MÉTODO EX-VIVO PARA EL DIAGNÓSTICO TEMPRANO DE LA ENCEFALOPATÍA HEPÁTICA MÍNIMA MEDIANTE LA DETERMINACIÓN DE 3-NITROTIROSINA EN SUERO.
Método ex-vivo para el diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima mediante la determinación de 3-nitrotirosina en suero se refiere a un método ex-vivo para la detección y diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima (EHM) en pacientes con enfermedades hepáticas,
incluida la cirrosis, basado en la presencia en suero de biomarcadores específicos, concretamente mediante la determinación de 3-nitrotirosina (3-NT) que comprende, la obtención de suero o plasma obtenido de la sangre de los paciente y de los controles, y determinación de si la medida de la concentración de 3-nitrotirosina obtenida es superior o no a un nivel determinado.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201000899.
Solicitante: FUNDACION DE LA COMUNIDAD VALENCIANA CENTRO DE INVESTIGACION PRINCIPE FELIPE.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: FELIPO ORTS, VICENTE, CAULÍ,Omar, MONTOLIU FELIX,Maria Del Carmen.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/48 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Material biológico, p. ej. sangre, orina (G01N 33/02, G01N 33/26, G01N 33/44, G01N 33/46 tienen prioridad ); Hemocitómetros (cómputo de glóbulos repartidos sobre una superficie por barrido óptico de la superficie G06M 11/02).
PDF original: ES-2372842_A1.pdf
Fragmento de la descripción:
Método ex-vivo para el diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima mediante la determinación de 3-nitrotirosina en suero.
Sector técnico de la invención
La presente invención se incluye en el campo de la Farmacología y Química Médica y se refiere a un método ex-vivo para la detección y diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima (EHM) en pacientes con enfermedades hepáticas, incluida la cirrosis, basado en la presencia en suero de biomarcadores específicos, concretamente mediante la determinación de 3-nitrotirosina (3-NT).
Antecedentes de la invención
La encefalopatía hepática (EH) es un término médico asignado para describir una anormalidad neuropsiquiátrica causada por una alteración previa en la función del hígado. Puede ser un trastorno progresivo y crónico ó de aparición aguda y es en algunos casos reversible. La EH es especialmente frecuente en los cirróticos. El término encefalopatía hepática mínima (EHM) se refiere a los cambios sutiles en la función cognitiva y patrones electroencefalográficos en pacientes con enfermedades hepáticas (incluida la cirrosis), que no muestran una evidencia clínica de encefalopatía hepática.
Esta complicación de las enfermedades hepáticas generalmente no es perceptible por el médico. Entre 30% y 50% de los pacientes con cirrosis hepática que no muestran síntomas evidentes de encefalopatía hepática (EH) presentan EHM con deterioro cognitivo leve. La EHM no se detecta en un análisis rutinario pero se puede detectar utilizando pruebas psicométricas o realizando estudios neurofisiológicos (1-4).
La EHM es la primera fase del espectro de la EH (5, 6) y lleva asociada una disminución de la calidad de vida de los pacientes y de su habilidad para realizar tareas de la vida diaria, incluyendo la conducción de vehículos (7, 8). La EHM aumenta el riesgo de padecer accidentes laborales y de tráfico (9), predice la aparición de EH clínica (10) y se asocia con una menor supervivencia (11).
La detección temprana de la EHM permitiría su tratamiento y mejoraría su calidad de vida, prevendría o retrasaría la aparición de la EH clínica y aumentaría la supervivencia de los pacientes. Es por tanto necesario disponer de procedimientos sencillos para el diagnóstico de la EHM en pacientes con enfermedades hepáticas.
En el estado de la técnica, Hernández-Ávila et al. 2001, (12) revisan los distintos marcadores diagnósticos y mecanismos neuroquímicos de la encefalopatía secundaria a la insuficiencia hepática. El documento indica como la génesis de la encefalopatía hepática (EH) es multifactorial, y que es el resultado de la incapacidad del hígado para eliminar del plasma las sustancias con propiedades neuromoduladoras. Concretamente, en el apartado dedicado a la hipótesis del amonio, el documento señala cómo es conocido que un aumento en los niveles de amonio en sangre tiene como consecuencia una mayor captación del mismo por parte del cerebro generando el efecto neurotóxico.
Marco Sezolo et al. 2004, (13) diagnostican la EHM por medio de pruebas neuropsicológicas y neurofisiológicas en pacientes con cirrosis hepática y comparan los distintos métodos de diagnóstico (PSE, presión parcial de NH3 [pNH3] y pruebas neurofisiológicas) para evaluar su eficiencia frente al diagnóstico de encefalopatías hepáticas.
