula:

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde dicha composición se formula como una formulación de dosis de unidad.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, para su uso en un método para tratar cáncer.

9. La composición de la reivindicación 8 para su uso en un método para tratar cáncer, donde dicho cáncer se selecciona del grupo consistente en cáncer de hígado, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer uterino, cáncer de ovario, cáncer de próstata, y cáncer de colon.