PROMOTORES DE ARROZ.

1. Una construcción genética que comprende:

i) un promotor aislado capaz de dirigir y/o de regular la expresión en tejido verde de una planta,

que comprende:

a. un ácido nucleico aislado como el presentado en la SEQ ID NO. 14 o el complemento de la SEQ ID NO. 14; o

b. un ácido nucleico aislado que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

c. un ácido nucleico aislado que hibrida específicamente bajo condiciones rigurosas con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

d. un ácido nucleico aislado como el definido en cualquiera de los ítems (a) hasta (c), que está interrumpido por una secuencia interviniente; o

e. un fragmento de al menos 250 pb de cualquiera de los ácido nucleicos como los definidos en (a) hasta (d), cuyo fragmento es capaz de dirigir y/o de regular la expresión y

ii) una secuencia de ácido nucleico heterólogo operativamente enlazada a un promotor aislado de (i), y opcionalmente

iii) un terminador 3' de la transcripción.

Promotores de arroz

La presente invención se relaciona con el campo de biología molecular de las plantas, más particularmente con secuencias de ácido nucleico útiles para dirigir y/o regular la expresión de un ácido nucleico operativamente enlazado en plantas. Se divulga el aislamiento de estas secuencias de ácido nucleico del arroz, así como su uso para dirigir y/o regular la expresión de un ácido nucleico operativamente enlazado. La presente invención se relaciona por lo tanto con promotores, promotores híbridos, construcciones genéticas, casetes de expresión, vectores de transformación, vectores de expresión, células huésped y plantas transgénicas que contienen a los ácidos nucleicos aislados de acuerdo con la presente invención. La presente invención también se relaciona con métodos para dirigir y/o regular la expresión de un ácido nucleico y con métodos para la producción de plantas transgénicas.

La expresión génica depende de la iniciación de la transcripción, que es mediada a través del complejo de iniciación de la transcripción. La expresión génica también depende de la regulación de la transcripción, la cual determina que tan fuerte, cuándo o donde se expresa un gen. Dicha regulación de la expresión génica puede ser mediada a través de elementos de control transcripcional, que están generalmente embebidos en la secuencia de ácido nucleico que flanquea a 5' o secuencia arriba del gen expresado. Esta región secuencia arriba del ácido nucleico es a menudo denominada como “promotora” ya que promueve el enlazamiento, la formación y/o la activación del complejo de iniciación de la transcripción y por lo tanto es capaz de dirigir y/o de regular la expresión de la secuencia de ácido nucleico secuencia abajo 3'.

La modificación por medio de ingeniería genética de plantas con el ánimo de obtener un fenotipo de planta útil, a menudo involucra expresión génica heteróloga, que es generalmente mediada por un promotor capaz de dirigir y/o de regular la expresión de un ácido nucleico heterólogo operativamente enlazado. El fenotipo de la planta huésped no depende únicamente de la contribución del ácido nucleico heterólogo, sino también de la contribución del patrón específico de expresión del promotor escogido que determina cómo, donde y cuando se expresa ese ácido nucleico heterólogo. Por lo tanto, la escogencia del promotor con un patrón de expresión adecuado es de importancia crucial para obtener el fenotipo adecuado. Una persona capacitada en el arte deberá tener diferentes promotores disponibles, para determinar al promotor óptimo para un ácido nucleico particular. Para muchas plantas huésped diferentes, esta disponibilidad está bastante limitada y por lo tanto existe la necesidad permanente de proveer nuevos promotores con diferentes perfiles de expresión. El ácido nucleico como el presentado en la SEQ ID NO. 14 fue aislado de Or y za sativa y se ha encontrado que es capaz de dirigir y regular la expresión en tejido verde de una planta de un ácido nucleico operativamente enlazado. Por lo tanto la presente invención ofrece un ácido nucleico aislado desconocido hasta ahora, el cual es útil como promotor.

