Un dispositivo de tira reactiva seca para la determinación de un analito en una muestra,

comprendiendo dicho dispositivo:

(i) Opcionalmente, un soporte sólido,

(ii) Al menos, un tampón almohadilla de reactivo que comprende un reactivo o una combinación de reactivos apta para reaccionar con el analito, un derivado de dicho analito o un compuesto indicador para que dicho analito proporcione una señal detectable cuando esté en un estado humedecido, proporcionando el, al menos, un tampón reactivo, un primer entorno para dicho (s) reactivo (s), permitiendo dicho primer entorno una estabilidad de almacenado mejorada de lo (s) reactivo (s) y del dispositivo de tira reactiva cuando esté en un estado humedecido

(iii) Estando un tampón regulador en contacto con el, al menos, un tampón reactivo, creando el tampón reactivo un segundo entorno para dicho (s) reactivo (s) estando en un estado humedecido, permitiendo dicho segundo entorno un índice incrementado de reacción entre el analito y el/los reactivo (s), y

En el que la muestra se aplica a una superficie del dispositivo de tira reactiva seca y la señal detectable es detectada sobre la misma y en el que la determinación del analito se basa en una determinación con base en enzimas y en el que las condiciones, en el primer entorno, se consiguen por el ajuste del valor de pH a una valor que se desvía del valor de pH óptimo de la (s) enzima (s) y en el que las condiciones del segundo entorno se consiguen por la regulación del valor de pH hasta alcanzar un valor que se acerca al valor óptimo de pH de la (s) enzima (s) y en el que los diferentes entornos tienen diferentes valores de pH.

Nueva configuracion de un dispositivo de tira reactiva seca y procedimiento para determinar un analito en una muestra utilizando dicho dispositivo de tira reactiva seca.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se relaciona con el campo de dispositivos de tira reactiva seca y su uso para analizar un analito en una muestra. En concreto, la presente invención se relaciona con una configuración de un dispositivo de tira reactiva seca para la determinación de un analito en una muestra, en donde se han tenido en cuenta, en especial, la estabilidad del almacenado y la actividad del dispositivo de tira reactiva seca.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La demanda de pruebas de diagnóstico rápidas y de fiar en el análisis clínico está creciendo. Hoy, partes significativas de las pruebas utilizadas en la analítica clínica en papeles para pruebas impregnados de diversos componentes, creando así un papel reactivo no diferenciado. Al usar dichos papeles para pruebas, el papel reactivo es, simplemente, puesto en contacto con el material que se analiza (por ejemplo, un fluido corporal) creando así un cambio en el color o un cambio en la intensidad del color que se usa para verificar si un efecto en concreto se consigue o no o para determinar cuantitativamente la cantidad de un analito presente en la muestra.

Actualmente, los procedimientos clínicos de laboratorio usados para el diagnóstico de las condiciones fisiológicas y nutricionales, tales como los diagnósticos de mastitis en un animal, se basan fundamentalmente en el recuento de células somáticas (RCS) de, por ejemplo, la leche y la diferenciación de patógenos bacterianos en muestras de leche.

Así, pruebas usadas de forma convencional para la detección de la inflamación provocada por mastitis en una animal han consistido, hasta ahora, en sistemas líquidos bastante complejos donde los tubos de ensayo, dispositivos de medición, luz ultravioleta, normalización de instrumentos, factores de corrección dependientes de la temperatura aumentan la incidencia de lecturas falsas.

La mastitis afecta la integridad de la estructura glandular mamaria y, al mismo tiempo, daña el epitelio secretor y las barreras sangre/leche. En consecuencia, muchos componentes de la leche están influenciados por la mastitis. Los componentes principales, tales como la grasa, la proteína y la lactosa son reducidos y un alto número de enzimas se ven alteradas.

Diferentes factores, distintos a la determinación de RCS, que pueden ser usados como indicadores adecuados para la inflamación provocada por la mastitis en un animal, pueden ser el lactato deshidrogenasa (LDH) y/o N-acetil glucosaminidasa, N-acetil-º-D-glucosaminidasa, también llamada N-acetil glucosaminidasa (NAGasa) , que ha sido considerada como uno de los mejores marcadores de la inflamación mamaria. Además, se ha mostrado que otras enzimas de la leche, como el LDH, puede ser de similar valor, en cuanto tanto esta enzima como la NAGasa pueden ser usadas como un indicador adecuado de la mastitis.

