MÉTODO DE DIAGNÓSTICO DE INSUFICIENCIA RENAL.

La presente invención describe un método de diagnóstico de Insuficiencia Renal que comprende determinar la cantidad de PTHrP presente en una muestra de orina de un sujeto,

comparar dicha cantidad con al menos un valor de referencia y diagnosticar IR en dicho sujeto a partir de la comparación anterior. La determinación de la cantidad de PTHrP puede realizarse mediante un ensayo de transferencia Western o un Dot Blot. Establece la PTHrP como biomarcador para el diagnóstico de Insuficiencia Renal en todas las variedades de la enfermedad.

Método de diagnóstico de insuficiencia renal

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención describe un método de diagnóstico de Insuficiencia Renal (IR) en cualquiera de sus formas clínicas en una muestra de orina de un mamífero, preferiblemente humano. Tiene aplicación en las terapias a aplicar para IR y patologías asociadas, en el campo de la medicina.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La enfermedad renal puede ser aguda o crónica y ambas progresan a Insuficiencia Renal (IR) y muerte en último término. En las últimas décadas se ha producido un aumento en rango epidémico de la incidencia de Insuficiencia Renal Crónica (IRC) más acusado en los países desarrollados. La IRC conlleva la pérdida de la función fisiológica del riñón, conocida propiamente como insuficiencia renal. La forma aguda de presentación de la insuficiencia renal se denomina Fracaso Renal Agudo (FRA) . La pérdida de la función renal se caracteriza, desde el punto de vista bioquímico, por la uremia o retención de productos nitrogenados o urea en la sangre. Ambas formas de insuficiencia renal pueden tener múltiples causas así como un curso y pronóstico muy variables.

No existen terapias eficientes contra el FRA. En pacientes hospitalizados es una de las principales fuentes de morbilidad y mortalidad complicando el curso del 5% de las admisiones hospitalarias y el 30% de los ingresos en las unidades de cuidados intensivos. La incidencia anual de FRA supera los 400 casos por millón de población de los cuales más de 130 requieren tratamiento sustitutivo de la función renal.

La clave diagnóstica en la técnica de la IR es la elevación sanguínea en la concentración de urea y, de forma más específica, de la creatinina. Sin embargo en los últimos años se ha puesto de manifiesto que estos parámetros pueden tardar días en subir y retrasar por tanto el diagnóstico y tratamiento del FRA. Esto se debe a que tanto la urea como la creatinina son fundamentalmente marcadores de la filtración glomerular renal y no tanto de la función del túbulo renal, que es la zona del riñón más comúnmente afectada en el FRA (P.T. Murray, P. Palevsky, “Acute Kidney Injur y and Critical Care Nephrology”. 2009. NephroSAP 8: 173) . Otro inconveniente que plantean es la necesidad de realizar una extracción de sangre del paciente para el diagnóstico.

Es por ello que en años recientes se ha intensificado la búsqueda e identificación de nuevas moléculas biomarcadoras de IR, de forma particular en orina. Actualmente se han reconocido diversas moléculas como biomarcadores, la mayor parte de las cuales están aún en plena fase de investigación obteniendo sus resultados más representativos cuando se utilizan de forma conjunta (W.K. Han et al. “Urinar y biomarkers in the early detection of acute renal failure after cardiac surger y ”. 2009. Clinical Journal of the American Society of Nephrology 4: 873) . Existe por tanto la necesidad de desarrollar nuevos marcadores biológicos que permitan el diagnóstico precoz de enfermedad renal, tanto de IRC como de FRA, aún antes de la aparición de los trastornos funcionales en que se basan los principales métodos diagnósticos disponibles en la actualidad.

En este sentido, la solicitud internacional WO 2008/089936 A1 describe los marcadores FGF23 (fibroblast growth factor) y adiponectina para la detección de IRC en una muestra biológica de pacientes. Tanto FGF-23 como adiponectina aumentan en forma sensible y específica su nivel en plasma a medida o como consecuencia de que disminuye la función renal y, por tanto, están inversamente relacionados con ella. Aunque se cita como muestra biológica no se aporta la determinación o cuantificación en orina de estos biomarcadores, de modo que sólo queda certificada su presencia en plasma sanguíneo.

Como biomarcadores de FRA han sido identificados: KIM-1 (Urinar y kidney molecule-1) , lipacalina asociada a gelatinasa de neutrófilo, N-acetil-β-d-glucuronidasa, L-FABP (liver fatty acid-binding protein) , interleuquina-18, Cistatina C etc. El gran inconveniente de todos ellos es la necesidad de normalizar la excreción urinaria de los biomarcadores con la excreción propia de creatinina. Dado que el nivel de creatinina es muy variable en FRA existe el riesgo potencial de subestimar o sobrestimar los valores de excreción de los biomarcadores (S.S. Waikar, V. S. Sabbisetti, J.B. Bonventre: Normalization of urinar y biomarkers to creatinina during changes in glomerular filtration rate. Kidney International 78:486, 2010) . Aunque el conocimiento de estas moléculas representa un gran avance en la fisiopatología del FRA, queda aún por demostrar el valor exacto que representan en su diagnóstico precoz, esto es, antes de la presencia de alteraciones funcionales y del consiguiente aumento de urea y creatinina séricos. (S.G. Coca, R. Yalavarthy, J. Concato, C.R. Parikh: Biomarkers for the diagnosis and risk stratification of acute kidney injur y : A systemic review. Kidney International 73:1008, 2008) .

