Detección de Trichomonas y Candida.

Un procedimiento para distinguir en una muestra infección con Trichomonas de infección con Candida,

quecomprende la detección de N-acetil-b-D-hexosaminidasa y la determinación de pH en la muestra.

Detección de Trichomonas y Candida

Campo técnico

La invención se refiere a un procedimiento para distinguir en una muestra una infección con Trichomonas de infección con Candida, que comprende la detección de N-acetil-β-D-hexosaminidasa y la determinación de pH en la muestra.

Técnica anterior

Se sabe que tres Trichomonas son parásitos humanos: T. vaginalis, encontrada en vagina, uretra y próstata y que causan vaginitis de Trichomonas; T. hominis, encontrada en el tracto intestinal y que causan trichomonisis intestinal, y T. tenax, encontrada en la cavidad oral, odontoincrustantes y madrigueras de sapo, y que causan trichomoniasis oral.

Frecuentemente se usan los procedimientos siguientes para la detección de Trichomonas: Procedimiento de Caída en Pendiente, en el que se observa la motilidad de los Trichosomas, aunque los resultados varían con la temperatura; Procedimiento de Tinción con Frote, en el que muestras tratadas y no tratadas se someten a frote, se tiñen y observan al microscopio, pudiendo tener influencia sobre la observación las partículas con tamaños comparables a las de los Trichosomas y el intervalo del campo visual; el Procedimiento de Cultivo, en el que los Trichosomas de la muestra se multiplican selectivamente, se frotan y tiñen, que es intensivo en tiempo; el Procedimiento Inmunológico, usando anticuerpos específicos para detectar antígenos de Trichonomas tal como el ensayo fluorescente de anticuerpos, ELISA, aglutinación de látex, si bien hasta el momento no se comercializa kit alguno inmunológico de alta calidad para la detección clínica de Trichosomas.

La mayor parte de Candida encontrada en el cuerpo humano, como puede ser en la cavidad oral y el tracto urogenital, son patógenos oportunistas. Se sabe que más del 85% de los patógenos Candida oportunistas son C. albicans y C. tropicalis, que pueden causar enfermedades en el tracto urogenital en seres humanos.

Para la detección de Candida se usan frecuentemente los procedimientos siguientes: Microscopía Directa con Frote, en el que, para mujeres, se extrae de la vagina una muestra de frotis, secreción vaginal o película blanca lechosa de la pared vaginal, mientras que, para hombres, se recogen escamas de las lesines de piel del pene del glande, sulcus coronario o prepucio. Se frotan las muestras y se detectan por microscopía en cuanto a esporas ovoides o micelio. Este procedimiento se basa mucho en la experiencia. Los resultados varían dentre diferentes campos visuales y pueden interferir partículas, especialmente gotas de aceite de parafina añadido para lubricación de las muestras; el Procedimiento de Cultivo Fúngico, un procedimiento intensivo en tiempo en el que se usa un medio particular tal como agar Sabourad (tal como de Oxoid Ltd., Basingstoke, RU) para multiplicar selectivamente Candida en la muestra; Procedimiento de Aglutinación de Látex, en el que se hacen reaccionar anticuerpos policlonales con maná de Candida, aunque no se ha encontrado un producto de alta calidad para uso clínico.

Las enfermedades causadas por Trichomonas y Candida son difíciles de distinguir en términos de síntomas. Puesto que los agentes terapéuticos para las mismas son también diferentes, se necesita un medio diagnóstico que sea simple, rápido y eficaz.

El documento CN 101320040 A describe un kit que usa diferentes reactivos para detectar Trichomonas y Candida y propugna el uso de N-acetil-β-D-aminohexósido como agente detector para Candida, y un sustrato de proteasa específico para Trichomonas como agente detector para Trichonomas.

El documento EP 153618 A2 divulga un medio de cultivo para la identificación específica y/o diferenciación de Candida albicans y levadura de Candida tropicalis.

Sanon y otros (2005) Biomedicine & Pharmacotherapy 59, 245-248 investigan algunas características bioquímica<s de N-acetil-β-D-hexosaminidasa purificada de Trichomonas vaginalis, incluidas especifidad del sustrato y actividad de inhibidores.

Sumario de la invención La presente invención se define en las reivindicaciones.

Un aspecto de la divulgación se refiere a un kit, especialmente:

1.1 Un kit que comprende N-acetil-aminohehoxosido como agente detector de Trichomonas.

1.2 El kit de acuerdo con 1.1 que además comprende un indicador de pH.

1.3 El kit deacuerdo con 1, 2, en el que elN-acetil-β-D-aminohexósido es además opcionalmente un agente detector

de Candida. 2

1.4 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, en el que el mencionado N-acetil-β-D-aminohexósido es N-acetil-β-D-glucosaminidina o N-acetil-β-D-aminogalactósido.

