Procedimiento para preparar un fármaco para combatir una infección de una célula huésped por virus de IH,

caracterizado por los pasos de: a) Proveer plasma sanguíneo humano y b) Oxidar con HOCl las proteínas y péptidos contenidos en el plasma sanguíneo.

Lucha contra infecciones por virus de IH con plasma sanguíneo humano oxidado con ácido hipocloroso.

La invención se refiere al ámbito de los fármacos para combatir una infección de una célula huésped por virus de IH. Para ello se ofrecen fármacos según la invención que contienen proteínas oxidadas y péptidos oxidados, así como procedimientos de preparación de tales fármacos y posibilidades de uso terapéutico de estos fármacos. En lo que sigue se denominan conjuntamente con el término "oxP" a proteínas oxidadas y péptidos oxidados obtenidos según el procedimiento de la reivindicación 1.

Tal como se describe en los documentos WO 02/22150 A2 y WO 02/32445 A2, oxP se unen al GP120 de la proteína Env de la envoltura del virus de IH, al igual que hacen, pero sin quedar limitados a éstos, la antitrombina "activada para defensa inmunitaria" (IDA-ATIII) , seroalbúmina oxidada, fibrinógeno oxidado. Los oxPs pueden, tal como los autores de la presente invención han demostrado para IDA-ATIII, por ejemplo, en el documento WO 02/22150 A2, impedir la multiplicación del virus de IH en la célula huésped.

En el contexto de la presente invención, los autores de la misma demuestran que oxPs pueden evitar el contacto entre el virus de IH y la célula huésped, y bloquear la formación de sincitios de células defensivas infectadas y no infectadas y con ello inhibir la infección ya "a nivel de la entrada". Sorprendentemente, se ha observado además que para prevenir la infección de una célula huésped con virus de IH no son necesarias proteínas oxidadas y péptidos oxidados purificados, tales como la seroalbúmina humana, sino que el plasma sanguíneo oxidado puede impedir, como tal, una infección "a nivel de la entrada".

Aunque existen algunos medicamentos antivirales potentes, el VIH se ha desarrollado hasta constituir una verdadera pandemia mundial y en consecuencia se ha convertido en la enfermedad infecciosa más importante. Actualmente más de 4 millones de personas mueren cada año por esta enfermedad. Puesto que los medicamentos contra VIH que hoy están aprobados, tales como inhibidores de proteasa e inhibidores de transcriptasa inversa no son capaces de eliminar por completo el VIH de las personas infectadas, existe la necesidad urgente de descubrir nuevos medicamentos antivirales.

Las infecciones por VIH o SIDA representan una de las crisis más graves en el desarrollo de la Humanidad. Por lo tanto, se debe hallar un medicamento contra el VIH que, junto a todos los requisitos científicos, sea por una parte fácil y asequible de producir y, por otra parte, se pueda hacer fácilmente accesible para las personas, especialmente en las regiones subsaharianas.

Estos problemas se han resuelto con la presente invención, ya que los oxPs aquí presentados bloquean infecciones por VIH ya en el plano de entrada, que es de todos el primero, los oxPs se pueden producir de manera fácil y barata (se puede utilizar directamente proteína del plasma de una persona) y este procedimiento puede llevarse a cabo no sólo en laboratorios especializados.

Básicamente, los virus con envoltura penetran en su célula diana al entrar en contacto la membrana del virus con la membrana de la célula diana, y al acercarse después tanto las dos membranas que se fusionan. Para el contacto del virus VIH-1 con la célula huésped es necesaria la unión de la proteína Env de la envoltura del VIH, que se encuentra en el exterior, al receptor CD4. Esto tiene lugar a través del componente GP120 de la Env. El GP120 se une después a uno de los co-receptores principales CXCR4 ó CCR5. La unión de GP120 a sus receptores conduce a un cambio de conformación del complejo externo GP120/GP41. Esta interacción es un requisito básico para que se genere el extremo N-terminal de GP41 vírico, que en última instancia conduce a la fusión de las membranas.

Uno de los factores que pueden bloquear en parte la entrada del virus son anticuerpos neutralizantes que están dirigidos contra GP120. Sin embargo, los anticuerpos neutralizantes de infecciones naturales poseen sólo una eficacia limitada, ya que por una parte el VIH produce un enorme número de diferentes variantes antigénicas, y por otra parte después de una infección se llega a una restrictiva "dominancia clonal" de anticuerpos neutralizantes de VIH. Por tanto, las nuevas variantes VIH-1 pueden escapar fácilmente de semejante respuesta, muy específica pero 45 limitada.