En el estado de la técnica, se han desarrollado un gran número de procedimientos para el análisis de analitos en muestras de líquido. Estos procedimientos puede ser clasificados, en sentido amplio, en dos clases de sistema, en concreto un sistema de reacción en el que la reacción se lleva a cabo en una solución (llamado también química húmeda) y un sistema de reacción en el que la reacción se lleva a cabo en un portador de fase sólida (también llamado química seca) .

La reacción analítica basa en química húmeda incluye un gran número de procedimientos, que varían ampliamente desde un procedimiento analítico del así llamado procedimiento manual en el que no se usa ninguna máquina en absoluto para utilizar un instrumento analítico automático.

Sin embargo, tal química húmeda se lleva a cabo, fundamentalmente, en la forma de una solución acuosa, y exige algunas fases de tratamiento que implican diversos problemas. Un problema que puede darse hace referencia a la cantidad incrementada de agua presente, debido a lo cual puede provocarse un consumo incrementado de energía. Además, pueden necesitarse grandes habilidades para las operaciones necesarias para llevar a cabo el ensayo, necesitándose así enormes cantidades de tiempo y trabajo, y los licores de desecho producidos pueden causar un polución medioambiental y, en consecuencia, exigir un tratamiento ulterior.

Por otro lado, los procedimientos analíticos que utilizan química seca para las reacciones analíticas han sido también ampliamente utilizados, y son, generalmente, practicados en forma de papel de filtro no diferenciado u otros materiales porosos impregnados con uno o más reactivos aptos para generar una señal detectable.

La patente US 3.867.259 (de Forgione) divulga un dispositivo de análisis diagnóstico (una tira reactiva seca) para determina la concentración de LDH en sueros. El dispositivo de análisis comprende un material absorbente con (i) una sal de tetrazolio (ii) un preventor de efectos cromatográficos (iii) un antioxidante, (iv) diaforasa y (v) un dinucleótido de nicotinamida y adenina.

Lippenheide et al. (1995) describen la medición de LDH en leche usando tanto química húmeda como seca. Lippenheide et al. concluyen con que la alta precisión, exactitud y facilidad de tratamiento se consiguen por el uso de un análisis de química seca en relación con análisis de química húmeda, sin embargo Lippenheide et al. no describen una configuración específica del dispositivo de tira reactiva seca. A pesar de las recomendaciones de Lippenheide et al., es un hecho que los dispositivos de tira reactiva seca disponibles hoy en día en el mercado y los dispositivos de tira seca reactiva descritos en el estado de la técnica (patente US 3.867.259, según se mencionó supra) consiste en un material no diferenciado impregnado con uno o más reactivo (s) . Los dispositivos de tira seca reactiva que comprenden entornos no diferenciados comprometen tanto la estabilidad de almacenado y la puesta en práctica del/ de los reactivo (s) impregnado (s) como estabilidad óptima de almacenado son difícilmente conseguidos en las mismas condiciones de entorno (por ejemplo, pH y/o contenido de sal) como una realización óptima de la tira seca reactiva.

Así, por el uso de dispositivos de tira seca reactiva no diferenciada, el entorno del material, (esto es, tampón[es]) ha sido creado de tal forma que el dispositivo de tira seca reactiva muestra una estabilidad de almacenado aceptable (pero no óptima) y una puesta en práctica aceptable (pero no óptima) .

La patente US 3.901.657 divulga un dispositivo multicapa apto para la determinación colorimétrica de la presencia de un compuesto concreto en una solución de análisis. El dispositivo multicapa comprende al menos una capa más externa, opcionalmente una capa de barrera y una capa interna adyacente o bien a la capa de barrera o a la capa más externa. El dispositivo multicapa es un ensayo químico - usado para la determinación de morfina.

La patente US 4.732.736 divulga un elemento analítico multicapa para detectar peróxido de hidrógeno. El elemento analítico multicapa comprende un material funcional de peroxidasa, un donante de hidrógeno y un acoplador, en donde el material funcional de peroxidasa y el donante de hidrógeno están dispuestos en diferentes capas de tal forma que se separan entre sí pero son aptos para interactuar cuando una muestra de líquido se aplica al elemento analítico. En el uso del elemento analítico, el donante de hidrógeno es usado por la Peroxidasa presente en el material funcional de peroxidasa.

La patente US 4.959.305 divulga un dispositivo de análisis multizona para la determinación de un analito en un medio líquido de análisis. El análisis multizonal comprende una zona reactiva, una zona de reacción y una zona de detección - el análisis multizonal comprende un anticuerpo que se enlaza al analito etiquetado con un grupo químico detectable.

La patente US 2004/219694 divulga un ensayo de enzima de flujo lateral y un equipo de análisis para la determinación de analito en una muestra de análisis. La invención se relaciona, ulteriormente, con un procedimiento de flujo lateral para la determinación de analitos por el uso directo del analito como un sustrato enzimático.

