Células placentarias o adiposas adherentes para usarse en el tratamiento de una afección seleccionada entre el grupo que consiste en isquemia,

una afección que requiere de regeneración de tejido conectivo y una afección que requiere de reparación de tejido conectivo.

Células adherentes de tejidos adiposos o placenta y uso de las misma en terapia

Campo y antecedentes de la invención

La invención se refiere a métodos de tratamiento de enfermedades que usan células adherentes de tejidos adiposos o placenta, más concretamente, a métodos de tratamiento de isquemia y/o afecciones médicas que requieren la regeneración y/o reparación de tejido conectivo usando las células adherentes.

En el mundo médico en desarrollo existe una necesidad cada vez mayor de grandes cantidades de células madre adultas con el propósito de injerto celular e ingeniería tisular. Además, la terapia de célula madre adulta está continuamente en desarrollo para tratar y curar diversas afecciones tales como trastornos hematopoyéticos, enfermedad del corazón, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, apoplejía, vagos, distrofia muscular, trastornos autoinmunes, diabetes y artritis.

En años se ha enfocado recientes, una actividad considerable en el potencial terapéutico de las células estromales mesenquimales (MSCs, del Inglés “Mesenchymal Stromal Cells”) para diversas aplicaciones médicas incluyendo la reparación de órganos dañados tales como cerebro, corazón, hueso e hígado y en soporte de los trasplantes de médula ósea (BMT, del Inglés “Bone Marrow Transplantations”) . Las MSCs, una población heterogénea de células obtenidas de, por ejemplo, médula ósea, tejido adiposo, placenta y sangre son capaces de diferenciarse en diferentes tipos de tejidos de células maduras mesenquimales (por ejemplo, células endoteliales reticulares, fibroblastos, adipocitos, células precursoras osteogénicas) dependiendo de las influencias de diversos factores bioactivos. Por consiguiente, las MSCs han sido ampliamente estudiadas en la medicina regenerativa como base para construir nuevos tejidos tales como hueso, cartílago y grasa para la reparación de lesión o reemplazamiento de tejidos patológicos y como tratamiento para enfermedades genéticas y adquiridas [Fibbe y Noort, Ann. N.Y. Acad. Sci. (2003) 996:235-44; Hortwitz et al., Cytotherapy (2005) 7 (5) :395; Zimmet y Hare, Basic Res. Cardiol (2005) 100 (6) :471-81]. Además, la capacidad multipotente de MSCs, su fácil aislamiento y cultivo, así como su alto potencial de expansión ex vivo hace de ellas una herramienta terapéutica atractiva [Fibbe y Noort, supra; Minguell et al. Exp. Biol. Med. (Maywood) (2001) 226 (6) :507-20].

Las MSCs derivadas placentarias presentan muchos marcadores comunes a las MSCs aisladas de otros tejidos, por ejemplo, CD105, CD73, CD90 y CD29, y la falta de expresión de marcadores celulares específicos hematopoyéticos, endoteliales y trofoblásticos. Se han alcanzado la diferenciación adipogénica, osteogénica y neurogénica después de cultivar MSCs derivadas placentarias bajo condiciones apropiadas [Yen et al., Stem Cells (2005) 23 (1) :3-9]. Además, se ha demostrado que las MSCs aisladas de placenta y cultivadas in vitro son inmune privilegiadas de una manera similar a MSCs. Por tanto, la placenta proporciona una fuente éticamente no controvertida y fácilmente accesible de MSCs para aplicaciones experimentales y clínicas [Zhang et al., Exp Hematol (2004) 32 (7) :657-64].

Los presentes inventores han ideado previamente condiciones de cultivo tridimensionales (3D) adecuadas para la expansión de las MSCs derivadas placentarias (WO 2007/108003)

Destacados usos clínicos de MSCs se resumen a continuación.

Isquemia

Enfermedad arterial periférica (PAD)

La enfermedad arterial periférica (PAD, del Inglés “Peripheral arterial disease”) es una enfermedad crónica que progresivamente restringe el flujo sanguíneo en los miembros que puede conducir a serias complicaciones médicas. Esta enfermedad con frecuencia está asociada con otras afecciones clínicas, que incluyen hipertensión, enfermedad cardiovascular, hiperlipidemia, diabetes, obesidad y apoplejía. La isquemia de Miembro Crítica (CLI, del Inglés “Critical Limb Ischemia”) se usa para describir pacientes con isquemia crónica inducida por dolor, úlceras, pérdida de tejido o gangrena en el miembro. La CLI representa la fase final de pacientes con PAD quienes necesitan tratamiento exhaustivo mediante un cirujanno vascular o especialista vascular. A diferencia de la enfermedad de arteria coronaria y cerebral, la enfermedad arterial periférica (PAD) mantiene una condición poco apreciada que a pesar de ser seria y extremadamente prevalente raramente se diagnostica e incluso menos frecuentemente se trata. Por consiquiente, CLI conduce con frecuencia a que la amputación o los índices de muerte y mortalidad en pacientes de PAD excedan a la de los pacientes con infartos miocárdicos y apoplejía.

En intentos para tratar las afecciones isquémicas, se han usado diversas células madre adultas. Por tanto, el cultivo conjunto de células estromales derivadas (ADSC, del Inglés “Adipose Derived Stromal Cells”) de tejido adiposo y células endoteliales (EC, del Inglés “Endothelial Cells”) dieron como resultado un aumento significativo en la viabilidad de EC, migración y formación de tubo principalmente a través de la secreción de VEGF y HGF. Cuatro semanas después del trasplante de células estromales dentro del miembro trasero de ratón isquémico se mejoraron los resultados angiogénicos [Nakagami et al., J. Atheroscier Thromb (2006) 13 (2) :77-81]. Moon et al. [Cell Physiol Biochem. (2006) 17:279-90] han ensayado la capacidad de células progenitoras derivadas de tejido adiposo (ADSC) para tratar isquemia de miembro en ratones inmunodeficientes y demostraron un aumento significativo en el índice de perfusión con láser Doppler en grupo trasplantado con ADSC.

