METODO PARA EL DIAGNÓSTICO Y/O PRONÓSTICO DE DAÑO RENAL AGUDO.

La presente invención se refiere al miRNAs miR-27a como marcadores de daño renal agudo y a un método y kit para el diagnóstico y/o pronóstico del daño renal agudo mediante dichos marcadores.

METODO PARA EL DIAGNÓSTICO Y/O PRONÓSTICO DE DAÑO RENAL AGUDO

Campo de la invención La presente invención se encuadra en el campo general de la biomedicina y en 5 particular se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.

Estado de la técnica Los miRNAs son RNAs de pequeño tamaño (22-25 nucleótidos) codificados endógenamente capaces de reconocer RNAs mensajeros y así regular negativamente l0 la expresión de proteínas, dentro de complejos de silenciamiento inducido (RISC) por complementaridad total o parcial con su mRNA diana. La mayoría son transcritos por la RNA Pol II desde genes individuales o desde transcritos policistrónicos para varios de ellos a la vez. Se generan como pre-miRs más largos que se procesan en el núcleo por una Ribonucleasa III, salen a citoplasma vía mecanismos dependientes de l5 Exportina-5 y Ran-GTP y allí son finalmente procesados por otra Ribonucleasa III a su forma madura.

Su función es esencial en una amplia variedad de procesos incluidos el desarrollo embrionario, la respuesta a estrés o la regulación estricta de procesos fisiológicos y por tanto, el mantenimiento de la homeostasis de los organismos.

Muy recientemente se ha demostrando que los miRNAs son reguladores clave en la respuesta celular rápida y precisa ante cualquier tipo de estímulo incluyendo la falta de nutrientes o la hipoxia (Ivan M, Harris AL, Martelli F, Kulshreshtha R. Hypoxia response and microRNAs: no longer two separate worlds. J Cell Mol Med.;12 (5A) :1426-31, 2008) .

La solicitud de patente WO2011012074 describe un conjunto de miRNAs, entre los que se incluye el miR-29a como marcadores plasmáticos de cáncer de hígado, y un método de diagnóstico y evaluación del cáncer hepático basado en la detección de al menos uno de ellos.

La solicitud de patente WO2009036236 se refiere a un conjunto de miRNAs, entre los 30 que se incluye el miR-146a, como marcadores plasmáticos de cáncer de hígado y un

método de diagnóstico y/o evaluación del diferentes patologías oncológicas basado en la detección de al menos uno de los microRNAs descritos.

Akkina, S. et al. , "MicroRNAs in kidney function and disease", Translational Research, 2011 Apr, Vol. 157, No. 4, pg 236-240 y Li, J.Y. et al., “Review: The role of microRNAs 5 in kidney disease”, NEPHROLOGY (CARLTON) , Sep 2010, Vol. 15, No.6, p599-608, describen la implicación de miRNAs en la fisiología y patología renal.

JUAN, D. et al., „Identification of a microRNA panel for clear-cell kidney cancer", UROLOGY, 2010 Apr, Vol.75, No. 4, páginas 835-41, describe un conjunto de miRNAs como marcadoreds de cáncer renal.

l0 El Fracaso renal agudo (FRA) como un síndrome caracterizado por una brusca caída en el filtrado glomerular en días o semanas, expresándose clínicamente con la incapacidad de excretar los productos nitrogenados de desecho y regular la homeostasis de líquidos y electrolitos.

El FRA representa uno de los problemas más graves dentro de las enfermedades l5 renales en el mundo desarrollado por la elevada mortalidad que conlleva, alrededor del 50%. En torno al 30% de todos los episodios de FRA ocurren en los enfermos ingresados en las UCIs, como consecuencia de un fallo multiorgánico. En este último contexto, la mortalidad se eleva al 80%.

