Un procedimiento para preparar una composición para su uso en la supresión de la enfermedad de injerto contra huésped en un individuo que recibe una preparación de trasplante,

que comprende las etapas de:

(a) tratar una cantidad de sangre extracorpórea del receptor candidato del trasplante haciendo que la sangre fluya a través de un aparato que tiene canales de plástico para inducir que los monocitos contenidos en la sangre se diferencien en células dendríticas;

(b) tratar las células dendríticas para truncar la maduración de las células dendríticas en una fase en la que una parte sustancial de las células dendríticas carece de moléculas coestimuladoras y puede inactivar linfocitos T que, de otra manera, atacarían al tejido sano del receptor o al tejido o a las células trasplantados;

(c) combinar las células dendríticas con una preparación de trasplante derivada del donante candidado del trasplante;

(d) incubar conjuntamente las células dendríticas del receptor candidato con la preparación de trasplante del donante del trasplante; y

(e) preparar un medicamento para administrar, al receptor candidato del trasplante, las células dendríticas y la preparación de trasplante incubadas conjuntamente.

Procedimiento de supresión de la respuesta del sistema inmunitario a tejido o a células trasplantados

Campo de la invención

La presente solicitud desvela procedimientos para reducir los efectos de la enfermedad de injerto contra huésped (EICH) en individuos que reciben trasplantes de células madre o de médula ósea, el presente documento también desvela procedimientos para suprimir la respuesta inmunitaria en individuos que reciben órganos o tejido trasplantados para reducir la probabilidad de rechazo de los órganos o tejido trasplantados por el receptor del trasplante.

Antecedentes de la invención

El trasplante de órganos, tejidos o células de una persona genéticamente distinta (donante) a otra (receptor) está obstaculizado por el rechazo inmunológico del receptor de los órganos o células donados. Se entiende que este fenómeno de rechazo implica mecanismos tanto celulares como humorales, mediados respectivamente por linfocitos T y anticuerpos. El sistema inmunitario del receptor dirige la diferenciación de los antígenos de histocompatibilidad sobre las células trasplantadas. Salvo en casos poco frecuentes, los antígenos de histocompatibilidad del donante no coincidirán exactamente con los antígenos de histocompatibilidad del receptor, y el sistema inmunitario del receptor ataca los órganos o células incompatibles del donante.

Con respecto al rechazo mediado inmunológicamente, los antígenos de histocompatibilidad más potentes son los complejos de histocompatibilidad (MHC) conocidos como antígenos leucocitarios humanos, HLA-A, HLA-B y HLA-C. Aunque originalmente se definieron por su presencia sobre las membranas celulares de los leucocitos humanos, durante mucho tiempo se ha reconocido que están presentes prácticamente en todas las células con núcleo del cuerpo humano. Dado que cada persona recibe de cada padre genes que codifican un conjunto de estos antígenos, las células humanas expresan típicamente seis antígenos HLA principales. Además de los antígenos de histocompatibilidad principales existen varios antígenos de histocompatibilidad secundarios.

Cuando se trasplantan tejido o células, es deseable que coincidan, hasta el máximo grado posible, los antígenos de histocompatibilidad del donante y del receptor. La mejor coincidencia inmunológica entre el donante y el receptor es entre gemelos idénticos, puesto que comparten los mismos seis antígenos HLA principales. Además, los gemelos idénticos también comparten los mismos antígenos de histocompatibilidad secundarios y por lo tanto los órganos o las células trasplantados de un gemelo idéntico al otro son tolerados inmunológicamente. En la situación más lejana común, en la que el donante y el receptor no son genéticamente idénticos, se produce regularmente cierto nivel de rechazo inmunológico de tejido trasplantado. Para minimizar este rechazo y permitir la supervivencia del tejido injertado, se hacen esfuerzos de manera rutinaria para encontrar la mejor coincidencia entre donante y receptor. Si no se dispone de un gemelo idéntico, la siguiente mejor elección es típicamente un hermano no idéntico del receptor que comparta los mismos seis antígenos HLA principales, una situación que se produce sobre el promedio de uno a cuatro hermanos. Tal coincidencia de seis HLA entre hermanos es preferible a una coincidencia seis de seis entre individuos no relacionados, debido a que los hermanos coincidentes también compartirán más probablemente al menos algunos antígenos de histocompatibilidad secundarios heredados de sus padres comunes. Incluso, dado que no son hermanos idénticos, existe una alta probabilidad de diferencia en los antígenos de histocompatibilidad secundarios, y el donante y receptor serán casi seguramente lo suficientemente distintos en términos de antígenos celulares de manera que después del trasplante de tejido de un hermano a otro se producirá algún nivel de rechazo.

Las reacciones adversas después del trasplante de un órgano o tejido de un individuo genéticamente distinto a otro pueden ser profundamente peligrosas. La reacción adversa principal es el rechazo inmunológico del órgano o tejido trasplantado. Si el órgano es elemental para la vida, tal como un corazón, hígado o pulmón, la destrucción de ese órgano puede conducir directamente a la muerte del paciente. En otras circunstancias, tales como el rechazo de células de los islotes pancreáticos, que producen insulina, o de riñones, la calidad de vida del receptor puede destruirse por el rechazo de tejido. Para impedir o limitar el rechazo, típicamente los pacientes reciben una combinación de fármacos inmunosupresores que introducen sus propios efectos secundarios principales. Habitualmente estos fármacos son inmunosupresores de manera global, incrementando así en gran medida la susceptibilidad del receptor frente a graves infecciones, a menudo ocasionadas por organismos contra los que un sistema inmunitario no comprometido se defendería fácilmente. Cada uno de los fármacos inmunosupresores individuales tiene su propio conjunto distinto de efectos adversos, especialmente cuando se usan en las dosis necesarias para inhibir el rechazo de órganos trasplantados. Por ejemplo, altas dosis de prednisona provocan diabetes mellitus e hipertensión, ocasionando al mismo tiempo la desmineralización de los huesos soporte. Otro fármaco inmunosupresor comúnmente usado, la ciclosporina A, tiene efectos tóxicos importantes sobre el riñón. Ge manera global, los tratamientos con inmunosupresores también aumentan la susceptibilidad de los receptores de trasplante frente a infecciones oportunistas contra las que los individuos normales tienen fuertes defensas.

