Un procedimiento de determinación rápida del grupo sanguíneo ABO/Rh/MN y un kit de prueba del mismo.

Un kit para llevar a cabo un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano,

consistiendo el kit en una tira de prueba, una solución de aclarado y un medio de recogida de sangre, en el que latira de prueba consiste en una almohadilla de aclarado, una almohadilla de carga, una almohadilla deamortiguación, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva resistente al agua y una lámina de poliéstercomo soporte, y en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación yla almohadilla de absorción que forman la tira de prueba están fabricadas de un material de fibra de vidriopolimérico poroso que tiene un tamaño de poro apropiado para que al menos un glóbulo rojo pase a través de él,en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación, la almohadilla deabsorción y la cinta adhesiva resistente al agua están unidas secuencialmente al soporte, el borde de laalmohadilla de carga se superpone sobre el borde de la almohadilla de aclarado, el borde de la almohadilla deamortiguación se superpone en el borde de la almohadilla de carga, el borde de la almohadilla de absorción sesuperpone en el borde de la almohadilla de amortiguación, y la cinta adhesiva resistente al agua se aplica sobrelos bordes superpuestos de la almohadilla de aclarado y la almohadilla de carga, para prevenir que la solución deaclarado se salga de la almohadilla de carga,

comprendiendo el procedimiento las etapas de gotear una muestra de sangre sobre la almohadilla de carga de latira de prueba precubierta por inmovilización con anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, gotear unasolución de aclarado sobre un extremo de la tira de prueba para llevar los glóbulos rojos no aglutinados junto conla solución de aclarado lejos del sitio de carga, mientras que deja los glóbulos rojos aglutinados con el anticuerporestante en el sitio de carga; a continuación determinar el grupo sanguíneo de la muestra de acuerdo con lapresencia de glóbulos rojos aglutinados en el sitio de carga como sitio de reacción.

Un procedimiento de determinación rápida del grupo sanguíneo ABO/Rh/MN y un kit de prueba del mismo

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano y un kit del mismo como se define en las reivindicaciones.

Antecedentes de la invención La determinación del grupo sanguíneo es una técnica convencional para agrupar los glóbulos rojos humanos de acuerdo con el sistema ABO con cuatro grupos diferentes de A, B, AB y O, de acuerdo con el sistema Rh y el sistema de grupo sanguíneo MN respectivamente. Un procedimiento general para identificar el grupo sanguíneo es mezclar los glóbulos rojos que se van a detectar con un reactivo que contiene un anticuerpo del grupo sanguíneo, y, después de la reacción de lo anterior, determinar el grupo sanguíneo de los glóbulos rojos detectados observando la aparición de aglutinación de glóbulos rojos. Dicho procedimiento comprende en primer lugar aislar los glóbulos rojos del suero de un paciente, a continuación mezclar una cantidad apropiada de los glóbulos rojos con las respectivas soluciones de prueba introducidas en un tubo de ensayo o portaobjetos (que contiene suero anti-A, anti-B, anti-D, anti-M o anti-N, respectivamente) , y opcionalmente añadir otros reactivos que promueven la reacción inmunitaria e incubar la reacción, a continuación centrifugar y agitar la mezcla de reacción seguido de observar la aparición de aglutinación de glóbulos rojos.

Para una muestra, si se produce la aglutinación en presencia de un reactivo anti-A, aunque no se produzca aglutinación en presencia de un reactivo anti-B, entonces se identifica la muestra de sangre como un grupo sanguíneo de A. Si se produce la aglutinación de glóbulos rojos en presencia de un reactivo anti-B, aunque no se produzca aglutinación en presencia de un reactivo anti-A, entonces se identifica la muestra como un grupo sanguíneo de B. Si se produce la aglutinación de glóbulos rojos tanto en presencia de un reactivo anti-A como en presencia de un reactivo anti-B, entonces se identifica la muestra como un grupo sanguíneo de AB. Si no se produce ninguna reacción de aglutinación en presencia de un reactivo anti-A ni en presencia de un reactivo anti-B, entonces se identifica la muestra como un grupo sanguíneo de O. Si se produce la aglutinación en presencia de un reactivo anti-D, entonces la muestra es del grupo sanguíneo Rh-positivo, de lo contrario es del grupo sanguíneo Rh-negativo. Para el sistema de grupo sanguíneo MN, se puede designar que una muestra es del grupo sanguíneo M, N o MN de acuerdo con la aparición de aglutinación de glóbulos rojos.