1.5 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, en el que el mencionado N-acetil-β-D-aminohexósido presenta un cromógeno, siendo el cromógeno preferiblemente bromoindolilo, p-nitrofenilo, 4-metilumbeliferona o un grupo naftol.

1.6 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, que además comprende como mínimo un agente seleccionado entre el grupo constituido por el agente detector neuraminidasa, el agente detector prolidasa, el agente peroxidasa detector de peróxido de hidrógeno, y el agente esterasa detector de leucocitos.

1, 7 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, que además comprende una mapa de colores estándar tal como un mapa de colores estandar de NAG y/o un mapa de colores estándar de pH.

1.8 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, en el que se inmoviliza sobre un vehículo de fase sólida como mínimo un agente seleccionado entre N-acetil-β-D-aminohexósido, agente detector de neuraminidasa, agente detector de prolidasa, agente detector de peroxidasa y agente detector de esterasa de leucocitos, y un indicador de pH, seleccionándose preferiblemente el vehículo de fase sólida entre plásticos y papel de absorción de capacidad tal como la del papel de trapos, papel de pulpa de madera, papel de bagazo y filtro de vidrio de fibras.

1.9 El kit de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, que es un panel de detección combinado que comprende un medio de base del panel y un medio de cierre dispuesto en el medio de base del panel.

1.10 El kit de acuerdo con 1.9, en el que el mencionado medio de cierre es una copa de cierre combada sobre el lado de la ranura de la zona de reacción en el medio de base del panel.

1.11 El kit de acuerdo con 1.9, en el que el mencionado medio de cierre es una tira de cierre unida al lado de la ranura de la zona de reacción en el mencionado medio de base del panel.

Otro aspecto de la divulgación se refiere a su uso, especialmente:

2.1 Uso de N-acetil-β-D-aminohexósido para la detección de Trichomonas.

2.2 Uso de N-acetil-β-D-aminohexósido en combinación con un indicador de pH para la determinación de la presencia de Trichomonas o Candida.

2.3 Uso de N-acetil-β-D-aminohexósido para la preparación de un kit para detectar Trichomonas.

2.4 Uso de N-acetil-β-D-aminohexósido en combinación con un indicador de pH para la preparación de un kit que se usa para la determinación de la presencia de Trichomonas o Candida.

2.5 El uso de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, en el que el mencionado N-acetil-β-D-aminohexósido es N-acetil-β-D-aminoglucósido o N-acetil-β-D-aminogalactósido.

2.6 El uso de acuerdo con cualquier rasgo precedente, en el que el mencionado N-acetil-β-D-aminohexósido presenta un cromógeno que preferiblemente es un grupo bromoindolilo, p-nitrofenilo, 4-metilumbeliferona o naftol.

2.7 El uso de acuerdo con cualquier rasgo precedente, en el que el mencionado N-acetil-β-D-aminohexósido se inmoviliza sobre un vehículo de fase sólida, seleccionándose el vehículo en fase sólida preferiblemente entre plásticos y papel de absorción de capacidad tal como la del papel de trapos, papel de pulpa de madera, papel de bagazo y filtro de vidrio de fibras.

Otro aspecto de la divulgación se refiere a un procedimiento de detección, especialmente:

3.1 Un procedimiento para la detección de la presencia de Trichomonas en una muestra, que comprende poner en contacto N-acetil-β-D-aminohexósido con la muestra.

3.2 Un procedimiento para la detección de la presencia de Trichomonas en una muestra, que comprende poner en contacto N-acetil-β-D-aminohexósido con la muestra y poner en contacto un indicador del pH con la muestra.

3.3 El procedimiento de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes, en el que la mencionada muestra es una muestra de vagina, uretra, próstata o cavidad oral.

3.4 El procedimiento de acuerdo con cualesquier rasgos precedentes,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para distinguir en una muestra infección con Trichomonas de infección con Candida, que comprende la detección de N-acetil-β-D-hexosaminidasa y la determinación de pH en la muestra.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la mencionada muestra se determina que está infectada con Trichomonas si (i) es positiva a N-acetil-β-D-hexosaminidasa y (ii) su pH es de no menos de 4, 8.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la mencionada muestra se determina que está infectada con Candida si (i) es positiva a N-acetil-β-D-hexosaminidasa y (ii) su pH es de no más de 4, 6.