EMPLEO DE ANTICUERPOS ANTI-BETA-LACTOGLOBULINA EN EL DIAGNÓSTICO Y SEGUIMIENTO DE LA ENFERMEDAD CELÍACA.
Empleo de anticuerpos anti-beta-lactoglobulina en el diagnóstico y seguimiento de la enfermedad celiaca.
Los anticuerpos anti-beta-lactoglobulina pueden ser utilizados en el diagnóstico y/o seguimiento de la enfermedad celiaca, así como en la evaluación de la respuesta y/o la adherencia a una dieta libre de gluten en enfermos celíacos.
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201131979.
Solicitante: UNIVERSIDAD PABLO DE OLAVIDE.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: SORIA ESCOMS,BERNAT, MARTÍN BERMUDO,Francisco Manuel, ORTEGA DE LA TORRE,Mª Ángeles.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K39/395 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
- G01N33/53 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
PDF original: ES-2407055_A1.pdf
Fragmento de la descripción:
Empleo de anticuerpos anti-beta-lactoglobulina en el diagnóstico y seguimiento de la enfermedad celíaca.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se relaciona con métodos y kits para el diagnóstico y/o seguimiento de la enfermedad celíaca, así como con métodos y kits para la evaluación de la respuesta y/o la adherencia a una dieta libre de gluten en enfermos celíacos. Las metodologías de la invención están basadas en la determinación del nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en muestras de sangre o de suero de un sujeto que padece o es susceptible de padecer celiaquía.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La celiaquía o enfermedad celíaca es una enfermedad autoinmune que aparece en personas genéticamente predispuestas y que se caracteriza por una inflamación crónica de la parte proximal del intestino delgado, causada por la exposición a la gliadina. La gliadina es uno de los componentes principales del gluten, por lo que el único tratamiento a día de hoy para la celiaquía es la estricta ausencia de gluten en la dieta.
Los síntomas de la enfermedad celíaca incluyen diarrea crónica, retraso del crecimiento y/o desarrollo infantil, fatiga, erupciones en la piel, pérdida de peso, cambios en el carácter (irritabilidad, apatía, introversión, tristeza) , vómitos, distensión abdominal, pérdida de apetito, fatiga, etc.
La prevalencia de la enfermedad celíaca en europeos y sus descendientes es del 1%, siendo más frecuente en las mujeres con una proporción 2:1. Habitualmente la celiaquía se manifiesta durante la etapa infantil, aunque se ha demostrado que también puede manifestarse a lo largo de la etapa adulta.
En un intestino funcionalmente normal, la mucosa actúa, por una parte, como una barrera física entre el lumen intestinal y la submucosa, y, por otra, como un tejido paracrino que contribuye a orquestar la fisiología del intestino y su respuesta inmune. Ante un aumento de la permeabilidad intestinal, como la descrita en enfermedades con marcado componente autoinmune, como la celiaquía, la integridad de la barrera física disminuye, y por tanto el sistema inmune está expuesto a más antígenos y posiblemente se hace más reactivo.
Los pacientes tratados con dietas libres de gluten muestran menores actividades séricas de antígenos frente al gluten. Sin embargo, esa reducida actividad al gluten, tras la introducción de este tipo de dietas, puede ser consecuencia del catabolismo de los anticuerpos ya formados, así como de una disminución de su síntesis por una menor estimulación antigénica al gluten, y no necesariamente por una mejora en la integridad de la mucosa intestinal.
La estrategia actual de diagnóstico para la enfermedad celíaca se basa fundamentalmente en demostrar una enteropatía dependiente del gluten, para lo cual aún se utilizan preferentemente métodos invasivos (biopsias) , aunque también se analizan marcadores séricos como los anticuerpos frente a la gliadina. Sin embargo, aún no hay métodos analíticos fiables para el seguimiento de la efectividad del tratamiento propuesto, ya que el análisis histológico de biopsias duodenales no es factible como método de monitorización rutinario para analizar la remisión y eficacia del tratamiento.
Se ha propuesto la determinación de los niveles de anticuerpos frente a otros antígenos alimentarios, así como las medidas de la permeabilidad intestinal como métodos de diagnóstico alternativos de celiaquía (Wahnschaffe U et al. Gastroenterology 2001; 121 (6) :1329-1338; Arranz E et al. Gut 1994; 35 (4) : 476-482) . Estos métodos tendrían como ventaja la ausencia de requerimiento de muestras de biopsias.
