Composiciones farmacéuticas y cosméticas que contienen PLGF-1.

Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para preparar un medicamento promotor deangiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con eltejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo,

seleccionadas entre:

- esclerodermia, o

- envejecimiento cutáneo prematuro debido a la exposición a agentes atmosféricos agresivos o a irradiaciónsolar prolongada, o

- pérdida patológica del cabello debido a alopecia, trastornos hormonales, quimioterapia, radioterapia o a laadministración de medicamentos.

Composiciones farmacéuticas y cosméticas que contienen PLGF-1

Ámbito de la presente invención La presente invención se refiere a la preparación de composiciones terapéuticas y cosméticas capaces de aumentar la angiogénesis del tejido conjuntivo cutáneo, subcutáneo y de los órganos internos, que contienen el factor de crecimiento placentario (PLGF) . Por lo tanto estas composiciones son adecuadas para el tratamiento de estados patológicos o naturales que se benefician de la formación o regeneración de nuevos vasos en el sistema cutáneo, como por ejemplo esclerodermia en sus diversas manifestaciones, envejecimiento de la piel o pérdida de cabello.

Estado técnico El factor de crecimiento placentario (PLGF) es una glicoproteína homodimérica que regula la angiogénesis. La secuencia polinucleótida completa que codifica la proteína PLGF fue descrita por Maglione y Persico en la patente EP-B-0 550 519 (WO-A-92/06194) . Por empalmes alternativos de PGLF ARN se generan tres formas homólogas, en concreto PLGF-1, PLGF-2 y PLGF-3, las cuales poseen secuencias polipeptídicas diferentes y están descritas en la literatura.

En el estado técnico se describen, o meramente se suponen, aplicaciones terapéuticas del PLGF-1. La patente EPB-0550519 se indica el empleo hipotético de PLGF en el tratamiento de estados inflamatorios genéricos, heridas, quemaduras, úlceras y periodos postoperatorios. La solicitud de patente internacional WO-A-01/56593 describe el empleo sistémico parenteral de los factores VEGF y PLGF en el tratamiento y prevención de la isquemia cerebral, 25 miocárdica y periférica. El artículo científico publicado en “Il Farmaco”, vol. 55, (2000) , páginas 165-167 (Maglione y otros) describe también la eficacia del PLGF-1 para evitar la isquemia miocárdica y reducir la gravedad del infarto. Por último Faille y otros, en el “Journal Invest. Dermatol.”, 115 (3) , Sep. 2000, páginas 388-395, comunican que en los queratocitos implicados en los procesos de reparación del tejido lesionado se induce la producción de PLGF. Ziche y otros, “PLGF-1 is Chemotectic Mitogenic and Angiogenic” [el PLGF-1 es un factor quimiotáctico mitogénico y angiogénico], Laborator y Investigation, USA and Canadian Academy of Pathology. vol. 76, nº. 4, abril 1997 (199704) , páginas 517-531, revelan un implante corneal de una solución que contiene pequeñas cantidades de PLGF-1 purificado, producido como proteína recombinante en células huésped eucariotas y que por tanto está glicosilado. Este documento no describe el empleo de PLGF-1 para tratar enfermedades de los tejidos conjuntivos cutáneos o subcutáneos, la esclerodermia o el envejecimiento de la piel. Sin embargo la información del estado técnico previo no permite concluir que el PLGF-1 sea efectivo en la prevención o en el tratamiento curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con el tejido conjuntivo cutáneo, subcutáneo y de los órganos internos. En particular las informaciones del estado técnico previo no permiten concluir que la administración de PLGF exógeno pueda influenciar in vivo la vascularización cutánea con respecto a estados patológicos y a situaciones naturales. Un efecto promotor de angiogénesis y en particular de vascularización cutánea a consecuencia de la administración de PLGF exógeno obtenido según la presente invención es especialmente ventajoso para el tratamiento de estados patológicos o fisiológicos susceptibles de mejora mediante un aporte de sangre más efectivo.

Resumen de la presente invención 45 La presente invención se basa en el hallazgo inesperado de que un incremento de los niveles de PLGF-1 en los tejidos que forman el cutis y sobre todo en el tejido conjuntivo va acompañado por un aumento de la vascularización cutánea. Asimismo se ha observado que dicho incremento de los niveles tisulares de PLGF-1 se puede conseguir ventajosamente mediante la administración de PLGF exógeno, empleando las composiciones parenterales o tópicas conforme a la presente invención. La estimulación de la angiogénesis resultó ser útil en el tratamiento de patologías típicas del tejido conjuntivo cutáneo, subcutáneo y de los órganos internos, de la esclerodermia en sus diferentes manifestaciones locales, de la esclerodermia sistémica progresiva y de la esclerosis sistémica, en la reparación de lesiones localizadas y úlceras, en el tratamiento de la calvicie natural o patológica, o en situaciones meramente fisiológicas tales como el envejecimiento de la piel, sobre todo debido a la exposición al sol o a agentes atmosféricos agresivos.