Además, cuando se trasplantaron las células madre mesenquimales derivadas de sangre de cordón umbilical (UCB, del Inglés “Umbilical Cord Blood”) dentro de cuatro hombres con enfermedad de Buerger quienes ya han recibido tratamiento médico y terapias quirúrgicas, el dolor de resto isquémico, desaparecido de pronto de sus extremidades afectadas [Kim et al., Stem Cells (2006) 24 (6) :1620-6]. Además, el trasplante de células madre mesenquimales humanas aisladas de membranas fetales de placenta a término (FMhMSC) dentro de corazones de ratas infartados se asoció a densidad capilar aumentada, normalización de la función ventricular izquierda y disminución significativa en el tejido de cicatriz, el cual se aumentó cuando se acondicionaron previamente las células madre con un éster mezclado de hialuronano con ácido butírico y retinóico [Ventura et al., (2007) J. Biol. Chem., 282:14243-52].

Apoplejía

La apoplejía es una de las causas destacadas de muerte alrededor del mundo, causando aproximadamente el 9% de todas las muertes y consumiendo aproximadamente 2-4% de los costes totales de los cuidados sanitarios. Aunque ha habido una reducción constante en la mortalidad por apoplejía en los países desarrollados, probablemente debido al control mejorado de los factores de riesgo de apoplejía (especialmente la alta presión sanguínea, diabetes y fumar cigarrillos) , la apoplejía conduce aún a daño permanente (por ejemplo, daño tisular, daño neurológico) .

Los nuevos regímenes de tratamiento para la apoplejía incluyen terapia con célula madre. El trasplante de células madre

o progenitoras en el sitio lesionado, o bien localmente o vía rutas intravenosas, para reemplazar las células no funcionales, el aumento de la proliferación y/o diferenciación de células madre endógenas o progenitoras y el suministro de moduladores inmunes necesarios se ha contemplado y se mantiene como la principal estrategia basada en célula. Las fuentes potenciales de células madre/progenitoras para la apoplejía incluyen células madre neurales fetales, células madre embrionarias, células neuroteratocarcinoma, células madre no hematopoyéticas derivadas de la sangre del cordón umbilical, células madre derivadas de médula ósea y células madre mesenquimales derivadas de placenta [Andres et al., Neurosurg Focus (2008) 24 (3-4) :E16].

En un estudio reciente, Koh et al. [Koh et al., Brain Res. (2008) ] examinó los efectos neuroprotectores y los mecanismos de células madre mesenquimales derivadas del cordón umbilical humano implantados (hUC-MSCs) en un modelo de rata de apoplejía isquémica. Veinte días después de la inducción de la diferenciación neuronal in vitro, hUC-MSCs manifestaron rasgos morfológicos de neuronas y... [Seguir leyendo]

1. Células placentarias o adiposas adherentes para usarse en el tratamiento de una afección seleccionada entre el grupo que consiste en isquemia, una afección que requiere de regeneración de tejido conectivo y una afección que requiere de reparación de tejido conectivo.

2. Un artículo de producción que comprende un material de envasado el cual comprende una etiqueta para usarse en el tratamiento de una afección seleccionada entre el grupo que consiste en isquemia, una afección que requiere de regeneración de tejido conectivo y una afección que requiere de reparación de tejido conectivo, envasando dicho material de envasado una cantidad farmacéuticamente efectivas de células placentarias o adiposas adherentes.

3. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 en la que dichas células son capaces de suprimir la reacción inmune en el sujeto.

4. Las células o artículo de producción de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 en la que al menos el 10% de dichas células adherentes están en una fase proliferativa.

5. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 en la que dichas células se propagan usando un cultivo tridimensional (3D) .

6. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 en la que dichas células se propagan usando un cultivo bidimensional (2D) .

7. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con la reivindicación 5, en la que dicho cultivo tridimensional (3D) comprende un biorreactor 3D.

8. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 5 ó 7, en la que el cultivo de dichas células en dicho cultivo 3D se efectúa bajo perfusión.

9. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con la reivindicación 8, en la que dicho índice de perfusión se ajusta para mantener una concentración constante de glucosa en el medio de cultivo.

10. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con la reivindicación 9, en la que dicha concentración constante de glucosa es de aproximadamente 550 mg/l.

11. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 y 7 a 10, en las que las condiciones de cultivo de dicho cultivo tridimensional comprende un material adherente seleccionado entre el grupo que consiste en un poliéster y un polipropilieno.

12. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11, en las que dichas células comprenden una expresión de marcador positivo seleccionado entre el grupo que consiste en CD73, CD90, CD29 y CD105.

13. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, en las que las células comprenden una expresión de marcador negativo seleccionado entre el grupo que consiste en CD3, CD4, CD45, CD80, HLA-DR, CD11b, CD14, CD19, CD34 y CD79.

14. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la que dichas células adherentes comprenden un fenotipo ce célula madre estromal.

15. Las células o artículo de producción para usarse de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la que dicha isquemia se selecciona entre el grupo que consiste en enfermedad arterial periférica (PAD, del Inglés “Peripheral arterial disease”) e isquemia de sistema nervioso central (CNS) .