Formulaciones para proteínas de fusión TACI-inmunoglobulina.

Una formulación que comprende:

a) Proteína de fusión TACI-inmunoglobulina (TACI-5 Ig) que comprende:

i. el dominio extracelular de TACI o un fragmento o una variante del mismo que se une a BlyS y/oAPRIL; y

ii. un dominio constante de inmunoglobulina;

b) un tampón de acetato que tampona la formulación a un pH en el intervalo entre 4,9 y 5,1; y

c) trealosa en una concentración en el intervalo de 600 a 100 mg/ml.

Formulaciones para proteínas de fusión TACI-inmunoglobulina.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está en el campo de las formulaciones de proteínas terapéuticas. Más específicamente, se refiere a formulaciones para proteínas de fusión TACI-inmunoglobulina (Ig) que tienen un intervalo de pH de 4, 5 a 5, 5, como se define en las reivindicaciones.

1.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Familia del ligando receptor BlyS

Se han identificado tres receptores, TACI (activador transmembrana e interactor de CAML) , BCMA (antígeno de maduración de linfocitos B) y BAFF-R (receptor para el factor activante de linfocitos B) , que tienen afinidades de unión únicas para los dos factores de crecimiento BlyS (estimulador de linfocitos B) y APRIL (un ligando de inducción de la proliferación) (Marsters y col. 2000; Thompson y col. 2001)

Tanto TACI como BCMA se unen a BLyS y APRIL, mientras que parece que BAFF-R es capaz de unirse solo a BlyS con alta afinidad (Marsters y col., 2000; Thompson y col. 2001) . Como resultado, BlyS es capaz de señalizar a través de los tres receptores, mientras que parece que APRIL solo es capaz de señalizar a través de TACI y BCMA. Además, se han identificado complejos heterodímeros en la circulación de BlyS y APRIL (agrupamientos de tres subunidades de proteínas, que contienen una o dos copias de cada una de las subunidades de BlyS y APRIL) en muestras de suero tomadas de pacientes con enfermedades reumáticas basadas en sistema inmunitario, y se ha mostrado que inducen la proliferación de linfocitos B in vitro (Roschke y col., 2002) .

BlyS y APRIL son estimuladores potentes de la maduración, proliferación y supervivencia de linfocitos B (Moore y col., 1999; Schneider y col., 1999; Do y col., 2000) . BLyS y APRIL pueden ser necesarios para la persistencia de las enfermedades autoinmunitarias, en especial las que implican linfocitos B. Ratones transgénicos genéticamente modificados para expresar niveles altos de BlyS presentan trastornos de células inmunitarias y presentan síntomas similares a los observados en pacientes con lupus eritematoso sistémico (Gross y col. 2000; Mackay y col. 1999) . Igualmente, se han medido niveles aumentados de BlyS/APRIL en muestras de suero tomadas de pacientes con lupus eritematoso sistémico y otros pacientes con diferentes enfermedades autoinmunitarias tales como artritis reumatoide (Roschke 2002; Cheema y col. 2001; Groom y col. 2002) , que extienden la asociación de BlyS y/o APRIL y las enfermedades mediadas por linfocitos B de modelos animales a seres humanos. La expresión de BlyS y APRIL está regulada por aumento en monocitos de sangre periférica y linfocitos T de pacientes con EM (Thangarajh y col., 2004; Thangarajh y col., 2005) . En las lesiones de EM, se encontró que la expresión de BLyS era muy regulada por aumento en astrocitos localizados cerca de las células inmunitarias que expresan BAFF-R

(Krumbholz y col., 2005) .

Atacicept

Atacicept (INN) es una proteína de fusión recombinante que contiene la parte extracelular de unión al

ligando del receptor TACI (activador transmembrana y modulador de calcio e interactor del ligando de la ciclofilina (CAML) ) y la parte Fc modificada de la IgG humana. Atacicept actúa como un antagonista de BLyS (estimulador de linfocitos B) y APRIL (un ligando de inducción de la proliferación) , ambos miembros de la superfamilia del factor de necrosis tumoral (TNF) . Se ha mostrado que BlyS y APRIL son reguladores importantes de la función de maduración y supervivencia de linfocitos B.

