Microesferas que contienen antígenos para alergioterapia.

Microesferas para alergioterapia, que contienen antígenos y/o ADN de antígenos,

caracterizadas porque lasmicroesferas presentan una constante de enlace KB mínima de 1 x 104 M-1 con respecto al radical de carbohidratoespecífico de las células epiteliales intestinales y/o nasales

Microesferas que contienen antígenos para alergioterapia

La presente invención se refiere a microesferas que contienen antígenos, en especial alérgenos y que sirven para terapia de las alergias.

Aproximadamente, el 20% de la población está afectada de alergias en las que interviene IgE, que pueden conducir desde síntomas ligeros, tales como fiebre del heno, hasta episodios graves de asma o de shock anafiláctico. En estos pacientes, las células madre y otras células efectoras de la alergia están cargadas de anticuerpos IgE. Al establecer contacto con el alérgeno, puede tener lugar el llamado disparo de las células, es decir, la liberación de mediadores, tales como histamina, que son responsables de los síntomas de la alergia.

El método estándar corrientemente utilizado en el tratamiento de la alergia es la llamada hiposensibilización con extractos naturales de alérgenos, los cuales después de largo tratamiento conducen a la reducción de los síntomas. El mecanismo efectivo no está todavía completamente aclarado, no obstante, se observa la inducción de anticuerpos IgG, que pueden actuar como anticuerpos de bloqueo. Además, después de una terapia de larga duración se discute la modulación de la respuesta TH.

Para hacer mejores inmunógenos de los alérgenos que frecuentemente son satisfactoriamente salubles, se utilizan habitualmente los llamados coadyuvantes, tales como, por ejemplo, trihidróxido de aluminio. Estos absorben la proteína del alérgeno y aumentan de esta manera su carácter inmunogénico.

Otra posibilidad de aplicación adicional consiste en las llamadas micro o nanopartículas descritas en la literatura especializada, que contienen sustancias inmunogénicas. Por ejemplo, Johansen y otros, describen la administración controlada de antígenos mediante microesferas de copolímeros de ácido poliláctico-ácido poliglicólico (las llamadas micropartículas PLGA) .

La aplicación de alérgenos tiene lugar principalmente de forma subcutánea o intramuscular. Algunas referencias de la literatura, informan de investigaciones de terapia oral contra la alergia (European Journal of Allergy and Clinical Immunology, WHO Position Paper 44;53:20-21) . La inmunoterapia sublingual es ya de aplicación clínica, no obstante, con éxito moderado (Rakoski J, Wessner D, Int. Arch. Allergy Immunol. 2001, Nov; 126 (3) : 185-7) .

No obstante, la administración oral de sustancias inmunógenas incluidas en microesferas, es ya conocida también. Así, por ejemplo, se ha descrito por K.J. Maloy y otros la inducción de una respuesta inmune de las mucosas y sistémica, mediante la administración oral de micropartículas PLGA incluidas en ovalbumina (K.J. Maloy y otros, Immunology 1994, abr, 81 (4) : 661-7) . Además, un trabajo de Pecquet y otros, ha mostrado que se puede administrar un alérgeno de ácido láctico en microesferas PLGA a ratones para profilaxis de alergia a la leche, por vía oral (Pecquel y otros, Vaccine 2000, 18: 1196-1202) .

Desafortunadamente los métodos de tratamiento de alergias conocidos hasta el momento, no siempre tienen éxito, comprobándose muchas veces empeoramiento de los síntomas y existen datos que muestran que una hiposensibilización incluso excitar la síntesis de IgE. Esto puede basarse en la utilización del trihidróxido de aluminio (Al (OH) 3) como coadyuvante, que se utiliza como coadyuvante para muchas sustancias de vacunación actuales. A base de investigaciones en animales, se conoce desde hace tiempo que el trihidróxido de aluminio puede fomentar incluso una respuesta TH2, es decir, la formación de IgE y, por lo tanto, genera una alergización. Además, se da la situación paradógica de que los pacientes alérgicos son inmunizados con un coadyuvante de alergización con extracto de alérgenos. Además, es necesaria una administración repetida de cantidades de alérgeno crecientes, al principio con periodos incluso semanales, lo cual resulta pesado para los pacientes. Las administraciones orales de los antígenos se han permitido en pacientes que llevan a cabo ventajosamente en su casa una vacunación por vía bucal.