Por lo tanto, la presente invención provee i) un promotor aislado capaz de dirigir y/o de regular la expresión en tejido verde de una planta, que comprende:

(a) un ácido nucleico aislado como el presentado en la SEQ ID NO. 14 o el complemento de la SEQ ID NO. 1; o

(b) un ácido nucleico aislado que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

(c) un ácido nucleico aislado que hibrida específicamente bajo condiciones rigurosas con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

(d) un ácido nucleico aislado como el definido en cualquiera de los ítems (a) hasta (c) , que está interrumpido por una secuencia interviniente; o

(e) un fragmento de al menos 250 pb de cualquiera de los ácido nucleicos como los definidos en (a) hasta (d) , cuyo fragmento es capaz de dirigir y/o de regular la expresión y

ii) una secuencia de ácido nucleico heterólogo operativamente enlazada a un promotor aislado de (a) , y opcionalmente

iii) un terminador 3' de la transcripción.

El término “aislado” como se utiliza aquí significa que ha sido removido de su fuente original. Preferiblemente, el promotor “aislado” está libre de secuencias (tal como secuencias que codifican proteína u otras secuencias en el extremo 3') que naturalmente flanquean al promotor en el ADN genómico del organismo del cual se deriva el promotor. Preferiblemente además, el promotor “aislado” está libre también de secuencias que naturalmente lo flanquean en el extremo 5'. Preferiblemente además, el promotor “aislado” puede incluir aproximadamente menos de 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1.5 kb, 1.2 kb, 1 kb, 0.8 kb, 0.5 kb ó 0.1 kb de secuencias de ácido nucleico que naturalmente se presentan con el promotor en el ADN genómico del organismo del cual se deriva el promotor.

La presente solicitud no está limitada a ácidos nucleicos como los presentados por la SEQ ID NO. 14. Una persona capacitada en el arte se dará cuenta que pueden presentarse variantes o fragmentos de un ácido nucleico, mientras se mantenga la misma funcionalidad. Estas variantes o fragmentos pueden ser hechos por el hombre (por ejemplo por medio de ingeniería genética) o incluso pueden presentarse en la naturaleza. Por lo tanto la presente solicitud se extiende a diferentes ácidos nucleicos y fragmentos de la SEQ ID NO. 14, en donde las variantes o fragmentos son útiles en los métodos de la presente invención. Tales variantes y fragmentos incluyen:

(a) un ácido nucleico aislado como el presentado en la SEQ ID NO. 14 o el complemento de la SEQ ID NO. 14; o

(b) un ácido nucleico aislado que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

(c) un ácido nucleico aislado que hibrida específicamente bajo condiciones rigurosas con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

(d) un ácido nucleico aislado como el definido en cualquiera de los ítems (a) hasta (c) , que está interrumpido por una secuencia interviniente; o

(e) un fragmento de al menos 250 pb de cualquiera de los ácido nucleicos como los definidos en (a) hasta (d) , cuyo fragmento es capaz de dirigir y/o de regular la expresión.

Las variantes adecuadas de la SEQ ID NO. 14 abarcan homólogos que tienen en orden creciente de preferencia al menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad de secuencia con ácidos nucleicos como los representados en la SEQ ID NO. 14.

El porcentaje de identidad puede ser calculado utilizando un programa de alineación. Preferiblemente se puede utilizar un programa de alineación global por parejas, que implementa el algoritmo de Needleman-Wunsch (J. Mol. Biol. 48: 443 - 453, 1970) . Este algoritmo maximiza el número de coincidencia y minimiza el número de brechas. Tales programas son por ejemplo GAP, Needle (paquete EMBOSS) , ensanchador (paquete EMBOSS) o Align X (Vector NTI suite 5.5) y pueden utilizar los parámetros estándar (por ejemplo penalización por abertura de brecha de 6, 66) . Alternativamente, se puede utilizar un programa de alineación local que implementa el algoritmo de Smith-Waterman (Advances in Applied Mathematics 2, 482 - 489 (1981) ) . Tales programas son por ejemplo Water (paquete EMBOSS) o emparejador (paquete EMBOSS) . "Identidad de secuencia" como se utiliza aquí se calcula preferiblemente sobre la longitud completa de promotores como los representados por la SEQ ID NO. 14. La longitud de este promotor está presentada en la Tabla 2.

