Inmunoensayos para proteínas altamente cargadas positivamente.

Un método para la cuantificación automática de una proteína con carga positiva alta en una muestra de líquido sinovial humano que comprende las etapas de:



a) tratamiento previo de la muestra de líquido sinovial humano, comprendiendo la etapa de tratamiento previo

- agregar una solución de hialuronidasa a la muestra de líquido sinovial humano,

- incubar dicha muestra a una temperatura en el intervalo de 15 a 25ºC,

- Centrifugar la muestra de líquido sinovial humano.

b) diluir la muestra de líquido sinovial humano tratada previamente con un tampón,

c) inmovilizar un anticuerpo biotinilado contra la proteína con carga positiva alta en una columna,

d) lavar la columna para eliminar el anticuerpo no unido con un tampón de lavado estándar,

e) proporcionar un medio de inyección para la transferencia automática de la muestra de líquido sinovial humano tratada previamente y diluida a la columna,

f) lavar los medios de inyección con un tampón de alta fuerza iónica antes de transferir la muestra de líquido sinovial humano tratada previamente y diluida a la columna,

g) transferir la muestra de líquido sinovial humano tratado previamente y diluido a la columna, poniendo así en contacto la muestra de líquido sinovial humano tratado previamente y diluido con el anticuerpo biotinilado inmovilizado en condiciones en las que el anticuerpo se une específicamente a la proteína con carga positiva alta, para producir un complejo anticuerpo-proteína,

h) lavar los medios de inyección con un tampón de alta fuerza iónica después de la etapa g)

i) lavar la columna con un tampón de lavado estándar;

j) agregar al complejo anticuerpo-proteína en la columna un anticuerpo fluorescente marcado con un tinte específico para la proteína con carga positiva alta para producir una respuesta medible, y lavar la columna con un tampón de lavado estándar,

k) medir la respuesta producida,

l) determinar una cantidad de la proteína cargada positivamente en la muestra comparando la respuesta producida con la muestra con la respuesta producida con un estándar de calibración, en donde la proteína cargada positivamente tiene un punto isoeléctrico de 9,5 o por encima de éste.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2016/051808.

Solicitante: ARES TRADING S.A..

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: ZONE INDUSTRIELLE DE L'OURIETTAZ 1170 AUBONNE SUIZA.

Inventor/es: BERTOTTI,ELISA, CASTAGNA,VALERIA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • G01N33/53 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/543 G01N 33/00 […] › con un soporte insoluble para la inmovilización de compuestos inmunoquímicos.
  • G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2736948_T3.pdf

 

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