Los métodos analíticos actuales de la enfermedad celíaca basados en el análisis histológico de biopsias duodenales tampoco permiten evaluar la adherencia a una dieta libre de gluten por parte de los celíacos. Se ha sugerido que el análisis de los cambios cuantitativos y cualitativos en anticuerpos relacionados con la enfermedad celíaca puede ser de utilidad para monitorizar la adherencia al tratamiento con dieta libre de gluten, y de hecho, algunos de los anticuerpos analizados para ello son los anticuerpos frente a la transglutaminasa (anti-tTG) y a la gliadina desaminada (AGA) . Sin embargo, estos análisis no reflejan necesariamente el grado real de integridad intestinal, ya que una disminución en esos anticuerpos puede ser consecuencia de un aumento de su catabolismo o una disminución de su síntesis por menor estimulación antigénica al gluten en las dietas libres de gluten.
Por lo tanto, a la vista del estado de la técnica, sigue existiendo la necesidad de desarrollar métodos que permitan tanto el diagnóstico como el seguimiento de la enfermedad celíaca cuya fiabilidad sea mayor o al menos aporten más información que la de los métodos descritos hasta la fecha, y que permita una monitorización rutinaria de la evolución de la enfermedad. Asimismo, se hace necesario también el desarrollo de una metodología que permita evaluar tanto la respuesta como el seguimiento a una dieta libre de gluten en los enfermos celíacos.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN
En un primer aspecto, la invención se relaciona con un método de diagnóstico in vitro de celiaquía en un sujeto que comprende
(i) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina; y
(ii) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (i) con el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en una muestra de referencia;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en la muestra de dicho sujeto mayor que el nivel de dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en dicha muestra de referencia es indicativo de que dicho sujeto padece celiaquía.
En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro de evaluación de la respuesta a una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía que comprende
(i) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina antes del inicio de la dieta libre de gluten;
(ii) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iii) comparar los niveles de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenidos en (i) e (ii) ;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ii) inferior al obtenido en (i) es indicativo de que la respuesta de dicho sujeto a la dieta libre de gluten es favorable.
En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro de evaluación de la efectividad de una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía que comprende (ia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina antes del inicio de la dieta libre de gluten;
(iia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iiia) comparar los niveles de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenidos en (ia) e (iia) ,
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (iia) inferior al obtenido en (ia) es indicativo de que la dieta libre de gluten es efectiva;
o alternativamente,
(ib) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iib) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) con el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en una muestra de referencia;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) inferior al nivel de dicho anticuerpo antibeta-lactoglobulina en dicha muestra de referencia es indicativo de que la dieta libre de gluten es efectiva.
En otro aspecto, la invención se relaciona con un método in vitro de evaluación de la adherencia a una dieta libre de gluten por parte de un sujeto que padece celiaquía sometido a una dieta libre de gluten que comprende (ia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina a un tiempo t1;
(iia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina a un tiempo t2, en donde t2 corresponde a un punto en el tiempo posterior a t1; y
(iiia) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método de diagnóstico in vitro de celiaquía en un sujeto que comprende
(i) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina; y
(ii) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (i) con el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en una muestra de referencia;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en la muestra de dicho sujeto mayor que el nivel de dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en dicha muestra de referencia es indicativo de que dicho sujeto padece celiaquía.
2. Método in vitro de evaluación de la respuesta a una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía que comprende
(i) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina antes del inicio de la dieta libre de gluten;
(ii) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iii) comparar los niveles de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenidos en (i) e (ii) ;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ii) inferior al obtenido en (i) es indicativo de que la respuesta de dicho sujeto a la dieta libre de gluten es favorable.
3. Método in vitro de evaluación de la efectividad de una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía que comprende (ia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina antes del inicio de la dieta libre de gluten;
(iia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iiia) comparar los niveles de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenidos en (ia) e (iia) ,
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (iia) inferior al obtenido en (ia) es indicativo de que la dieta libre de gluten es efectiva;
o alternativamente,
(ib) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina al cabo de un periodo de tiempo transcurrido desde el inicio de la dieta libre de gluten; y
(iib) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) con el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en una muestra de referencia;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) inferior al nivel de dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en dicha muestra de referencia es indicativo de que la dieta libre de gluten es efectiva.
4. Método in vitro de evaluación de la adherencia a una dieta libre de gluten por parte de un sujeto que padece celiaquía sometido a una dieta libre de gluten que comprende (ia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina a un tiempo t1;
(iia) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina a un tiempo t2, en donde t2 corresponde a un punto en el tiempo posterior a t1; y
(iiia) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenidos en (ia) y (iia) ;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (iia) inferior al valor obtenido en (ia) es indicativo de adherencia a la dieta libre de gluten por parte de dicho sujeto;
o, alternativamente,
(ib) determinar en una muestra de sangre o de suero de dicho sujeto el nivel de anticuerpo anti-betalactoglobulina; y
(iib) comparar el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) con el nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en una muestra de referencia;
en donde un nivel de anticuerpo anti-beta-lactoglobulina obtenido en (ib) inferior al nivel de dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina en dicha muestra de referencia es indicativo de adherencia a la dieta libre de gluten por parte de dicho sujeto.