Recientes hallazgos han demostrado que la respuesta inmunitaria innata no específica es relevante para la defensa contra VIH. Leucocitos neutrófilos polimorfonucleares (PMNL) y monocitos son, después de ser estimulados, viricidas contra VIH-1. La estimulación por lipopolisacárido (LPS) , que conduce al estallido oxidativo de leucocitos, da lugar a un bloqueo de la entrada de VIH, independientemente del fenotipo de co-receptor vírico.

50 Los leucocitos generan H2O2 y secretan la hemoproteína mieloperoxidasa (MPO) . Klebanoff y sus colaboradores han demostrado que PMNL estimulados de pacientes con deficiencia hereditaria de la enzima MPO poseían una actividad viricida disminuida. Mediante la adición de MPO se pudo reconstituir el poder de defensa disminuido.

Basándose en el estado actual de conocimientos se acepta que el HOCl producido por la MPO es en sí el agente activo antiviral. La expresión y la liberación de la MPO, que produce HOCl, está estrictamente controlada in vivo. El 55 HOCl libre representa una parte del estrés oxidativo.

Los autores de la presente invención han comprobado ahora, en el marco de la invención, que proteínas y péptidos que han entrado en contacto con HOCl, pueden transformarse a una forma antivírica y por tanto el HOCl tiene un efecto indirecto contra VIH-1 además del conocido efecto indirecto.

Relevancia de este tipo de inhibición para futuras aplicaciones terapéuticas: el HOCl, que es producido por la MPO en el tejido inflamado, modifica LDL y muchas otras proteínas humanas in vivo. Las proteínas modificadas por HOCl podrían ser detectadas por anticuerpos monoclonales específicos (documento WO-02/32445 A2) . Por tanto, una modificación estructural, que ha sido generada por tratamiento con HOCl, ofrece un epítopo que ya está presente in vivo y por tanto es bien conocido para el sistema inmunitario. Por tanto, las oxPs deberían ser toleradas in vivo.

Además, la oxP se basa en una modificación química relativamente simple y asociada a un bajo coste.

ÂPor qué el organismo no produce suficiente oxP in vivo para protegerse de la infección por VIH? Una respuesta a esta pregunta podría estar en la observación de que la función de los leucocitos neutrófilos y de los monocitos en personas infectadas con VIH empeora al comienzo de la infección, y que las pérdidas de función presentan una correlación positiva con la extensión o progreso de la enfermedad inducida por VIH.

La misión de la presente invención era, en consecuencia, poner a disposición un fármacoque inhiba la infección por VIH ya "a nivel de la entrada", y al mismo tiempo sea simple y barato de preparar y por ello también aplicable a pacientes del denominado "Tercer Mundo".

La misión se cumple mediante un procedimiento para preparar un fármaco para combatir una infección de una célula huésped por virus de IH, que está caracterizado por los pasos de:

a) Proveer plasma sanguíneo humano.

b) Oxidar con HOCl las proteínas y péptidos contenidos en la mezcla.

Mientras que en anteriores investigaciones se ha demostrado el efecto de proteínas individuales, purificadas, sobre la unión de una proteína Env a una proteína CD4, se ha puesto ahora de manifiesto, sorprendentemente, que la infección de una célula huésped por virus de IH también puede ser inhibida, reducida o incluso completamente impedida por mezclas de proteínas. En particular, estos efectos pueden ser conseguidos también por mezclas complejas que contienen proteína y/o péptido, con más de un tipo de proteína o péptido. Esto fue sorprendente, ya que era de esperar que el proceso de preparación de las proteínas y/o péptidos oxidados necesarios para combatir una infección de una célula huésped por virus de IH y/o para inhibir la unión de una proteína Env a una proteína CD4 se vería afectado en el caso de la oxidación en tales mezclas complejas por la generación de conformaciones incorrectas y por reacciones secundarias, de manera tal que la eficacia de proteínas oxidadas en semejantes... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para preparar un fármaco para combatir una infección de una célula huésped por virus de IH, caracterizado por los pasos de: a) Proveer plasma sanguíneo humano y b) Oxidar con HOCl las proteínas y péptidos contenidos en el plasma sanguíneo.

2. Fármaco para uso en la lucha contra una infección de células huésped por virus de IH, que se puede preparar según la reivindicación 1.

Fig. 1:

Fig. 2:

Fig. 2b) :

Fig. 3: unión de mezcla oxidada de proteínas plasmáticas a GP120 de VIH

Fig. 4:

Fig.º5:

Fig. 5 (continuación) :

Fig.º6: