Métodos para tratar lesiones por reperfusión.

Una composición que comprende flagelina para su uso como medicamento para tratar un tejido de un mamíferofrente a los efectos de la reperfusión.

Métodos para tratar lesiones por reperfusión Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Campo de la invención La presente invención se refiere al uso de polipéptidos relacionados con flagelina para tratar tejidos frente a los efectos de la reperfusión.

Antecedentes de la invención Los tejidos privados de sangre y oxígeno sufren necrosis isquémica o infarto con posibles daños orgánicos irreversibles. Una vez que se restablece el flujo de sangre y oxígeno en el órgano o el tejido (reperfusión) , el órgano no vuelve inmediatamente al estado preisquémico normal. La reperfusión del flujo coronario es necesaria para reanimar el tejido u órgano isquémico o hipóxico. Una reperfusión en el momento adecuado facilita el salvamento de las células y disminuye la morbididad y la mortalidad. La reperfusión de una zona isquémica puede dar lugar a una disfunción paradójica, incluida una marcada disfunción de las células endoteliales, que tiene como resultado vasoconstricción, activación de plaquetas y leucocitos, incremento de la producción de oxidantes e incremento de la extravasación de fluidos y proteínas.

Durante las últimas dos décadas se ha sido testigo de varias intervenciones farmacológicas diseñadas para limitar la lesión por reperfusión. Por desgracia, el éxito de algunos agentes se ha limitado a modelos experimentales de isquemia y reperfusión. La falta de un beneficio clínico consistente puede estar relacionada con varios factores, incluidos un mal diseño de los ensayos clínicos, estudios farmacocinéticos/farmacodinámicos inadecuados y la complejidad del modelo humano in vivo.

Existe una necesidad en la técnica de distinguir estrategias terapéuticas para isquemia frente a reperfusión y es posible que sea necesaria una combinación de agentes para provocar el máximo beneficio clínico.

Sumario de la invención En el presente documento se divulga un método de tratar un tejido de un mamífero frente a los efectos de la reperfusión, que puede comprender administrar a un mamífero que lo necesite una composición que comprende flagelina. La composición se puede administrar en combinación con un antioxidante, que se puede seleccionar del grupo que consiste en amifostina y vitamina E.

La reperfusión se puede deber a una lesión, que puede ser isquemia o hipoxia. La isquemia se puede seleccionar del grupo que consiste en taquicardia, infarto, hipotensión, embolia, tromboembolia (coágulos sanguíneos) , drepanocitosis, presión localizada en las extremidades del cuerpo y tumores. La hipoxia se puede seleccionar del grupo que consiste en hipoxia hipoxémica (intoxicación por monóxido de carbono; apnea del sueño, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, parada respiratoria; derivaciones) , hipoxia anémica (contenido bajo en O2) , hipoxia hipoxémica e hipoxia histotóxica. La presión localizada puede deberse a un torniquete.

La composición puede administrarse antes de, junto con o después de la entrada de oxígeno El tejido se puede seleccionar del grupo que consiste en el tubo digestivo, los pulmones, los riñones, el hígado, el aparato cardiovascular, el endotelio de los vasos sanguíneos, el sistema nervioso central, el sistema nervioso periférico, los músculos, el hueso y los folículos pilosos.

Breve descripción de los dibujos La figura 1 demuestra el nivel de creatinina en suero de ratones más de 5 días después de la administración intravenosa de flagelina a concentraciones de 0, 01 μg, 0, 5 μg, 1, 0 μg o bien 5, 0 μg/cuerpo.

La figura 2 demuestra el efecto de la flagelina administrada a ratones antes de la imposición de isquemia renal y la medición de la supervivencia y la creatinina tras la reperfusión de los riñones isquémicos. El panel A muestra el porcentaje de supervivencia de ratones tratados previamente con flagelina a concentraciones de 0, 01 μg, 0, 5 μg, 1, 0 μg o 5, 0 μg/cuerpo o PBS como control. El panel B muestra el nivel de creatinina en el mismo grupo de ratones previamente tratados y control.

La figura 3 demuestra la histopatología de las células renales isquémicas 24 horas después de la reperfusión previamente tratadas con PBS o con flagelina a concentraciones de 0, 01 μg, 0, 5 μg, 1, 0 μg o 5, 0 μg/cuerpo. La columna de Simulado indica células renales aisladas de ratones a los que no se indujo isquemia renal.

La figura 4 demuestra la histopatología de células renales 7 días después de la reperfusión. En el primer panel, el

porta de histopatología muestra células renales aisladas de ratón previamente tratado con PBS antes de la isquemia renal y seguida de reperfusión de los riñones isquémicos. En el primer panel, el porta de histopatología muestra células renales aisladas de ratón previamente tratado con PBS antes de la isquemia renal y seguida de reperfusión de los riñones isquémicos. En el segundo panel, el porta de histopatología muestra células renales aisladas de ratón previamente tratado con flagelina a una concentración de 0, 5 μg /cuerpo pero a los que no se ha inducido isquemia renal. En el tercer panel se demuestra un porta de histopatología que muestra células renales aisladas de un ratón previamente tratado con flagelina a una concentración de 0, 5 μg /cuerpo y al que se ha inducido isquemia renal, y seguido de reperfusión de los riñones isquémicos.

La figura 5 demuestra la evaluación de la infiltración de leucocitos 9 horas y 24 horas después de la reperfusión en células renales isquémicas aisladas de ratones previamente tratados con PBS o con flagelina a 0, 5 μg /cuerpo. En la figura 5a se muestran células de tejido renal teñidas inmunohistoquímicamente para determinar los niveles de infiltración con neutrófilos 9 horas y 24 horas después de la reperfusión en células renales tratadas isquémicas y no isquémicas de ratones previamente tratadas con PBS o flagelina a 0, 5 μg /cuerpo. La figura 5b es el número de neutrófilos, macrófagos, linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ infiltrados en células de tejido renal aisladas de ratones previamente tratados con PBS o flagelina a una concentración de 0, 5 μg /cuerpo. Figura 5c

La figura 6 demuestra un papel crítico de la flagelina para evitar que las quimiocinas CXCL1/KC y CXCL2/KC dirijan la infiltración de leucocitos a tejidos renales isquémicos. La figura 6b demuestra niveles de ARNm de las proteínas de fase aguda IL-1b e IL-6 pero no del TNFa también disminuidos en riñones isquémicos a las 9 horas de la reperfusión en animales previamente acondicionados con flagelina.

La figura 7 demuestra la supervivencia y los niveles de creatinina en grupos de ratones C57BL/6 sometidos a 45 minutos de oclusión bilateral de pedículo renal y a los que se había administrado 0, 5 μg de flagelina a varios tiempos tras la retirada de las pinzas renales.

La figura 8 demuestra que la administración de 0, 5 μg de flagelina en los 30 minutos posteriores a la reperfusión de riñones isquémicos de ratones C57BL/6 silvestres reconstituidos con médula ósea silvestre disminuía los niveles de ARNm de CXCL1 y CXCL2. En receptores MyD88-/- reconstituidos con médula ósea MyD88-/- o silvestre, se indujo poco o nada de ARNm de CXCL1 y CXCL2 durante la reperfusión de riñones isquémicos y la administración de flagelina durante la reperfusión de estos riñones no disminuyó los niveles de ARNm de estas quimiocinas. Por el contrario, los receptores silvestres de médula ósea de donantes MyD88-/- expresaron niveles elevados de ARNm de CXCL1 y CXCL2 y estos niveles se redujeron mediante la administración de flagelina durante la reperfusión de los riñones isquémicos.

La figura 9 demuestra secciones renales de ratones C57BL/6 y BALB/c silvestres teñidos con el anticuerpo anti-TLR5. La figura 9b demuestra que los niveles de expresión del ARNm de TLR5 eran bajos en los riñones antes de la inducción de isquemia renal/reperfusión pero aumentaban rápidamente durante la reperfusión de riñones isquémicos.

La figura 10 muestra la estructura del dominio de la flagelina bacteriana. El trazo de la estructura de Ca, la distribución del núcleo hidrófobo y la información estructural de F41. Hay cuatro núcleos hidrófobos distintos que definen los dominios D1, D2a, D2b y D3. Todos los átomos de la cadena lateral hidrófoba se muestran con la estructura de Ca. Los átomos de la cadena lateral están codificados por colores: Ala, amarillo; Leu, Ile o Val, naranja; Phe y Tyr, morado (átomos de carbono) y rojo (átomos de oxígeno) . c, Posición y región de varias características estructurales en la secuencia de aminoácidos de la flagelina. Se muestran, de arriba a abajo: el fragmento F41 en azul; tres pliegues de b-folio... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende flagelina para su uso como medicamento para tratar un tejido de un mamífero frente a los efectos de la reperfusión.

2. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la reperfusión puede deberse a una lesión.

3. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la lesión es isquemia o hipoxia.

4. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la isquemia se selecciona del grupo que consiste en taquicardia, infarto, insuficiencia renal aguda, ictus, hipotensión, embolia, tromboembolia (coágulos sanguíneos) , drepanocitosis, presión localizada en las extremidades del cuerpo y tumores.

5. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 3, en la que la hipoxia se selecciona del grupo que consiste en hipoxia hipoxémica (intoxicación por monóxido de carbono; apnea del sueño, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, parada respiratoria; derivaciones) , hipoxia anémica (contenido bajo en O2) , hipoxia hipoxémica e hipoxia histotóxica.

6. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 2, en la que la lesión se selecciona del grupo que consiste en infarto de miocardio, ictus e insuficiencia renal aguda.

7. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 4, en la que la presión localizada se debe a un torniquete.

8. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la composición se administra antes de, junto con, o después de la entrada de oxígeno.

9. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el tejido se selecciona del grupo que consiste en: tubo digestivo, pulmón, riñón, hígado, aparato cardiovascular, endotelio de los vasos sanguíneos, sistema nervioso central, sistema nervioso periférico, músculo, hueso y folículo piloso.

10. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la composición se administra en combinación con un antioxidante.

11. La composición que comprende flagelina para su uso como medicamento de acuerdo con la reivindicación 10, en la que el antioxidante se selecciona del grupo que consiste en amifostina y vitamina E.

12. Una composición que comprende un agonista del receptor tipo Toll 5 (TLR5) para su uso ****como medicamento para tratar un tejido de un mamífero frente a los efectos de la reperfusión.