Atacicept es una glicoproteína soluble que contiene 313 aminoácidos, que resulta de la fusión de una IgG1-Fc humana y una porción del dominio extracelular del receptor de BlyS de TACI, con una masa prevista de 35, 4 kilodalton (kDa) . La conformación del producto es dimérica, con una masa prevista de 73, 4 kDa. Atacicept se produce en células de ovario de hámster chino (CHO) por tecnología recombinante.

En atacicept la IgG1-Fc humana se modificó para reducir la unión de Fc al componente C1q del complemento y la interacción con receptores de anticuerpos (Tao y col., 1993; Canfield y col., 1991) . Se ensayó atacicept y se confirmó la reducción de estas funciones efectoras de Fc.

Formulaciones de proteínas terapéuticas [0008] Las proteínas de fusión TACI-Ig como atacicept, son biológicas, es decir, proteínas terapéuticas para el tratamiento de enfermedades humanas y por lo tanto para la administración humana.

Se desarrollan formulaciones con el fin de apoyar el suministro satisfactorio de proteínas terapéuticas. Los problemas que se encuentran con frecuencia en el contexto de las proteínas terapéuticas son, p. ej., la poca estabilidad de la proteína (a menudo es necesario el almacenamiento en el frigorífico o congelador) , poca biodisponibilidad, y formas farmacéuticas antipáticas para el paciente, normalmente por vía parenteral

En los procedimientos de producción biotecnológica, las proteínas terapéuticas en general se obtienen en una forma muy purificada en disolución acuosa. Cuando se formulan estas disoluciones de proteínas, p. ej., para el suministro parenteral, es importante la estabilización de la proteína. Por lo tanto, deben seleccionarse excipientes que estabilicen la proteína. A la estabilidad de proteínas muy purificadas en disolución también le puede afectar el

tampón. Los tampones afectan a la estabilidad de una proteína en disolución tanto por la fuerza iónica como por el pH de la disolución. Los ejemplos de tampones que se han usado para este propósito son tampones de fosfato, citrato, maleato y succinato.

Incluso si la proteína terapéutica esta en disolución al inicio de su vida en anaquel, el reto es mantener la 20 proteína en disolución y prevenir la agregación durante el almacenamiento, que conduce a la formación de partículas o la precipitación, y prevenir la degradación (p. ej., por hidrólisis, oxidación, desamidación, truncado o desnaturalización) .

La temperatura también influye en la solubilidad. Normalmente, la solubilidad aumenta con la temperatura. 25 Sin embargo, por encima de un determinado umbral de temperatura, la proteína puede desplegarse parcialmente conduciendo a una menor solubilidad o a la agregación/precipitación.

Con el fin de prevenir la agregación y degradación y con el fin de obtener un fármaco que es estable a lo largo de un periodo de tiempo prolongado, es necesario desarrollar una formulación que contenga uno o más 30 excipientes que estabilicen la proteína terapéutica.

La presente invención aborda la necesidad de una formulación estable y farmacéuticamente aceptable de proteínas de fusión TACI-inmunoglobulina, que se usan como proteínas terapéuticas para el tratamiento de la enfermedad humana.

El documento WO 01/60397 describe agonistas y antagonistas de moléculas relacionadas con el factor de necrosis tumoral (TNF) y usos de los mismos.

El documento WO 02/094852 describe proteínas de fusión TACI-inmunoglobulina para usar como 40 compuestos terapéuticos.

El documento WO 2007/059188 describe un anticuerpo dirigido contra CD-20 para usar en el tratamiento del daño articular.

El documento US 2006/067933 describe polipéptidos relacionados con el receptor de TNF solubles, polinucleótidos y composiciones relacionadas, y usos de los mismos.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se basa en el desarrollo de formulaciones estables para proteínas de fusión TACIinmunoglobulina.

