Método para recolectar y manipular muestras de tejido para análisis de biopsia.

Un método para preparar una o más muestras de tejido de biopsia para examen histológico,

que comprende:colocar una muestra de tejido en un soporte cortable en micrótomo;

inmovilizar la muestra de tejido en el soporte;

someter el soporte cortable en micrótomo y la muestra de tejido a un proceso para reemplazar el líquido de lamuestra de tejido con un material endurecible;

incluir el soporte cortable en micrótomo y la muestra de tejido en una cantidad adicional del materialendurecible;

curar el material endurecible en un bloque; y

cortar el bloque con un micrótomo en rebanadas finas de material endurecible, soporte cortable en micrótomoy muestra de tejido.

Método para recolectar y manipular muestras de tejido para análisis de biopsia Área técnica de la invención La presente invención se refiere al área general del ánalisis de muestras de tejido y al campo particular de la recolección, la manipulación y el tratamiento de las muestras de tejido para biopsia.

Antecedentes de la invención Cuando se sospecha una enfermedad en un ser vivo, el médico debe lograr un diagnóstico específico. Algunos procesos patológicos, particularmente los tumores, requieren un diagnóstico histológico y/o citológico. Si bien los instrumentos radiológicos son útiles para detectar la presencia de un tumor, el tipo de célula del tumor sólo puede ser determinado por el examen de un anatomopatólogo de una muestra histológica o citológica del tumor. Existen varios dispositivos que se han creado para llevar a cabo la acción de toma de muestras de tejidos. Estos dispositivos pueden obtener tejido para análisis histológico o en el caso de biopsias por aspiración con aguja fina, muestras para análisis citológico e histológico. En muchos casos, esas muestras son muy pequeñas y dificultan la recuperación y el tratamiento. Esos fragmentos de tejido pequeños pueden proceder de una punción o de dispositivos de procedimiento de biopsia similares o de biopsias por aspiración con aguja fina (BAAF) . La BAAF es típica y produce células individuales, grupos de células pequeños y fragmentos que inmediatamente se extienden sobre un portaobjetos (frotis directo) o se enjuagan a un recipiente con un líquido conservante. Una vez trasportadas al laboratorio, esas muestras se centrifugan sobre un portaobjetos de vidrio (frotis de centrifugado celular) . En algunos casos la biopsia por aspiración con aguja fina produce fragmentos de tejido que son lo suficientemente grandes para ser procesadas histológicamente. Si se recuperan exitosamente, esos fragmentos se presentan en un cóagulo de sangre o agar en una técnica conocida como preparación de bloques de células que después se inmovilizan en cera para el corte y la preparación del fotis.

La BAAF es un ejemplo de las técnicas de recolección de tejido utilizadas y los problemas que interesan a la presente invención. Las técnicas de biopsia por aspiración con aguja fina se practican desde hace muchos años y la bibliografía contiene muchos estudios sobre la técnica y la comparación de diversos dispositivos mejorados para la misma. Existen dos tipos diferentes de agujas para biopsia. Las que tienen elementos cortantes activos o móviles y las que son pasivas o inmóviles. Las agujas activas tienen dos problemas básicos, que son costosas y su complejidad. Las agujas que tienen interés para esta invención son muy a menudo las de calibre 22 que es un DE

de 0.028" con una pared estándar de 0.006". Esto deja un DI de sólo 0.016". Algunos diseños de la tecnología anterior utilizan un elemento activo por debajo del diámetro interno DI para cortar y capturar tejido. 0.016" no proporciona una gran holgura para esos elementos y por lo tanto esas agujas del estado anterior de la técnica son ineficaces. Si se desea además aspirar fragmentos de tejido hacia el calibre de la aguja reduciendo aún más el diámetro interno, el diámetro interno se reducirá aún más debido a que se debe agregar un segundo elemento, lo cual es contraproducente.

También se analizan en la bibliografía otros métodos para obtener muestras que también presentan problemas. Cada uno se caracteriza por el tamaño del tejido y la cantidad de piezas generalmente disponibles así como por si la orientación en el plano de corte eventual es crítica, por ejemplo:

Biopsia por aspiración con aguja fina — piezas muy pequeñas de tejido tomadas del centro de una aguja fina; generalmente transportadas en una solución de fijación; Biopsia GI — caracterizada por unas pocas piezas de tejido pequeñas; es deseable concentrar las piezas de tejido muy próximas entre sí; Chips prostáticos — la orientación para esas muestras es irrelevante;

Legrados endometriales — caracterizados por tamaños de muestra variables; la orientación es irrelevante; Vaso — la orientación es crítica; los cortes deben ser transversales; Biopsia central — por ejemplo de próstata — la orientación es crítica; el tejido debe permanecer tendido todo en el mismo plano; Vesícula biliar — la orientación es crítica — el tejido debe ser incluido de canto;

Pared uterina, mama o tumores grandes — la orientación no es crítica — la muestra permanece tendida en un plano.

Algunos de esos métodos se caracterizan por la posibilidad de proporcionar muestras de tejido extremadamente pequeñas. Algunas muestras pueden ser tan pequeñas como unas pocas células, y las muestras extremadamente 60 pequeñas pueden crear problemas. Esos problemas incluyen la pérdida de la muestra, la deshidratación de la muestra y la contaminación de la muestra durante la recolección, el almacenamiento y el transporte. Además, como resultará evidente a partir de la discusión siguiente, la muestras pequeñas insumen mucho tiempo y son extremadamente difíciles de procesar en el laboratorio.