La patente US 2005/260695 divulga compuestos, equipos y procedimientos útiles para la detección de mastitis en un animal. Estos agentes y procedimientos están destinados, fundamentalmente,... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo de tira reactiva seca para la determinación de un analito en una muestra, comprendiendo dicho dispositivo:

(i) Opcionalmente, un soporte sólido,

(ii) Al menos, un tampón almohadilla de reactivo que comprende un reactivo o una combinación de reactivos apta para reaccionar con el analito, un derivado de dicho analito o un compuesto indicador para que dicho analito proporcione una señal detectable cuando esté en un estado humedecido, proporcionando el, al menos, un tampón reactivo, un primer entorno para dicho (s) reactivo (s) , permitiendo dicho primer entorno una estabilidad de almacenado mejorada de lo (s) reactivo (s) y del dispositivo de tira reactiva cuando esté en un estado humedecido

(iii) Estando un tampón regulador en contacto con el, al menos, un tampón reactivo, creando el tampón reactivo un segundo entorno para dicho (s) reactivo (s) estando en un estado humedecido, permitiendo dicho segundo entorno un índice incrementado de reacción entre el analito y el/los reactivo (s) , y En el que la muestra se aplica a una superficie del dispositivo de tira reactiva seca y la señal detectable es detectada sobre la misma y en el que la determinación del analito se basa en una determinación con base en enzimas y en el que las condiciones, en el primer entorno, se consiguen por el ajuste del valor de pH a una valor que se desvía del valor de pH óptimo de la (s) enzima (s) y en el que las condiciones del segundo entorno se consiguen por la regulación del valor de pH hasta alcanzar un valor que se acerca al valor óptimo de pH de la (s) enzima (s) y en el que los diferentes entornos tienen diferentes valores de pH.

2. Un dispositivo de acuerdo con la reivindicación precedente, en el que el analito se selecciona de entre el grupo consistente en una proteína, una enzima, tal como la catalasa, lactato deshidrogenasa (LDH) , fosfatasa alcalina, fosfatasa ácida, carboxilesterasa, arilesterasa, º-glucuronidasa, lactoperoxidasa, lipasa, lisozima, xantina oxidasa, plasmina y beta-N-acetilhexosaminidasa (NAGasa) , prostaglandina D sintasa (PGDS) , una grasa, un hidrato de carbono, un antibiótico, un esteroide, una vitamina, un compuesto químico tal como urea, triglicérido y cuerpos cetónicos, tales como acetoacetato, betahidroxibutirato (BOHB) , acetona, ácido ascórbico, nitratos, urobilinógeno, colesterol, y esteroides tales como pregnolona, progesterona, testosterona, dihidrotestosterona, estrona, estradiol, cortisol, cortisona, aldosterona, corticosterona, androstenediona.

17. OH-pregnenolona.

17. OHprogesterona, 11-desoxi-corticosterona, 11-desoxicortisol y dehidroepiandrosterona, hormona luteinizante o gonadotropina coriónica humana, una célula, tal como un leucocito, una droga de abuso y sangre.

3. Un dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, en el que al menos un tampón reactivo está ubicado en relación con el tampón regulador para evitar la precipitación de un componente de muestra en la superficie superior del dispositivo.

4. Un dispositivo de acuerdo con una de las reivindicaciones precedentes, en el que el primer entorno es creado de tal forma que se favorezca la estabilidad de almacenado del/ de los reactivo (s) aptos para reaccionar con el analito y proporcionar una señal detectable.

5. Un procedimiento para ensayar un analito en una muestra de leche, comprendiendo dicho procedimiento las fases de:

(i) Aplicación de la muestra de leche de la que se sospecha que contiene el analito a un tampón reactivo (ii) permitir que la muestra se desplace al interior del tampón reactivo que comprende un reactivo o una combinación de reactivos aptos para reaccionar con el analito, un derivado de dicho analito o un compuesto indicador para que dicho analito proporcione una señal detectable estando en un estado humedecido, proporcionando el, al menos, un tampón reactivo un primer entorno para dicho (s) reactivo (s) , permitiendo dicho primer entorno una estabilidad de almacenado mejorada del/ de los reactivo (s) y del dispositivo de tira reactiva seca cuando estén en un estado no húmedo (iii) Permitir que la muestra, sola o conjuntamente con el reactivo, se desplace desde el tampón reactivo al interior de un tampón regulador, estando dicho tampón regulador en contacto con el tampón reactivo, creando el tampón reactivo un segundo entorno para dicho reactivo cuando está en un estado húmedo, permitiendo dicho segundo entorno un índice incrementado de reacción entre el analito y el/los reactivo (s) ,