La búsqueda e identificación de ácidos nucleicos homólogos, estaría dentro del campo de conocimientos de una persona capacitada en el arte. Tales métodos, involucran la escogencia en bases de datos de secuencias con las secuencias suministradas por la presente invención, por ejemplo la SEQ ID NO. 14, preferiblemente en una forma que puede ser leída por un ordenador. Las bases de datos de secuencias útiles, incluyen pero no se limitan al Genbank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/web/Genbank) , la European Molecular Biology Laborator y Nucleic acid Database (EMBL) (http:/w.ebi.ac.uk/ebi-docs/embl-db.html) o versiones de la misma, o la base de datos MIPS (http://mips.gsf.de/) . Se conocen bien en el arte diferentes algoritmos y programas de búsqueda para la alineación y comparación de secuencias. Tales programas incluyen, por ejemplo GAP, BESTFIT,... [Seguir leyendo]

1. Una construcción genética que comprende:

i) un promotor aislado capaz de dirigir y/o de regular la expresión en tejido verde de una planta, que comprende:

a. un ácido nucleico aislado como el presentado en la SEQ ID NO. 14 o el complemento de la SEQ ID NO. 14; o

b. un ácido nucleico aislado que tiene al menos 90% de identidad de secuencia con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

c. un ácido nucleico aislado que hibrida específicamente bajo condiciones rigurosas con secuencias de ADN como las presentadas en la SEQ ID NO. 14; o

d. un ácido nucleico aislado como el definido en cualquiera de los ítems (a) hasta (c) , que está interrumpido por una secuencia interviniente; o

e. un fragmento de al menos 250 pb de cualquiera de los ácido nucleicos como los definidos en (a) hasta (d) , cuyo fragmento es capaz de dirigir y/o de regular la expresión y

ii) una secuencia de ácido nucleico heterólogo operativamente enlazada a un promotor aislado de (i) , y opcionalmente

iii) un terminador 3' de la transcripción.

2. Una construcción genética de acuerdo con la reivindicación 1 que comprende un promotor, que es un promotor híbrido que contiene al menos una parte de un promotor como se define en la reivindicación 1 i) y que contiene además otra parte de un promotor.

3. Un casete de expresión que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2.

4. Un vector de transformación que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2.

5. Un vector de expresión que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2.

6. Una célula huésped que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2, o un casete de expresión como se define en la reivindicación 3, o un vector de transformación como se define en la reivindicación 4, o un vector de expresión como se define en la reivindicación 5.

7. Una célula huésped de acuerdo con la reivindicación 6, seleccionada de entre bacterias, algas, hongos, levadura y una célula vegetal.

8. Una célula de una planta transgénica que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2, o un casete de expresión como se define en la reivindicación 3 o un vector de transformación como se define en la reivindicación 4 o un vector de expresión como se define en la reivindicación 5.

9. Una célula de una planta transgénica de acuerdo con la reivindicación 8, que es una célula de una planta monocotiledónea.

10. Una célula de una planta transgénica de acuerdo con la reivindicación 8, que es una célula de una planta dicotiledónea.

11. Una planta transgénica que comprende una célula de una planta transgénica como se define en la reivindicación 9 ó 10.

12. Una célula de una planta transgénica de acuerdo con la reivindicación 11, en donde dicha planta se selecciona de entre arroz, maíz, trigo, cebada, mijo, avena, centeno, sorgo, soja, girasol, canola, caña de azúcar, alfalfa, frijol, alubias, lino, lupino, colza, tabaco, tomate, patata, calabaza, papaya, álamo y algodón.

13. Parte de una planta, preferiblemente una parte cosechable, un propágulo o progenie de una planta como se define en la reivindicación 11 ó 12 que comprende una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó

2, o un casete de expresión como se define en la reivindicación 3, o un vector de transformación como se define en la reivindicación 4, o un vector de expresión como se define en la reivindicación 5.

14. Método para la producción de una planta transgénica, que comprende:

(a) La introducción en una célula vegetal de una construcción genética como se define en la reivindicación 1 ó 2, o un casete de expresión como se define en la reivindicación 3, o un vector de transformación como se define en la reivindicación 4 o un vector de expresión como se define en la reivindicación 5, y

(b) El cultivo de dicha célula vegetal bajo condiciones que promuevan el crecimiento de la planta.