La Hormona Paratiroidea (PTH) es una hormona clásica que juega un papel central en la regulación del metabolismo del calcio y del fósforo. Menos se sabe acerca del papel fisiológico de la Proteína relacionada con la Hormona Paratiroidea (PTHrP) , la proteína biomarcadora de la invención, que fue identificada por primera vez en 1987 como el agente responsable de la hipercalcemia maligna.

La PTHrP consta de 141 residuos aminoacídicos, de los cuales los primeros 13 presentan un 70% de homología con la correspondiente secuencia de la hormona PTH. Aunque la PTHrP y la PTH son expresadas por genes diferentes, ambas proteínas interactúan con el receptor común PTH/PTHrP en hueso y riñón, también llamado receptor PTH/PTHrP "tipo 1" o clásico. Este hecho se traduce en la evidente repercusión clínica de la similitud de patologías que de ello se derivan, como son la hipercalcemia maligna y el hiperparatiroidismo primario. Por otra parte, se sabe que la PTHrP debido a cambios post transcripcionales puede dar origen a diferentes fragmentos cuya actividad biológica no ha sido aún completamente estudiada. A pesar de que estos fragmentos presentan acciones similares sobre hueso y riñón, existen algunas diferencias en sus actividades biológicas.

En contraste con situaciones patológicas como la hipercalcemia humoral maligna en la que la PTHrP desempeña el papel de la PTH, bajo circunstancias de salud del paciente la PTHrP juega predominantemente un papel paracrino y/o autocrino. Entre sus funciones fisiológicas deben destacarse: 1) la regulación del tono muscular en sistema vascular, intestinal, uterino y vesicular; 2) la regulación del transporte de calcio transepitelial en riñón, placenta, ovarios y glándulas mamarias, y 3) la regulación del desarrollo de órganos y tejidos, así como su diferenciación y proliferación (Philbrick, W.M. et al., “Defining the roles of parathyroid hormone-related protein in normal physiology”. 1996. Physiological Reviews, 76, 127-173) .

A pesar de la amplia producción de PTHrP en individuos sanos su concentración plasmática es apenas detectable por los ensayos clínicos habituales, mucho menos en orina. Nunca se ha descrito la función de la proteína como biomarcador, y en particular nunca de patologías relacionadas con la insuficiencia renal.

El problema que se presenta por tanto en la técnica es encontrar un biomarcador para el diagnóstico de IRC y FRA en un paciente, que evite la extracción invasiva de la muestra biológica necesaria y que ofrezca un valor de diagnóstico previo a los síntomas de dichas enfermedades. La solución propuesta por la presente invención es la determinación de la PTHrP presente en una muestra de orina de un paciente de IR.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La invención describe el diagnóstico de insuficiencia renal, aguda o crónica, mediante la cuantificación urinaria de la PTHrP. La PTHrP es normalmente indetectable en fluidos orgánicos de un individuo sano, de forma que su mera presencia ya sirve de marcador de la enfermedad. El hallazgo de un valor aumentado de PTHrP urinario en comparación al valor hallado en sujetos sanos resulta un biomarcador indicativo de insuficiencia renal, aguda o crónica. Dado que el procedimiento descrito en la presente invención sólo requiere el análisis de una muestra aislada de orina, hace posible realizar el diagnóstico de insuficiencia renal aguda o crónica en muestras aisladas de orina de pacientes o en muestras únicas, e incluso en muestras de orina antiguas permitiendo el diagnóstico retrospectivo aún en ausencia de suero o plasma.

La presente invención es por tanto un método de diagnóstico de IR, que comprende determinar la cantidad de PTHrP...

1. Un método de diagnóstico de IR, que comprende:

- determinar la cantidad de PTHrP presente en una muestra de orina de un sujeto,

- comparar dicha cantidad con al menos un valor de referencia, y 5 -diagnosticar IR en dicho sujeto a partir de la comparación anterior.

2. Método según la reivindicación 1, en que dicha determinación de la cantidad de PTHrP comprende un ensayo de transferencia western o un ensayo dot blot.

3. Método según las reivindicaciones 1 ó 2, en que dicho valor de referencia está obtenido a partir de una muestra control.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en que dicho sujeto es un mamífero.

5. Método según la reivindicación 4, en que dicho mamífero es un humano.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en que dicha IR es FRA o IRC, o patologías asociadas.

7. Método según la reivindicación 6, en que dicha IRC es una IRC secundaria a nefropatía diabética, 15 nefroangioesclerosis o glomerulonefritis.

8. Uso de la medición de la cantidad de PTHrP en orina para la preparación de un producto farmacéutico útil para el diagnóstico de IR en un sujeto.

9. Un kit para el diagnóstico de IR, que comprende los reactivos necesarios para determinar la cantidad de PTHrP

en una muestra de orina de un sujeto, instrucciones de uso de dichos reactivos y un dispositivo para determinar 20 si el resultado de dicha cuantificación de PTHrP es indicativo de diagnóstico positivo de IR en dicho sujeto.

10. Un kit para realizar un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende los reactivos necesarios para cuantificar la cantidad de PTHrP en una muestra de orina de un sujeto y que permite la comparación del resultado de dicha cuantificación con un estándar predeterminado.

11. Kit según una de las reivindicaciones 9 ó 10, en que dicho sujeto es un humano.