Una composici6n farmaceutica que comprende un virosoma, un liposoma y at menos una molecula antigenica,

en la quo la composiciOn farmaceutica se mantiene a pH fisiológico,

en la quo el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV),

en la que al menos una molecula antigenica esta atrapada en o unida a dicho liposoma, y

en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

Un sistema adyuvante que comprende virosomas y liposomas

Campo de la invención

La invención se refiere a los campos de la inmunología y la vacunología. Específicamente, la invención se refiere a sistemas adyuvantes novedosos que generan respuestas inmunitarias eficaces contra antígenos de diversos orígenes.

Antecedentes de la invención

La última década ha visto grandes progresos en enfoques terapéuticos y profilácticos basados en la vacunación contra antígenos presentes en células tumorales y patógenos infecciosos. A pesar de los avances realizados en la identificación de nuevos antígenos y el esclarecimiento de los mecanismos que permiten las respuestas inmunitarias contra estos antígenos, siguen sin resolverse una serie de desafíos. Un obstáculo, en particular, es la generación de respuestas inmunitarias suficientemente potentes incluso después de la identificación de nuevos antígenos, ya que muchas dianas antigénicas prometedoras han demostrado ser sólo débilmente inmunógenas.

Para provocar una respuesta inmunitaria, los antígenos se han de incorporar y procesar por un tipo especial de célula, las denominadas células presentadoras de antígenos (CPA) . Los tres tipos de células que pueden presentar antígenos son las células dendríticas, los macrófagos y los linfocitos B. La incorporación se facilita por fago o endocitosis y el procesado se realiza en vesículas o en el citoso!. Las protagonistas clave en la presentación del antígeno sobre la superficie celular son una clase de proteínas denominadas proteínas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) . Estas moléculas se codifican por la familia de los genes más polimorfos en el genoma humano situados en el cromosoma 6 y se puede subdividir en clase I y 11. La topología de ambas clases de moléculas es tal que se pueden unir y presentar como un espectro de péptidos de 8 a 16 aminoácidos en longitud lo más amplio posible. Por tanto, se garantiza una inmunovigilancia muy eficaz. El número de copias de una molécula antigénica definida sobre la superficie de una célula presentadora de antígeno es bastante bajo (aproximadamente cien) , dado el número total de aproximadamente diez mil receptores, pero esta característica representa una mezcla muy heterogénea de péptidos antigénicos sobre la superficie de cada CPA.

Las moléculas de MHC de clase I se unen y presentan muestras de péptidos, incluyendo antígenos endógenos, así como víricos o tumorales traducidos y procesados y activan la respuesta inmunitaria citotóxica celular por medio de linfocitos T CD8+ (citotóxicos) . La autoinmunidad contra moléculas endógenas normalmente se evita por el proceso de selección negativa de las células inmunitarias en el timo, la médula ósea y el sistema linfático. Las moléculas de MHC de clase 11 se unen y presentan péptidos, que se ingieren desde el entorno celular inmediato y se procesan por una variedad de enzimas en las vesículas, generadas por la fusión de lisosomas y fagosomas. Los péptidos unidos a moléculas de clase 11 activan los linfocitos T CD4+ (auxiliares) , que a su vez activan los linfocitos B, induciendo así la respuesta inmunitaria humoral, y/o los linfocitos T CD8+, induciendo así una respuesta inmunitaria celular.

Un péptido tiene la capacidad de provocar una respuesta inmunitaria celular específica, si se puede unir a moléculas de MHC y tiene la capacidad de ser reconocido por linfocitos T CD8+ o CD4+ o tiene la capacidad de inducir una respuesta humoral si se reconoce por un linfocito B por medio de una inmunoglobulina unida a membrana. La inmunogenicidad de un antígeno se define por muchas variables incluyendo el tamaño, la estructura, la estabilidad, la diferencia de moléculas endógenas/presencia adyuvante y el estado inmunitario del organismo así como otros factores genéticos. Cuando el antígeno no es una proteína o péptido exógeno, normalmente no es reconocido por los linfocitos T, ya que estas células no están presentes o se seleccionan para no reaccionar con proteínas endógenas, y su presentación en el complejo de MHC sobre la superficie de una célula presentadora de antígeno no es suficiente para provocar una respuesta inmunitaria.