Además, en muchos casos, una muestra de tejido está mezclada con efluente. Los dispositivos y los métodos del estado anterior de la técnica sólo sirven para la recolección de efluente y no proporcionan dispositivos y métodos para atrapar muestras de tejido. El estado anterior de la técnica recoge efluente, pero no proporciona dispositivos ni métodos para la separación del tejido del efluente. Por consiguiente se necesita un aparato y un método para manipular el efluente así como las muestras de tejido y para separar eficazmente el tejido del efluente.

Una vez recolectada, la muestra de tejido debe ser transportada al laboratorio de anatomía patológica para su tratamiento. Comúnmente, la manipulación del tratamiento de biopsias pequeñas en el laboratorio de histología es una tarea tediosa y requiere múltiples tratamientos manuales de la muestra. La biopsia por aspiración con aguja fina (BAAF) es típica. Por consiguiente, se necesita manipular y tratar las muestras muy pequeñas de tejido de manera expeditiva.

Además de los problemas anteriores, otro problema con el aparato y los métodos utilizados corrientemente está asociado a la orientación de las muestras. Corrientemente en un laboratorio de anatomía patológica, el anatomopatólogo describirá macroscópicamente las muestras de tejido, las cortará en muestras de tamaño adecuado, si fuera necesario, y las colocará en un cassette de tejido para el tratamiento. Ahí reside uno de los mayores problemas de la técnica existente. Cuando la muestra de tejido se coloca en el cassette de tejido, el anatomopatólogo orienta la muestra de modo que cualquier superficie que quiera ver cortada quede colocada boca arriba en el cassette. El histotecnólogo que recupera el tejido del cassette luego del tratamiento sabe por su entrenamiento que cuando se abre el cassette, la superficie de tejido que se encuentra hacia arriba cuando se abre por primera vez se coloca boca abajo en el molde de cera, la cual a su vez se torna la primera superficie que va ser cortada por la cuchilla de un micrótomo. Este es un protocolo establecido que se respeta en la mayoría de los laboratorios de anatomía patológica de la actualidad. Este proceso necesita por consiguiente la participación humana y una manipulación redundante. Además, algunas veces se debe empacar en el cassette materiales de esponja especiales para mantener la muestra orientada y para evitar que se salga del cassette si es demasiado pequeña y pueda girar o perder su orientación durante el tratamiento del tejido. Algunas veces, las muestras de tejido se acompañan de notas y dibujos para mostrar cómo deben ser orientadas en la cera.

Ninguno de los sistemas o métodos corrientes proporciona la capacidad de mantener la orientación crítica del tejido durante todos estos pasos y eliminar los errores humanos en los pasos y procedimientos manuales asociados. Por lo tanto, existe la necesidad de un sistema y un proceso que puedan mantener la orientación preferida de la muestra de tejido desde el momento de la descripción macroscópica inicial durante todo el procedimiento de tratamiento del tejido y que continúen a través de la etapa de inclusión en cera sin que sea necesaria la participación humana más allá de la descripción macroscópica inicial.

Otro problema asociado con la recolección y la manipulación de muestras de tejido para análisis de biopsia se asocia con el proceso de análisis en sí mismo. En el procedimiento de análisis, la muestra se expone al calor y a productos químicos que pueden hacer que... [Seguir leyendo]

1. Un método para preparar una o más muestras de tejido de biopsia para examen histológico, que comprende: colocar una muestra de tejido en un soporte cortable en micrótomo; inmovilizar la muestra de tejido en el soporte; someter el soporte cortable en micrótomo y la muestra de tejido a un proceso para reemplazar el líquido de la muestra de tejido con un material endurecible; incluir el soporte cortable en micrótomo y la muestra de tejido en una cantidad adicional del material endurecible; curar el material endurecible en un bloque; y cortar el bloque con un micrótomo en rebanadas finas de material endurecible, soporte cortable en micrótomo y muestra de tejido.

2. El método de la reivindicación 1, donde el material endurecible es cera.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el soporte cortable en micrótomo comprende además una porción inferior configurada para retener la muestra de tejido y el paso de inmovilizar la muestra de tejido comprende además cerrar una tapa sobre la muestra de tejido para capturar la muestra de tejido en una orientación deseada.

4. El método de la reivindicación 1, 2 o 3, donde el soporte cortable en micrótomo se acopla a un marco antes de ser sometido al proceso para reemplazar el líquido de la muestra de tejido con el material endurecible, y el método comprende además asegurar el marco en el micrótomo antes de cortar el bloque.

5. El método de la reivindicación 4, donde antes de incluir el soporte cortable en micrótomo y la muestra de tejido en la cantidad adicional del material endurecible, el soporte cortable en micrótomo se mueve de una primera posición en el marco a una segunda posición, en la cual el soporte y la muestra de tejido son expuestos para ser cortados en el micrótomo.

6. El método de la reivindicación 5, donde el marco está configurado para ser manipulado por una máquina automatizada y que comprende además el uso de la máquina automatizada para mover el marco y el soporte de la primera posición a la segunda posición.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el soporte cortable en micrótomo está configurado para ser manipulado por una máquina automatizada y que comprende además el uso de la máquina automatizada para realizar el paso de inclusión.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el soporte cortable en micrótomo está configurado para ser manipulado por una máquina automatizada y que comprende además usar la máquina automatizada para realizar el paso de curado.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el soporte cortable en micrótomo está

configurado para ser manipulado por una máquina automatizada y que comprende además: cargar automáticamente el soporte con la máquina automatizada en una posición para realizar los pasos de inclusión y curado; y descargar automáticamente el soporte con la máquina automatizada de la posición para realizar los pasos de inclusión y curado una vez completados dichos pasos.