(iv) Permitir que el reactivo y el analito, el derivado de dicho analito o el compuesto indicador de dicho analito proporcionen una señal detectable, y

(v) Detectar la señal detectable sobre la misma superficie a la que se aplicó la muestra y

En el que la determinación del analito se basa en una determinación con base en enzimas y en el que las condiciones, en el primer entorno, se consiguen por el ajuste del valor de pH a una valor que se desvía del valor de pH óptimo de la (s) enzima (s) y en el que las condiciones del segundo entorno se consiguen por la regulación del valor de pH hasta alcanzar un valor que se acerca al valor óptimo de pH de la (s) enzima (s) y en el que los diferentes entornos tienen diferentes valores de pH.

6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el analito se selecciona de entre el grupo consistente en una proteína, una enzima, tal como la catalasa, lactato deshidrogenasa (LDH) , fosfatasa alcalina, fosfatasa ácida, carboxilesterasa, arilesterasa, º-glucuronidasa, lactoperoxidasa, lipasa, lisozima, xantina oxidasa, plasmina y beta-N-acetilhexosaminidasa (NAGasa) , prostaglandina D sintasa (PGDS) , una grasa, un hidrato de carbono, un antibiótico, un esteroide, una vitamina, un compuesto químico tal como urea, triglicérido y cuerpos cetónicos, tales como acetoacetato, betahidroxibutirato (BOHB) , acetona, ácido ascórbico, nitratos, urobilinógeno, colesterol, y esteroides tales como pregnolona, progesterona, testosterona, dihidrotestosterona, estrona, estradiol, cortisol, cortisona, aldosterona, corticosterona, androstenediona.

17. OH-pregnenolona.

17. OHprogesterona, 11-desoxi-corticosterona, 11-desoxicortisol y dehidroepiandrosterona, hormona luteinizante o gonadotropina coriónica humana, una célula, tal como un leucocito, una droga de abuso y sangre.

7. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5-6, en el que el primer entorno es creado de tal forma que se favorezca la estabilidad de almacenado del/ de los reactivo (s) aptos para reaccionar con el analito y proporcionar una señal detectable.

8. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en el que el segundo entorno es creado de tal forma que se favorezca el índice de reacción entre el analito y el/ de los reactivo (s) aptos para reaccionar con el analito y proporcionar una señal detectable.

9. Un procedimiento para la preparación del dispositivo de tira reactiva seca de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, comprendiendo dicho procedimiento las fases de:

(i) Proporcionar un tampón reactivo por la impregnación de un primer material poroso con una solución acuosa que comprende un reactivo o una combinación de reactivos aptos para reaccionar con el analito, para que un derivado de dicho analito o un compuesto indicador para dicho analito proporcionen una señal detectable estando en un estado húmedo, proporcionando el al menos un tampón reactivo un primer entorno para dicho (s) reactivo (s) , permitiendo dicho primer entorno una estabilidad de almacenado mejorada del/ de los reactivo (s) y del dispositivo de tira seca reactiva

(ii) Secar, consecuentemente, el tampón reactivo,

(iii) Proporcionar un tampón regulador por la impregnación de un segundo material poroso con una solución acuosa creando un segundo entorno para dicho (s) reactivo (s) estando en un estado de humedad, permitiendo dicho segundo entorno un índice incrementado de reacción entre el analito y el reactivo,

(iv) Secar, consecuentemente, el segundo material poroso impregnado, y

(v) Poner en contacto el tampón reactivo con el tampón regulador, opcionalmente sobre un soporte sólido, para obtener el dispositivo de tira reactiva seca y

En el que el dispositivo de tira reactiva seca se basa en una determinación con base en enzimas y en el que las condiciones, en el primer entorno, se consiguen por el ajuste del valor de pH a una valor que se desvía del valor de pH óptimo de la (s) enzima (s) y en el que las condiciones del segundo entorno se consiguen por la regulación del valor de pH hasta alcanzar un valor que se acerca al valor óptimo de pH de la (s) enzima (s) y en el que los diferentes entornos tienen diferentes valores de pH.

10. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en el que al menos un tampón reactivo está ubicado en relación con el tampón regulador para evitar la precipitación de un componente de muestra en la superficie superior del dispositivo.

11. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el componente de muestra se selecciona del grupo consistente en proteínas, hidratos de carbono, grasas, células, u otros componentes presentes en la muestra.

12. El uso de un dispositivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para la determinación de un analito en una muestra.