Las tecnologías actuales usadas para determinar el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano se pueden clasificar en dos tipos. El primer tipo se basa en la detección del antígeno del grupo sanguíneo asociado con la membrana celular, e incluye un ensayo de aglutinación en solución salina, ensayo de neutralización, ensayo de absorción, ensayo de disociación y reacción de aglutinación mezclado de glóbulos rojos. El segundo tipo se basa en la detección directa del antígeno del grupo sanguíneo libre, e incluye reacción de coagulación y radioinmunoensayo.

Actualmente en el ensayo de aglutinación en solución salina de glóbulos rojos usado comúnmente, se determina la sangre de prueba con su grupo sanguíneo por aglutinación de glóbulos rojos inducida por la unión del anticuerpo IgM

o IgG conocido al antígeno del grupo sanguíneo sobre la superficie de glóbulos rojos recién extraídos. Este procedimiento se usa ampliamente en la determinación del grupo sanguíneo (blood typing, en inglés) para la transfusión de sangre clínica. Sin embargo, este procedimiento necesita los reactivos correspondientes, que se deben preservar a baja temperatura, y además, su resultado es difícil de confirmar.

Otros procedimientos para determinar el grupo sanguíneo tienen varias deficiencias. Por ejemplo, el ensayo de neutralización se lleva a cabo en un periodo de tiempo largo y tiene una mala sensibilidad. La prueba de disociación y la reacción de aglutinación mezclada requieren un funcionamiento altamente cualificado con una optimización complicada en cada en cada serie y tiene una mala sensibilidad. La reacción de coaglutinación comprende sensibilizar la proteína A de Staphylococcus aureus (SPA) por el anticuerpo IgG, a continuación observar la aglutinación de Staphylococcus aureus para determinar el grupo sanguíneo de la muestra sometida a prueba, aunque este procedimiento requiere un almacenamiento complicado de los reactivos. El radioinmunoensayo y ELISA son altamente sensibles, aunque tienen un tiempo de ejecución largo, y por tanto no son adecuados para una única muestra o para una detección in situ.

Judith Parke y Deborah Lynne Morris (documento GB2250342A, 1992) divulgan un procedimiento y dispositivo para la determinación de los grupos sanguíneos humanos basado en la aglutinación de glóbulos rojos. Se usa PE hidrófilo en el dispositivo como material para la aplicación de la muestra de sangre. Además, se dispusieron múltiples zonas de aplicación a lo largo de la tira de prueba.

D.E. NeValainen et al (documento EP022397S, 1987) divulgan procedimientos y dispositivos para determinar las clasificaciones de grupos sanguíneos a partir de muestras de sangre o suero. Se usa un sustrato sólido poroso que tiene un tamaño de poro promedio de 0, 025 a 7 μm en dispositivos como el de carga de sangre.

Peter Schwind y Klemens Loster (documento US2007/0248983A1, 2007) divulgan un dispositivo y procedimiento para identificar simultáneamente antígenos de grupos sanguíneos. El dispositivo tiene una zona de aplicación y una región de zona indicadora en dos localizaciones separadas. Se usa un material orgánico poroso tal como nitrocelulosa, polietileno o nailon como material para la aplicación de sangre.

En resumen, los procedimientos usados comúnmente para la determinación del grupo sanguíneo clínico tienen varios problemas tales como un tiempo de funcionamiento largo, trabajo laborioso, un resultado subjetivo con una gran variación y contaminación potencial. Por lo tanto, es necesario realizar una mejora sustancial de los procedimientos convencionales para la determinación del grupo sanguíneo.

Sumario de la invención Un objetivo de la presente invención es proporcionar un kit para llevar a cabo un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/ MN humano, consistiendo el kit en una tira de prueba, una solución de aclarado y un medio de recogida de sangre, en el que la tira de prueba consiste en una almohadilla de aclarado, una almohadilla de carga, una almohadilla de amortiguación, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva resistente al agua y una lámina de poliéster como soporte, y en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación y la almohadilla de absorción que forman la tira de prueba están fabricadas de un material de fibra de vidrio polimérico poroso que tiene un tamaño de poro apropiado para que al menos un glóbulo rojo pase a través de él,

en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación, la almohadilla de absorción y la cinta adhesiva resistente al agua están unidas secuencialmente al soporte, el borde de la almohadilla de carga se superpone sobre el borde de la almohadilla de aclarado, el borde de la almohadilla de amortiguación se superpone en el borde de la almohadilla de carga, el borde de la almohadilla de absorción se superpone en el borde de la almohadilla de amortiguación, y la cinta adhesiva resistente al agua se aplica sobre los bordes superpuestos de la almohadilla de aclarado y la almohadilla de carga, para prevenir que la solución de aclarado se salga de la almohadilla de carga,