Por esta razón, es un objetivo de la presente invención poner a disposición sustancias apropiadas, en especial alérgenos, en una forma para la terapia de las alergias que eviten los inconvenientes antes mencionados de las formas de administración conocidas de alérgenos y que posibilite una reacción fiable del paciente.

La invención se basa en el descubrimiento de que una forma de administración de este tipo, desarrolla en especial una eficacia satisfactoria cuando las microesferas liberan sus sustancias de manera dirigida y a lo largo de un prolongado periodo de tiempo en su tejido objetivo.

Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención microesferas para terapia de alergia que contienen antígenos y/o ADN de antígenos, en especial, alérgenos y/o ADN de alérgenos que se caracterizan porque las microesferas tienen una constante de enlace KB mínima de 1 x 103 M-1, preferentemente, como mínimo, de 1 x 104 M-1 y del modo más preferente, como mínimo, 6 x 104 M-1, con respecto a los radicales de hidratos de carbono, preferentemente, alfa-L mucosa, de las células epiteliales intestinales y/o nasales.

Bajo el término antígenos se considerarán en la presente invención, no solamente sustancias que son reconocidas por el organismo como sustancias extrañas y que pueden generar una respuesta inmune o que pueden reaccionar con un anticuerpo o con receptores de células T, sino también sus derivados. Entre los alérgenos que se definen más adelante son preferentes los siguientes antígenos: antígenos virales, bacteriales, protozoarios, como también toxinas y antígenos de gusanos.

Es preferible que, no solamente se puedan incluir antígenos en las microesferas, sino también el ADN de antígenos. En este caso, existe la posibilidad de incorporar antígenos o ADN de antígenos solos o juntos en las microesferas. Es preferible que los antígenos sean alérgenos. Además, es preferible que los alérgenos y/o el ADN de alérgenos sean incorporados en las microesferas.

Bajo el término “microesferas” se entienden partículas que están constituidas preferentemente en forma de bola, o bien en forma esférica. Dado que en la producción de las microesferas, el medio de solución utilizado para el polímero, se evapora, se precipitan las microesferas y contienen antígenos pulverizados conjuntamente.

El concepto frecuentemente utilizado en la literatura de “nanopartículas” o bien “nanoesferas” se incluirá de manera correspondiente con el concepto “microesferas” o bien “micropartículas”.

Con el concepto “alérgenos” se comprenden además de los extractos de alérgenos naturales anteriormente conocidos y moléculas de alérgenos, también mutantes de alérgenos, hipoalérgenos o partes de moléculas de alérgenos, tales como péptidos y también mimotopo de alérgenos. Los mimotopos de alérgenos, pueden ser, en este caso, asimismo, péptidos, sensiblemente péptidos con una longitud de frecuencia de aminoácidos de 5 a 25 aminoácidos. Los alérgenos se encuentran en la situación de provocar una alergia, es decir, una reacción de sobre reacción de tipo inmediato que es inducida por la síntesis de anticuerpos IgE. Los hipoalérgenos son derivados naturales o recombinantes de una molécula de alérgeno los cuales, a causa de una reducida diferencia con respecto a la secuencia de aminoácidos del alérgeno, adoptan una conformación en la que se pierden las propiedades de unión a IgE.