Keiding et al. 2006, (14) estudian mediante la tomografía por emisión de positrones (TEP) el metabolismo del amonio (13N-Ammonia) cerebral en pacientes con cirrosis y encefalopatía hepática (EH) aguda, en pacientes con cirrosis sin encefalopatía hepática y en pacientes sanos. De los estudios realizados se concluye que los pacientes con cirrosis y encefalopatía hepática aguda muestran un aumento en la captación de amonio por parte del cerebro debido principalmente a un aumento de los niveles de amoniaco en sangre y no tanto a un cambio en la cinética cerebral del amoniaco.
Suarez et al. 2006, (15) intentan determinar si las alteraciones en la astroglía y las neuronas está mediada por el oxido nítrico (NO) en modelos experimentales de HE (provocado por una anastomosis porta-cava [PCA]). Concretamente, se estudió la expresión de las NO sintasas (nNOS e iNOS) y la nitrosilación de proteínas en tirosina en el cuerpo estriado de ratas expuestas a PCA durante 1 y 6 meses. Y los resultados de la investigación muestran como en el modelo animal de encefalopatía hepática los niveles de iNOS y la nitrosilación de proteínas en tirosina se ven aumentados en los astrocitos a medida que la exposición a PCA aumenta.
Görg et al. 2006, (16) estudian los efectos de las citoquinas inflamatorias sobre la nitración de la tirosina en astrocitos cultivados de rata y en cerebros de ratas vivas y concluye que puede ser importante para estos y para la patogénesis de EH y otras enfermedades que impliquen la exposición del cerebro a las citoquinas.
Rabbani, N. y Thornalley, P.J. 2008, (17) describen un ensayo para determinar la 3-NT libre en tejidos y fluidos biológicos por medio de cromatografía líquida conjuntamente con la detección por espectrometría de masas. Se comparan los resultados obtenidos de 3-NT en pacientes con diabetes, cirrosis, fallo renal crónico y agudo, y enfermedades neurológicas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer, obtenidos por su método y otras mediciones independientes.
Y más recientemente, Bragagnolo Jr M A et al. 2009 (18) expone que la EHM consiste en un conjunto de alteraciones neuropsiquiatricas en individuos con insuficiencia hepática y/o hipertensión portal. Su fisiopatología es compleja y muy posiblemente multifactorial, aunque los niveles de amonio parecen ser los que mejor explican las alteraciones neuropatológicas y clínicas observadas. De la lectura del documento se concluye que la concentración arterial de amonio no juega un papel importante en el diagnóstico de la EHM.
En la actualidad el diagnóstico de la EHM sólo puede ser establecido mediante pruebas neuropsicológicas y neurofisiológicas (electroencefalograma). El diagnóstico temprano de la EHM puede tener implicaciones de pronóstico y terapéuticas en pacientes cirróticos. Por lo tanto sería muy conveniente y útil en la práctica clínica disponer de un biomarcador periférico, que pudiera ser medido ex-vivo en sangre de los pacientes y que refleje la presencia de EHM en pacientes con enfermedades hepáticas, tales como la cirrosis hepática.
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a un método de diagnóstico realizado ex-vivo en pacientes con cirrosis que permite, a través de la detección de un biomarcador concreto como es la 3-NT, determinar la presencia de EHM, contribuyendo de esta forma a su tratamiento precoz y mejorando la calidad de vida de estos pacientes.
Actualmente el procedimiento de referencia para la detección de la EHM es una batería de 5 pruebas psicométricas denominada en inglés "Psychometric hepatic encephalopathy score" (PHES) (2). Sin embargo, este procedimiento no se utiliza rutinariamente en la práctica clínica porque consume tiempo y requiere ajustes en función de la edad y el nivel educativo de los individuos.
Los autores de la presente solicitud han demostrado que la presencia de EHM se correlaciona con un aumento de la activación de la guanilato ciclasa soluble por óxido nítrico en linfocitos (3) y que los niveles de las citocinas pro-inflamatorias IL-6 e IL-18 en suero también se correlacionan con la EHM (4). Sin embargo, estos parámetros no se están utilizando en el diagnóstico de la EHM. Por ese motivo, han continuado buscando otros biomarcadores en suero que pudieran detectar la EHM con un mejor valor predictivo.
Estudios en modelos animales de EH han mostrado que algunos factores que contribuyen al deterioro cognitivo son las alteraciones en el óxido nítrico y GMP cíclico en cerebro (19, 20) y la neuroinflamación (21).