En un primer aspecto, la formulación de la invención comprende:

a) Proteína de fusión TACI-inmunoglobulina (TACI-Ig) que comprende i. el dominio extracelular de TACI o un fragmento o variante del mismo que se une a Blys y/o APRIL; y

ii. un dominio constante de inmunoglobulina; y b) un tampón de acetato que tampona la formulación a un pH en el intervalo entre 4, 9 y 5, 1; y

c) trealosa en una concentración en el intervalo de 600 a 100 mg/ml.

En un segundo aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende dicha formulación.

Un tercer aspecto de la invención se refiere a la formulación o la composición farmacéutica de la invención para usar en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o un trastorno linfoproliferativo.

La memoria descriptiva describe un procedimiento para preparar una formulación de acuerdo con la invención, que comprende la etapa de preparar una disolución líquida de la proteína de fusión TACI-Ig y ajustar el pH de dicha disolución líquida a un pH en el intervalo de 4, 5 a 5, 5.

Un procedimiento para... [Seguir leyendo]

1. Una formulación que comprende:

a) Proteína de fusión TACI-inmunoglobulina (TACI-Ig) que comprende:

i. el dominio extracelular de TACI o un fragmento o una variante del mismo que se une a BlyS y/o APRIL; y

ii. un dominio constante de inmunoglobulina;

b) un tampón de acetato que tampona la formulación a un pH en el intervalo entre 4, 9 y 5, 1; y

c) trealosa en una concentración en el intervalo de 600 a 100 mg/ml.

2. La formulación de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho tampón de acetato está en una concentración de 5 a 25 mM.

3. La formulación de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en la que dicho tampón de acetato está en una concentración 10 mM.

4. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho tampón de acetato es tampón de acetato sódico.

5. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que tiene un pH de 5, 0.

6. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la trealosa está en una concentración de 80 mg/ml.

7. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha proteína de fusión TACI-Ig está comprendida en una concentración entre 20 y 180 mg/ml.

8. La formulación de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicha proteína de fusión TACI-Ig está en una concentración de 70, 75, 100, 125 ó 150 mg/ml.

9. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho fragmento del dominio extracelular de TACI comprende los restos de aminoácidos de 34 a 66 y/o los restos de aminoácidos de 71 a 104 de la SEQ ID NO: 1.

10. La formulación de acuerdo con la reivindicación 9, en la que dicho fragmento del dominio extracelular de TACI comprende los restos de aminoácidos de 30 a 110 de la SEQ ID NO: 1, o una variante de los mismos que son al menos 90% idénticos a los mismos, o que tienen menos de 10 sustituciones de aminoácidos conservativas, uniéndose la variante a BlyS y/o APRIL.

11. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho dominio constante de inmunoglobulina comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 2 o una variante de la misma que comprende menos de 20 sustituciones de aminoácidos conservativas.

12. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha proteína de fusión TACI-Ig comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 3, o una variante de la misma que es al menos 90% idéntica a la misma, o que tiene menos de 30 sustituciones de aminoácidos conservativas, uniéndose la variante a BlyS y/o APRIL.

13. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que además comprende una combinación de alcohol bencílico y cloruro de benzalconio.

14. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la formulación está en forma líquida.

15. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la formulación es para la administración de múltiples dosis.

16. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la 5 formulación comprende:

dicha proteína de fusión TACI-Ig en una concentración comprendida entre 70 y 180 mg/ml; trealosa en una concentración comprendida entre 60 y 100 mg/ml; y tampón de acetato sódico en una concentración 10 mM.

17. La formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, para usar en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o una enfermedad linfoproliferativa.

18. Un procedimiento para preparar la formulación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a

16, que comprende la etapa de mezclar la proteína de fusión TACI-Ig, tampón de acetato y trealosa en una concentración en el intervalo de 60 a 100 mg/ml, y ajustar el pH en el intervalo de 4, 9 a 5, 1.

19. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 18, que además comprende la etapa de poner una cantidad predeterminada de la formulación en un recipiente estéril. 20

20. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el recipiente estéril se selecciona de un vial de vidrio o una jeringa precargada.