En especial, son preferentes los siguientes alérgenos para microesferas: Polen de abedul (Bet v 1) , zanahoria (Dau c 1) , apio (Api g 1) , avellana (Cor a 1) , polen de chopo (Aln g 1) y polen de gramíneas (entre otras u.a.Ph1 p 5, Phl p 1, Phl p 6, Phl p 7) , así como ácaros de polvo doméstico (Der p 1, Der p 2) y peces (parvalbumina) .

En especial, los siguientes mimotopos del alérgeno Phl p 5, son preferentes:

En especial, es preferente el siguiente mimotopo del alérgeno Bet v 1:

CRSDKDGWRLWC

En todos los casos, tiene lugar la constitución de un puente de bisulfuro entre las cisteínas de los extremos. Los mimotopos fueron seleccionados mediante una biblioteca de 10-mer fagos péptidos (Mazzucchelli y otros.,

Mazzucchelli, L., Burritt, J.B., Jesaitis, A. J., Nusrat, A., Liang, T. W., Gewirtz, A. T., Schnell, F. J., y Parkos, C. A. Cell-specific peptide binding by human nutrophils. Blood, 93: 1738-1748, 1999) mediante IgE humanos específicos contra Phl p 5, o bien Bet v 1.

La estructura de las microesferas permite liberar los antígenos contenidos en las microesferas... [Seguir leyendo]

1. Microesferas para alergioterapia, que contienen antígenos y/o ADN de antígenos, caracterizadas porque las microesferas presentan una constante de enlace KB mínima de 1 x 104 M-1 con respecto al radical de carbohidrato 5 específico de las células epiteliales intestinales y/o nasales.

2. Microesferas para alergioterapia, según la reivindicación 1, caracterizadas porque las microesferas tienen una avidez KB mínima de 1 x 1010 M-1 con respecto al residuo de carbohidrato específico de células epiteliales intestinales y/o nasales.

3. Microesferas para alergioterapia, según las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizadas porque las microesferas tienen lectinas en su superficie, que aumentan la adherencia a las células de las mucosas.

4. Microesferas para alergioterapia, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque el 15 residuo de carbohidrato específico es α-L-Fucosa.

5. Microesferas para alergioterapia, según la reivindicación 4, caracterizadas porque la sustancia sobre la superficie de la microesfera es lectina no tóxica.

6. Microesferas para alergioterapia, según la reivindicación 4 ó 5, caracterizadas porque la lectina es comestible.

7. Microesferas para alergioterapia, según la reivindicación 4-6, caracterizadas porque la lectina es lectina-Aleuria-Aurentia.

8. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque las microesferas tienen un diámetro de 0, 1 a 100 μm.

9. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque la estructura básica de las microesferas está constituida por polímeros. 30

10. Microesferas para alergioterapia, según una la reivindicación 9, caracterizadas porque la estructura básica de las microesferas está constituida por polímeros con grupos funcionales.

11. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones 9 u 11, caracterizadas porque la estructura 35 básica de las microesferas está constituida por polímeros o copolímeros eliminables biológicamente.

12. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones 8-11, caracterizadas porque la estructura básica de las microesferas está constituida por ácido poliláctico, ácido poliglicólico o copolímero de ácido polilácticoácido poliglicólico.

13. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones 9 a 12, caracterizadas porque la lectina aleuria aurantia está unida a los polímeros mediante una unión covalente.

14. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque las 45 microesferas contienen 0, 1-20% en peso de antígenos o ADN de antígenos.

15. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque los antígenos y/o ADN de antígenos son alérgenos y/o ADN de alérgenos.

16. Microesferas para alergioterapia, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque los antígenos son mimotopos del alérgeno Phl p 5 y/o del alérgeno Bet v 1.

17. Procedimiento para la fabricación de microesferas, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las microesferas son cargadas en primer lugar con antígenos y/o ADN de antígenos y, a continuación, las 55 microesferas son funcionalizadas.

18. Utilización de microesferas, según una de las reivindicaciones anteriores 1 a 17, para la fabricación de un medicamento para alergioterapia.