El objeto de la presente solicitud es el empleo de PLGF, en particular del tipo 1 de PLGF (PLGF-1) , para preparar composiciones terapéuticas o cosméticas promotoras de angiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas naturales relacionadas con el tejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo y seleccionadas entre la esclerodermia, en particular esclerodermia localizada, sistémica progresiva, la esclerosis sistémica, el envejecimiento patológico de la piel por exposición a agentes atmosféricos/ambientales o a la radiación solar, y la calvicie de origen patológico.

Otro aspecto de la presente invención es el uso de PLGF-1 en el tratamiento cosmético preventivo y curativo de la pérdida del cabello y del envejecimiento de la piel.

Otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica que contiene el factor de crecimiento placentario tipo 1 (PLGF-1) como principio activo y un excipiente farmacéuticamente aceptable, destinada a la promoción de la angiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con el tejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo, seleccionadas entre:

- esclerodermia o

-envejecimiento prematuro de la piel por exposición a agentes atmosféricos agresivos o a la radiación solar prolongada.

Otro aspecto de la presente invención es una composición cosmética de uso tópico que contiene PLGF-1 como principio activo y un excipiente cosméticamente aceptable, la cual se caracteriza porque al menos el 98, 5% del PLGF-1 está en forma dímera y multímera activa, como mínimo el 70% en forma dímera y no más del 1, 5% en forma monomérica, y porque se encuentra en forma de loción, emulsión W/O, emulsión O/W, suspensión, suspensión liposómica, gel, crema, pasta, ungüento.

Descripción detallada de la presente invención El incremento de los niveles de PLGF-1 en los tejidos que forman la piel, y en particular en los queratinocitos, va acompañado por un aumento local de la vascularización. Este aumento de los niveles de PLGF-1 en los tejidos se puede alcanzar por administración sistémica o local de PLGF-1 exógeno.

Ensayos La acción angiogénica del PLGF-1 se determinó por métodos conocidos efectuados in vivo o in vitro, tales como el ensayo de vascularización de córnea de conejo o el ensayo de vascularización de la membrana corioalantoidea de pollo. De acuerdo con la presente invención la vascularización cutánea se examinó mediante análisis morfométrico computarizado de muestras de piel, tal como describen Streit y otros (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, Dec. 21st, 96 (26) , 14888-14893) . Cortes de piel aislados de animales de laboratorio, tratados o no tratados según la presente invención, se prepararon con tinción inmunohistoquímica, empleando anticuerpos monoclonales anti-CD31 del animal utilizado. Los cortes así tratados se analizaron por microscopía electrónica y el análisis morfométrico de los tejidos se realizó mediante el programa IP-LAB (Scanalytics Inc.) . Se determinó el número de vasos por mm2, sus tamaños promedio y el área respectiva ocupada por ellos, tal como describen Streit y otros.

En los animales tratados la administración local de PLGF-1 exógeno produjo un incremento significativo de los parámetros vasculares, tal como ilustran los ejemplos.

Un segundo método empleado para estimar la actividad angiogénica de la composición según la presente invención es la capilaroscopia y capilarometría microscópica in vivo. Esta conocida tecnología consiste en la observación microscópica directa del cutis, preferiblemente tratado con sustancias intensificadoras transparentes tales como vaselina o aceites vegetales. La zona preferida de análisis es la lámina ungular del dedo de la mano. El análisis de los datos obtenidos por capilaroscopia y capilarometría se puede realizar adecuadamente empleando sistemas de registro fotográfico y sistemas de reprocesamiento de datos por ordenador. Los parámetros tenidos en cuenta son la morfología vascular, la morfología del tejido perivascular y el... [Seguir leyendo]

1. Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para preparar un medicamento promotor de angiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con el

5tejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo, seleccionadas entre: esclerodermia, o envejecimiento cutáneo prematuro debido a la exposición a agentes atmosféricos agresivos o a irradiación solar prolongada, o pérdida patológica del cabello debido a alopecia, trastornos hormonales, quimioterapia, radioterapia o a la administración de medicamentos.

2. Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) según la reivindicación 1, en que la enfermedad es esclerodermia localizada o esclerodermia sistémica progresiva.

3. Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) conforme a la reivindicación 2, en que la esclerodermia localizada es cutánea y la esclerodermia sistémica progresiva es miocárdica.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en que el medicamento se halla en una forma adecuada para producir un efecto local o sistémico.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en que el medicamento se halla en una forma adecuada para la administración endovenosa, intramuscular, intraarticular, subcutánea, tópica o por implante subcutáneo o ionoforesis.

6. Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) como promotor de la angiogénesis cutánea o subcutánea en la prevención y el tratamiento cosmético del envejecimiento natural de la piel.

7. Uso del factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) como promotor de la angiogénesis perifolicular en la prevención y el tratamiento cosmético de la pérdida natural del cabello.

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 6 o 7, en que el PLGF-1 está formulado en una composición cosmética para administración tópica.

9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en que la cantidad de PLGF-1 apropiada para administrar 35 está comprendida entre 1 y 500 µg por kg corporal por día, preferiblemente entre 10 µg/kg/día y 200 µg/kg/día.

10. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear como promotor de angiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con el tejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo, seleccionadas entre:

esclerodermia, o envejecimiento cutáneo prematuro debido a la exposición a agentes atmosféricos agresivos o a irradiación solar prolongada, o pérdida patológica del cabello debido a alopecia, trastornos hormonales, quimioterapia, radioterapia o a la administración de medicamentos. 45

11. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según la reivindicación 10, en que la enfermedad es esclerodermia localizada o esclerodermia sistémica progresiva.

12. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según la reivindicación 10, en que la esclerodermia localizada es cutánea y la esclerodermia sistémica progresiva es miocárdica.

13. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en forma adecuada para producir un efecto local o sistémico.

14. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en forma adecuada para administración endovenosa, intramuscular, intraarticular, subcutánea, tópica o por implante subcutáneo o ionoforesis.

15. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, caracterizado porque el PLGF-1 es un producto de expresión procedente de células huésped modificadas genéticamente.

16. Factor de crecimiento placentario de tipo 1 (PLGF-1) para emplear según cualquiera de las reivindicaciones

a 15, en que al menos el 98, 5% del PLGF-1 está en forma dímera y multímera activa, al menos el 70% en forma 65 dímera y no más del 1, 5% en forma monomérica.

17. Composición farmacéutica que contiene el factor de crecimiento placentario tipo 1 (PLGF-1) como principio activo y un excipiente farmacéuticamente aceptable, destinada a la promoción de la angiogénesis en el tratamiento preventivo o curativo de enfermedades o alteraciones patológicas relacionadas con el tejido conjuntivo cutáneo o subcutáneo, seleccionadas entre:

- esclerodermia o -envejecimiento prematuro de la piel por exposición a agentes atmosféricos agresivos o a la radiación solar prolongada.

18. Composición para emplear según la reivindicación 17, en que al menos el 98, 5% del PLGF-1 está en forma 10 dímera y multímera activa, al menos el 70% en forma dímera y no más del 1, 5% en forma monomérica.

19. Composición para usar según la reivindicación 18, en que el PLGF-1 es un producto de expresión procedente de células huésped modificadas genéticamente.

20. Composición para emplear según la reivindicación 17, que por dosis unitaria de uso parenteral contiene 50 µg hasta 30 mg de PLGF-1 y para uso tópico 0, 1 mg hasta 10 mg de PLGF-1 por gramo de composición.

21. Composición para emplear según la reivindicación 17, en forma de solución, loción, emulsión W/O, emulsión O/W, suspensión, suspensión liposómica, gel, crema, pasta, ungüento o implante subcutáneo. 20

22. Composición cosmética de uso tópico que contiene PLGF-1 como principio activo y un excipiente aceptable cosméticamente, caracterizada porque al menos el 98, 5% del PLGF-1 está en forma dímera y multímera activa, al menos el 70% en forma dímera y no más del 1, 5% en forma monomérica, y porque se encuentra en forma de loción, emulsión W/O, emulsión O/W, suspensión, suspensión liposómica, gel, crema, pasta, ungüento.

23. Composición de uso tópico según la reivindicación 22, caracterizada porque el PLGF-1 es un producto de expresión procedente de células huésped modificadas genéticamente.

24. Composición de uso tópico según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 23, que comprende una o más

sustancias elegidas entre cisteína, cisteamina o glutatión en forma reducida, capaces de estabilizar el PLGF-1 en sus formas dímera-multímera activas.