El uso de proteínas o glucoproteínas en el desarrollo de vacunas nuevas y eficaces es polémico ya que, en varios casos, ha demostrado ser ineficaz o bien perjudicial para el organismo inoculado. Esta propiedad se debe a una falta de inmunogenicidad basada en un tamaño, estructura, estabilidad u homología no favorable para las proteínas endógenas, o a la inclusión de epítopos no protectores. Además, los péptidos nativos tienen una estabilidad sistémica baja y se degradan rápidamente por proteasas. Otra desventaja es que no se garantiza que el péptido se pueda unir a proteínas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I o 11, lo que es absolutamente necesario para la provocación de una respuesta inmunitaria.

Debido a que estas respuestas inmunitarias débiles ofrecen poco beneficio clínico, el desarrollo de compuestos que potencien la respuesta inmunitaria eficaz para mejorar la inmunogenicidad de antígenos diana se ha convertido en un objetivo de importancia terapéutica y profiláctica creciente.

Los compuestos que potencian la respuesta inmunitaria se clasifican como adyuvantes o bien citocinas. Los adyuvantes pueden mejorar la respuesta inmunológica proporCionando un depósito de antígeno (extracelularmente o dentro de macrófagos, activando macrófagos y estimulando conjuntos específicos de linfocitos. Los adyuvantes de muchos tipos son bien conocidos en la técnica; ejemplos específicos incluyen el de Freund (completo e incompleto) , componentes de las paredes celulares de micobacterias (Bacillus calmette-guerin, Mycobacterium vaccae, cor y nebacterium parvum) , lipopolisacáridos tales como lípido A, monofosforillípido A, LPS o derivados de LPS o MF59 (Chiron) , y diversas emulsiones de aceite en agua (por ejemplo, IDEC-AF) . Otros adyuvantes usados actualmente incluyen: sales minerales o geles minerales, tales como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio y fosfato de calcio, sustancias tensioactivas tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, hemocianinas de lapa californiana y dinitrofenol, moléculas inmunoestimuladoras, tales como saponinas (ISCOM OS-21 (SmithKline Beecham) ) , dipéptidos de muramilo y derivados tripeptídicos, dinucleótidos CpG, oligonucleótidos CpG, lipopéptidos/lipoproteínas, toxina del cólera y polifosfacenos, adyuvantes particulados y microparticulados, tales como emulsiones, cocleatos o adyuvantes mucosos de complejos inmunoestimuladores.

Las citocinas también son útiles en protocolos de vacunación como resultado de propiedades estimuladoras de linfocitos. Las numerosas citocinas útiles para tales fines serán conocidas para un experto en la técnica, incluyendo interleucina-2 (IL-2) , IL-12, GM-CSF y muchas otras.

Las estrategias de inmunización para preparar eficazmente respuestas de linfocitos T CD8+ respuestas de linfocitos T han ocupado el centro de atención de la actividad de investigación en la vacunología actual. Los recientes avances en el desarrollo de adyuvantes potentes dieron como resultado dos principales enfoques alternativos, es decir, una formulación de vacuna basada en péptidos y en ADN. Sin embargo, a pesar de ser prometedores como adyuvantes fuertes, la administración de ambos puede ejercer efectos tóxicos sobre el huésped, lo que limita su utilidad en el contexto clínico. Por tanto, sería deseable desarrollar sistemas adyuvantes que proporcionen una estimulación inmunitaria potente mientras que reducen o eliminan el riesgo de efectos secundarios tóxicos.

El documento WO 98/50071 da a conocer propiedades adyuvantes de partículas similares a virus (VLP) , que mejoran la respuesta inmunitaria mediada por células y/o humoral en vertebrados si se administra con un antígeno seleccionado. Las VLP son cápsulas víricas vacías no replicativas compuestas de una o más proteínas de cápside, revestimiento, cubierta, superficie y/o envoltura. De acuerdo con la divulgación, se encontró que el antígeno seleccionado no tiene que estar atrapado en la VLP para que la VLP ejerza su efecto adyuvante o coadyuvante.

La patente europea N.o 1550458 describe un procedimiento para mejorar la respuesta inmunitaria específica contra un antígeno, que se administra en un liposoma junto con un primer adyuvante convencional, también comprendido en el primer liposoma o bien en un segundo liposoma, por la coadministración... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende un virosoma, un liposoma y al menos una molécula antigénica, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico, en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) , en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma, y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

2. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicha al menos una molécula antigénica se une a la superficie del liposoma por medio de una molécula de anclaje lipófila.

3. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la al menos una molécula antigénica se selecciona de péptidos, proteínas, lípidos, mono-, oligo-y polisacáridos, glucopéptidos, carbohidratos, lipopéptidos, patógenos bacterianos o víricos y toxinas y ADN o ARN que codifican para tales moléculas.

4. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además excipientes farmacéuticamente aceptables, sustancias auxiliares, aditivos, conservantes, agentes tamponadores

o disolventes.

5. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un agente potenciador inmunitario adicional, seleccionado del grupo de adyuvantes y citocinas convencionales, en la que los adyuvantes convencionales se eligen de la lista que consiste en: Adyuvante de Freund, lípido A. monofosforil lípido A, LPS o derivados de LPS o MF59 (Chiron) , IDEC-AF, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, fosfato de calcio, lecitina, polioles plurónicos, polianiones, hemocianinas de lapa californiana, dinitrofenol, saponinas, dipéptidos de muramilo y derivados tripeptfdicas, dinucleótidos CpG, oligonucleótidos CpG, lipopéptidos/lipoprotefnas, toxina del cólera y polifosfacenos, cocleatos y adyuvantes mucosos de complejos inmunoestimuladores.

6. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que ellRIV es un IRIV quimérico (CIRIV) .

7. La composición farmacéutica de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 6, en la que el virosoma contiene además Ifpidos catiónicos.

8. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicho lípido catiónico es un derivado de colesterol catiónico.

9. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el derivado de colesterol catiónico es OC-Colo TC-Col.

10. La composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha composición se liofiliza.

11. Uso de un virosoma, un liposoma, y al menos una molécula antigénica para la fabricación de una composición farmacéutica para la vacunación o la inmunización de un sujeto, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico, en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) ,

en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma, y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

12. Uso de un virosoma, un liposoma, yal menos una molécula antigénica para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno en un sujeto que lo necesita, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico, en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) ,

en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma, y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 11 ó 12, en el que el sujeto es un mamífero.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que dicho mamífero es un ser humano.

15. Uso de un virosoma, un liposoma, y al menos una molécula antigénica para preparar una composición farmacéutica para potenciar la inmunogenicidad de una molécula antigénica, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico,

en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) , en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma,

y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

16. Un kit de partes que comprende un virosoma, un liposoma, y al menos una molécula antigénica, en el que el kit comprende adicionalmente medios para mantener el virosoma, el liposoma y/o la al menos una molécula antigénica a pH fisiológico al que dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas, en el que el virosoma es un virosoma de influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) y en el que la al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma.

17. El kit de partes de acuerdo con la reivindicación 16, en el que

• al menos uno del virosoma, elliposoma, la al menos una molécula antigénica y los medios para mantener el pH fisiológico están cada uno contenidos en recipientes separados; o

• el virosoma, el liposoma, la al menos una molécula antigénica y los medios para mantener el pH fisiológico están contenidos en el mismo recipiente.

18. El kit de partes de acuerdo con la reivindicación 16 ó 17, en el que al menos uno del virosoma, elliposoma y la al menos una molécula antigénica se liofiliza.

19. El kit de partes de acuerdo con la reivindicación 18, en el que dicho kit comprende además un disolvente de reconstitución para los compuestos liofilizados.

20. Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que comprende las etapas de

a) proporcionar un virosoma y una molécula antigénica atrapada en o unida a un liposoma en el que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (lRIV) ; y

b) formar una mezcla de dichos componentes en un excipiente o disolvente farmacéuticamente aceptable mantenido a pH fisiológico.

21. Una composición farmacéutica que comprende un virosoma, un liposoma, yal menos una molécula antigénica, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico, para su uso en la vacunación o inmunización de un sujeto,

en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) , en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma, y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.

22. Una composición farmacéutica que comprende un virosoma, un liposoma, y al menos una molécula antigénica, en la que la composición farmacéutica se mantiene a pH fisiológico, para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno en un sujeto que lo necesita,

en la que el virosoma es un virosoma de la influenza reconstituido inmunopotenciador (IRIV) , en la que al menos una molécula antigénica está atrapada en o unida a dicho liposoma, y en la que a dicho pH, dicho virosoma y dicho liposoma siguen siendo entidades separadas.