5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho sujeto tiene una dieta alimenticia que incluye leche y/o derivados lácteos.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicha beta-lactoglobulina es una betalactoglobulina de un animal rumiante.
7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha beta-lactoglobulina es betalactoglobulina bovina.
8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicha beta-lactoglobulina es betalactoglobulina de vaca.
9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que los niveles de anticuerpo anti-betalactoglobulina se determinan mediante un inmunoensayo, preferentemente un inmunoensayo tipo ELISA, un inmunoensayo por cromatografía de flujo lateral basado en el empleo de tiras inmunocromatográficas o un inmunoensayo basado en el empleo de inmunobiosensores.
10. Método según la reivindicación 1, en el que la muestra de referencia es una muestra de un sujeto, o conjunto de sujetos, diagnosticado como no celíaco.
11. Método según la reivindicación 3, en el que la muestra de referencia de la etapa (iib) es una muestra de un sujeto, o conjunto de sujetos, diagnosticado como no celíaco.
12. Método según la reivindicación 4, en el que la muestra de referencia de la etapa (iib) es una muestra de un sujeto, o conjunto de sujetos, diagnosticado como no celíaco.
13. Una tira inmunocromatográfica para la detección de anticuerpos frente a beta-lactoglobulina, que comprende:
-una región de reacción, que comprende un primer componente de unión al anticuerpo anti-betalactoglobulina, en donde dicho primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina es movible y está embebido en un material poroso; y
-una región de test, que comprende un segundo componente de unión al anticuerpo anti-betalactoglobulina inmovilizado en dicha región de test;
en donde dicho primer y segundo componente de unión se seleccionan del grupo formado un antígeno específico para el anticuerpo anti-beta-lactoglobulina, o un fragmento de dicho antígeno con capacidad de unión a dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina.
14. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 13, en la que dicho primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina es beta-lactoglobulina o un fragmento de beta-lactoglobulina con capacidad de unión a dicho anticuerpo anti-beta-lactoglobulina.
15. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 13, en la que dicho primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina está en forma seca o deshidratada.
16. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 13, en la que dicho primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina está unido y/o recubriendo unas microesferas.
17. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 16, en la que dichas microesferas están coloreadas.
18. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 16, en la que dichas microesferas están en forma seca o deshidratada.
19. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 18, en la que dichas microesferas en forma seca o deshidratada se reconstituyen en contacto con la muestra.
20. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 13, que comprende, además, una región de recepción para recibir la muestra.
21. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 20, en la que dicha región de recepción se sitúa en la región de reacción que comprende el primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina.
22. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 20, en la que dicha región de recepción se sitúa en una región diferente de la región de reacción que comprende el primer componente de unión al anticuerpo antibeta-lactoglobulina.
23. Tira inmunocromatográfica según la reivindicación 13, que comprende:
a) unas primeras microesferas, coloreadas en un primer color, en forma seca o deshidratada y susceptibles de ser reconstituidas en contacto con la muestra a analizar, en donde dichas primeras microesferas están unidas a, o recubiertas total o parcialmente por un primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina; y
b) unas segundas microesferas, coloreadas en un segundo color, diferente a dicho primer color, opcionalmente, en forma seca o deshidratada y susceptibles de ser reconstituidas en contacto con la muestra a analizar, en donde dichas segundas microesferas están unidas a, o recubiertas total o parcialmente por una proteína-control, en donde dicha proteína-control es una proteína diferente a dicho primer componente de unión al anticuerpo anti-betalactoglobulina.
24. Un kit que comprende al menos una tira inmunocromatográfica según cualquiera de las reivindicaciones 13 a 23.
25. Uso de un kit que comprende un primer componente de unión al anticuerpo anti-beta-lactoglobulina para
-diagnosticar celiaquía en un sujeto; o para
-evaluar la respuesta a una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía; o para
-evaluar la efectividad de una dieta libre de gluten en un sujeto que padece celiaquía; o para
-evaluar la adherencia a una dieta libre de gluten por parte de un sujeto que padece celiaquía sometido a una dieta libre de gluten.
26. Uso de un kit según la reivindicación 25, en el que dicho kit es un kit adecuado para un inmunoensayo tipo ELISA, o un kit adecuado para un inmunoensayo por cromatografía de flujo lateral basado.
27. Uso de un kit según la reivindicación 26, en el que dicho kit comprende una tira inmunocromatográfica según cualquiera de las reivindticaciones 13 a 23.
28. Uso de un kit según la reivindicación 26, en el que dicho kit comprende un biosensor para la detección de anticuerpos anti-betalactoglobulina.
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