comprendiendo el procedimiento las etapas de gotear una muestra de sangre sobre la almohadilla de carga de la tira de prueba precubierta por inmovilización con anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, gotear una solución de aclarado sobre un extremo de la tira de prueba para llevar los glóbulos rojos no aglutinados junto con la solución de aclarado lejos del sitio de carga, mientras que deja los glóbulos rojos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga; a continuación determinar el grupo sanguíneo de la muestra de acuerdo con la presencia de glóbulos rojos aglutinados en el sitio de carga como sitio de reacción.

Otro objetivo de la invención es proporcionar un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano usando el kit de la invención, comprendiendo las etapas de gotear una muestra de sangre... [Seguir leyendo]

1. Un kit para llevar a cabo un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano,

consistiendo el kit en una tira de prueba, una solución de aclarado y un medio de recogida de sangre, en el que la

tira de prueba consiste en una almohadilla de aclarado, una almohadilla de carga, una almohadilla de amortiguación, una almohadilla de absorción, una cinta adhesiva resistente al agua y una lámina de poliéster como soporte, y en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación y la almohadilla de absorción que forman la tira de prueba están fabricadas de un material de fibra de vidrio polimérico poroso que tiene un tamaño de poro apropiado para que al menos un glóbulo rojo pase a través de él,

en el que la almohadilla de aclarado, la almohadilla de carga, la almohadilla de amortiguación, la almohadilla de absorción y la cinta adhesiva resistente al agua están unidas secuencialmente al soporte, el borde de la almohadilla de carga se superpone sobre el borde de la almohadilla de aclarado, el borde de la almohadilla de amortiguación se superpone en el borde de la almohadilla de carga, el borde de la almohadilla de absorción se superpone en el borde de la almohadilla de amortiguación, y la cinta adhesiva resistente al agua se aplica sobre

los bordes superpuestos de la almohadilla de aclarado y la almohadilla de carga, para prevenir que la solución de aclarado se salga de la almohadilla de carga,

comprendiendo el procedimiento las etapas de gotear una muestra de sangre sobre la almohadilla de carga de la tira de prueba precubierta por inmovilización con anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, gotear una solución de aclarado sobre un extremo de la tira de prueba para llevar los glóbulos rojos no aglutinados junto con

la solución de aclarado lejos del sitio de carga, mientras que deja los glóbulos rojos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga; a continuación determinar el grupo sanguíneo de la muestra de acuerdo con la presencia de glóbulos rojos aglutinados en el sitio de carga como sitio de reacción.

2. El kit de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la tira de prueba está configurada para permitir que una muestra de sangre se gotee sobre la almohadilla de carga fijada con un anticuerpo del grupo sanguíneo, y una

solución de aclarado isotónica se gotee sobre la almohadilla de aclarado, a continuación la presencia de glóbulos rojos aglutinados en la almohadilla de carga se observa para determinar el grupo sanguíneo de la muestra de sangre.

3. Un procedimiento para detectar rápidamente el grupo sanguíneo ABO/Rh/MN humano usando el kit de la reivindicación 1, comprendiendo las etapas de gotear una muestra de sangre sobre la almohadilla de carga de la

tira de prueba precubierta por inmovilización con anticuerpo anti-A o anti-B o anti-D o anti-M o anti-N, gotear una solución de aclarado sobre un extremo de la tira de prueba para llevar los glóbulos rojos no aglutinados junto con la solución de aclarado lejos del sitio de carga, mientras que deja los glóbulos rojos aglutinados con el anticuerpo restante en el sitio de carga; a continuación determinar el grupo sanguíneo de la muestra de acuerdo con la presencia de glóbulos rojos aglutinados en el sitio de carga como sitio de reacción.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la muestra de sangre está seleccionada del grupo que consiste en glóbulos rojos, sangre completa, glóbulos rojos diluidos con solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato isotónica y sangre completa diluida con solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato isotónica.

5. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la muestra de sangre está seleccionada del grupo

que consiste en una muestra de sangre que está parcialmente hemolizada y una muestra de sangre que es rica en lípidos.

6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el anticuerpo está fijado sobre la tira de prueba por adsorción física o reticulación química.

7. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la presencia de la aglutinación en el sitio de carga

como sitio de reacción se puede determinar visualmente o usando un dispositivo que recoge señal óptica o señal eléctrica.