El desarrollo de FRA es además una de las complicaciones más habituales tras una intervención cardiaca, de las que se realizan unas 30.000/año en España y más de un 1% de ellas en nuestro Hospital. Prácticamente la totalidad de los pacientes intervenidos desarrollan cierto grado de FRA. De la gravedad de este FRA postoperatorio depende la evolución a largo plazo de los pacientes, resultando en una mortalidad cercana al 60% en aquellos casos que requieran diálisis tras la intervención cardiaca (Candela-Toha A, Elias-Martin E, Abraira V et al. Predicting Acute Renal Failure after Cardiac Surger y : External Validation of Two New Clinical Scores. Clin J Am Soc Nephrol; 3:1260-1265. 2008) . Tanto la cirugía cardiaca como el trasplante renal son dos situaciones “cuasi” experimentales de estudio para la NTA en humanos, ya que se conoce el momento y la duración del estímulo isquémico y además se pueden monitorizar. Todas estas estadísticas de morbi-mortalidad no han variado significativamente en las últimas décadas y hasta el momento, no existe una terapéutica eficaz para la prevención y/o reducción de la NTA en todas estas situaciones. A ello ha contribuido en gran medida la falta de marcadores de daño renal más precisos que la determinación de creatinina y urea en suero, utilizados hasta el momento. Estos marcadores clásicos no reflejan directamente el daño celular ni en que compartimento del tejido renal (túbulo o endotelio) se está produciendo el mismo, 5 tan sólo son parámetros indicativos de una función renal alterada consecuencia del daño (Vaidya VS, Waikar SS, Ferguson MA, et al., Urinar y Biomarkers for Sensitive and Specific Detection of Acute Kidney Injur y in Humans. Clin Transl Sci. ;1 (3) :200208, 2008) . De hecho, es posible que pacientes con un daño renal subclínico no sean identificados como tales porque no se haya producido una alteración significativa en l0 los niveles séricos de creatinina y urea. Así, en los últimos años se están desarrollado numerosos estudios tratando de identificar y validar nuevos marcadores del FRA como NGAL, IL18, KIM, Cistatina C, VEGF o CXCL10, que parecen funcionar como buenos marcadores en poblaciones infantiles sin patologías añadidas significativas pero no en población adulta (Vaidya VS, Waikar SS, Ferguson MA, et al., Urinar y Biomarkers for

l5 Sensitive and Specific Detection of Acute Kidney Injur y in Humans. Clin Transl Sci. 1 (3) :200-208, 2008) .

Todo lo expuesto anteriormente justifica la necesidad de identificar y validar nuevos biomarcadores de evolución de daño renal más precisos e indicativos de qué compartimento tisular y en qué grado se está dañando y/o recuperando, cuya determinación además sea rápida, sencilla y sin necesidad de biopsiar al paciente.

Descripción de la invención Así pues en un primer aspecto la presente invención se refiere a un método para obtener datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-27a en una muestra aislada de un sujeto.

En la presente invención por daño renal agudo se entiende a cualquier daño producido por una reducción brusca, en horas o en días de la función renal, a una disminución del filtrado glomerular o un acumulo de productos nitrogenados séricos, o a una incapacidad para regular la homeostasis.

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo (de ahora en adelante método de la presente invención) que comprende determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-27a en una muestra aislada de un sujeto y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la alteración de dicho nivel de expresión es indicativo de daño renal agudo.

En una realización más particular de la presente invención la muestra a analizar es 5 seleccionada entre sangre, suero u orina.

En una realización más particular de la presente invención, la disminución del nivel de expresión de miR-27a, en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.

En una realización preferente de la presente invención, la expresión del o de los microl0 RNAs se determina mediante PCR cuantitativa.

En otra realización preferente de la presente invención, el nivel de expresión del micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA.

En un tercer aspecto, la presente invención se refiere al uso del micro-RNA miR-27a, para el diagnóstico y pronóstico del daño renal agudo.

l5 En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un kit para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo (de ahora en adelante kit de la presente invención) según el método de la presente invención que comprende las sondas y cebadores necesarios para determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-27a.

En un quinto aspecto, la presente invención se refiere al uso el kit de la presente 20 invención, para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo.

Descripción de las figuras La figura 1 muestra la expresión del miR-27a en suero de pacientes con FRA de etiología isquémica (PI) y de etiología tóxica (PT) desde el momento de su diagnóstico (DO) hasta 7 días después, en comparación con la expresión del miRNA en dos pooles de individuos sanos (healthy) . a) Datos del ciclo...

1. Método para obtener datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende determinar el nivel de expresión del micro-RNA miR-27a, en una muestra aislada de un sujeto.

2. Método según la reivindicación 1 donde la donde la muestra a analizar es seleccionada entre sangre, suero u orina.

3. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo que comprende el método según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 y comparar dicho nivel de expresión con un valor control, donde la disminución del nivel de expresión de miR

27a, en suero con respecto al valor control es indicativo de daño renal agudo.

4. Método para el diagnóstico y/o pronóstico de daño renal agudo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la expresión del micro-RNA se determina mediante PCR cuantitativa.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones1-3, donde el nivel de expresión del 15 micro-RNA se determina mediante micromatrices de RNA.

6. Uso del micro-RNA miR-27a para el diagnóstico y pronóstico del daño renal agudo.

FIGURA l a)

b)

l2