Descripción detallada de la invención
El procedimiento ex-vivo para el diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima (EHM) en pacientes con cirrosis hepática, según la presente invención, comprende las siguientes etapas:
Reivindicaciones:
1. Procedimiento ex-vivo para el diagnóstico temprano de la encefalopatía hepática mínima (EHM) en pacientes con enfermedades hepáticas, incluida la cirrosis, caracterizado porque comprende las siguientes etapas:
2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque los pacientes que poseen una concentración de 3-nitrotirosina igual o superior al valor de la concentración de 3-nitrotirosina de los sujetos control más 2 veces el valor de la desviación estándar se consideran como pacientes con EHM.
3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque los pacientes que poseen una concentración de 3-nitrotirosina Inferior al valor de la concentración de 3-nitrotirosina de los sujetos control más el doble del valor de la desviación estándar se consideran como pacientes sin EHM.
4. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la 3-nitrotirosina se determina por cromatografía líquida en fase reversa HPLC y se detecta por fluorescencia.
5. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque los pacientes con concentración de 3-nitrotirosina igual o superior a 7.7 nM se consideran como pacientes con EHM.
6. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque los pacientes con concentración de 3-nitrotirosina Inferior a 7.7 nM se consideran como pacientes sin EHM.
7. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la 3-nitrotirosina se determina por cromatografía líquida en fase reversa HPLC y se detecta con un detector electroquímico.
8. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la 3-nitrotirosina se determina por cromatografía de gases y espectrometría de masas.
9. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la 3-nitrotirosina se determina por medio de un ensayo ELISA.
10. Procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la 3-nitrotirosina se determina mediante dot-blot utilizando anticuerpos específicos contra la 3-nitrotirosina.
11. Utilización de la 3-nitrotirosina según las reivindicaciones 1-10 como marcador de diagnóstico específico para la determinación de la presencia de EHM en pacientes con cirrosis hepática.
Patentes similares o relacionadas:
MÉTODO Y SISTEMA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE PARTÍCULAS BASADO EN MEDICIONES MULTIFRECUENCIA DE PLACAS RESONANTES, del 31 de Julio de 2020, de CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS (CSIC): Método y sistema para la identificación de partículas basado en mediciones multifrecuencia de placas resonantes. La invención se refiere a un método de identificación de adsorbatos […]
DISPOSITIVO PORTABLE Y MÉTODO PARA LA ESTIMACIÓN NO INVASIVA DEL NIVEL DE GLUCOSA EN SANGRE, del 30 de Julio de 2020, de UNIVERSIDAD DE SEVILLA: El dispositivo comprende una unidad de medida con un módulo de medición del nivel de glucosa, un primer módulo de computación , para procesar datos de una primera […]
Dispositivos modulares para puntos de atención y usos de los mismos, del 29 de Julio de 2020, de Labrador Diagnostics LLC: Un sistema para la detección automatizada de un analito a partir de una muestra de fluido corporal, que comprende: un dispositivo de fluidos que comprende: […]
DISPOSITIVO PORTABLE Y MÉTODO PARA LA ESTIMACIÓN NO INVASIVA DEL NIVEL DE GLUCOSA EN SANGRE, del 23 de Julio de 2020, de UNIVERSIDAD DE SEVILLA: Dispositivo portable y método para la estimación no invasiva del nivel de glucosa en sangre. El dispositivo comprende una unidad de medida con un módulo […]
DISPOSITIVO PARA LA SELECCIÓN DE ESPERMATOZOIDES, del 23 de Julio de 2020, de INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACION Y TECNOLOGIA AGRARIA Y ALIMENTARIA (INIA): Dispositivo para la selección de espermatozoides que comprende una unidad de selección que comprende a su vez un compartimento de carga (1b) […]
Sistema biométrico, del 13 de Mayo de 2020, de Tascom Co., Ltd: Un cartucho de medición para un sistema biométrico, que comprende: un recipiente de reactivo configurado para acomodar un reactivo líquido […]
Un nuevo antígeno de vacuna no de VIH de la microbiota vaginal capaz de inducir una respuesta de anticuerpos protectores neutralizadores de la mucosa contra la infección por VIH, del 13 de Mayo de 2020, de B Cell Design: Un antígeno de permeasa de Mycoplasma genitalium o un polinucleótido que codifica dicho antígeno en forma expresable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento […]
Métodos para el análisis de una muestra de orina, del 13 de Mayo de 2020, de Arquer Diagnostics Limited: Un método para el análisis de una muestra de orina de un sujeto que comprende a. exponer la muestra de orina a un tampón de lisis que es capaz de liberar una proteína Mcm […]