Estos efectos adversos han estimulado investigaciones para las terapias que puedan suprimir más selectivamente el rechazo del tejido trasplantado, dejando el resto del sistema inmunitario intacto y no dañando otros órganos importantes. Una estrategia especialmente prometedora, para administrar la inmunoterapia, ha sido el uso de un dispositivo de Fotoféresis convencional, en general denominada en el presente documento “Transinmunización” para evitar o invertir el rechazo de órganos trasplantados. Dependiendo de las circunstancias, el impacto terapéutico de la Transinmunización puede potenciarse mediante la etapa de Fotoféresis convencional con una fase de incubación durante una noche, antes de devolver al paciente las células tratadas. La Transinmunización puede conseguirse usando un aparato de Fotoféresis, si bien la Transinmunización también puede conseguirse usando otra metodología, sin el uso de un aparato de Fotoféresis.

Barr y col., Photopheresis for the prevention of rejection in cardiac transplantation, New England Journal of Medicine, Vol. 339, No. 4, 1744-51, del 10 de diciembre de 1998, publicaron un ensayo controlado que compara la Fotoféresis convencional más inmunosupresión convencional con inmunosupresión convencional sola en la prevención de rechazo de corazones trasplantados. Este estudio reveló que la adición de la Fotoféresis al régimen inmunosupresor convencional redujo de manera completamente significativa y segura el número de episodios de rechazo, disminuyendo así notablemente la necesidad de reforzar peligrosamente los niveles de fármacos inmunosupresores convencionales tóxicos. De manera similar, en Greinix y col., Successful use of extracorporeal photochemotherapy in the treatment of severe acute and cronic graft-versus-host disease, Blood, Vol. 92, No 9, 3098-3104, 1998, y en Greinix y col., Extracorporeal photochemotherapy in the treatment of severe steroid-refractor y acute graft-versus-host disease: un estudio piloto, Blood, Vol. 96, No. 7, 2426-31, 2000, los autores describen el ensayo que reveló que la Fotoféresis era particularmente eficaz en la inversión de los efectos adversos (conocidos como enfermedad de injerto contra huésped o EICH) después de trasplante de médula ósea o células madre.

Recientemente se ha descifrado un mecanismo que está implicado en la eficacia de la Fotoféresis. El sistema de exposición ultravioleta de plástico plano, un componente del aparato de Fotoféresis, puede provocar la transformación de monocitos en sangre a células dendríticas presentadoras de antígeno (células dendríticas) como resultado de las fuerzas impuestas sobre los monocitos, a medida que fluyen a lo largo de la superficie de plástico en un aparato de Fotoféresis convencional. Dado que los beneficios terapéuticos resultantes del uso de estas células dendríticas están provocados por la transferencia de antígenos tisulares a células dendríticas capaces de inmunización... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para preparar una composición para su uso en la supresión de la enfermedad de injerto contra huésped en un individuo que recibe una preparación de trasplante, que comprende las etapas de:

(a) tratar una cantidad de sangre extracorpórea del receptor candidato del trasplante haciendo que la sangre fluya a través de un aparato que tiene canales de plástico para inducir que los monocitos contenidos en la sangre se diferencien en células dendríticas;

(b) tratar las células dendríticas para truncar la maduración de las células dendríticas en una fase en la que una parte sustancial de las células dendríticas carece de moléculas coestimuladoras y puede inactivar linfocitos T que, de otra manera, atacarían al tejido sano del receptor o al tejido o a las células trasplantados;

(c) combinar las células dendríticas con una preparación de trasplante derivada del donante candidado del trasplante;

(d) incubar conjuntamente las células dendríticas del receptor candidato con la preparación de trasplante del donante del trasplante; y

(e) preparar un medicamento para administrar, al receptor candidato del trasplante, las células dendríticas y la preparación de trasplante incubadas conjuntamente.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa de tratamiento de una cantidad de sangre extracorpórea del receptor candidato del trasplante comprende hacer que la sangre fluya a través de un aparato que tiene canales de plástico que presentan un diámetro de entre aproximadamente 0, 5 mm y aproximadamente 5, 0 mm.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa de tratamiento de una cantidad de sangre extracorpórea del receptor candidato del trasplante se realiza en un aparato de Fotoféresis.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa de tratamiento de las células dendríticas para truncar la maduración de las células dendríticas comprende una de las siguientes:

(a) radiar las células dendríticas con una radiación gamma,

(b) exponer las células dendríticas a un fármaco citostático.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que el fármaco citostático se selecciona entre mitomicina C y ciclofosfamida.

6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa de tratamiento de las células dendríticas para truncar la maduración de las células dendríticas comprende exponer las células dendríticas a una citocina.

7. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la citocina es la citocina IL-10.

8. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que las células dendríticas y la preparación de trasplante se incuban conjuntamente durante un periodo de tiempo comprendido entre 12 horas y 24 horas aproximadamente.

9. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que las células dendríticas y la preparación de trasplante o las células dendríticas y los leucocitos sanguíneos inactivados se incuban conjuntamente a una temperatura de aproximadamente 37 grados centígrados en una atmósfera gaseosa que comprende aproximadamente 5% de dióxido de carbono y aproximadamente 95% de oxígeno.