Un kit de ensayo rápido para la detección y localización de úlceras o sangrías del tracto digestivo en equinos,

que comprende: una primera tira de ensayo para un inmunoensayo o una reacción de peroxidasa rápidos para detectar la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino; en que dicha primera tira de ensayo permite detectar la presencia de hemoglobina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino; y una segunda tira de ensayo para un inmunoensayo rápido para detectar la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino; en que dicha segunda tira de ensayo permite detectar la presencia de albúmina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino

Anticuerpos monoclonales y policlonales hacia albúmina y hemoglobina equinas y aparato y métodos que usan los anticuerpos en la identificación y localización de úlceras y otras sangrías del tracto digestivo en equinos ANTECEDENTES DEL INVENTO

Campo del Invento La presente descripción se refiere, en general, a aparatos y métodos diagnósticos y de ensayo y, más particularmente, a anticuerpos hacia hemoglobina equina y albúmina equina y al uso de los mismos en aparatos, kits y métodos de ensayo para detectar y localizar úlceras gástricas y colónicas y otras sangrías del tracto digestivo en caballos.

Antes de discutir el ensayo y el diagnóstico de úlceras en caballos, es beneficioso discutir la anatomía algo única del tracto digestivo de los caballos que contribuye a la alta incidencia de úlceras de tracto digestivo en los caballos. En el caso de los seres humanos y la mayoría de los demás animales, se secreta ácido gástrico en el estómago en respuesta a la acción de comer. Por contraste, los caballos han evolucionado a lo largo de milenios como animales de alimentación por goteo (comiendo lentamente pero más o menos continuamente a lo largo de la mayor parte del día) y sus sistemas digestivos están adaptados para dicha dieta, con una producción continua de jugos gástricos y una secreción de bilis en el intestino anterior desde el hígado. De este modo, se puede pensar en el estómago de un caballo como una bomba de ácido que produce ácido gástrico más o menos continuamente durante todo el día, se esté alimentando o no el caballo.

Como consecuencia de su anatomía y las modernas prácticas de alimentación y cuidados, todos los caballos, y particularmente los caballos de altas cualidades, presentan una altísima incidencia de úlceras gástricas (estomacales) . En los caballos de carreras, por ejemplo, se ha comunicado que tanto como el noventa y siete por ciento de la población de caballos de carreras tienen úlceras en el tracto digestivo, quedando sólo algo retrasado el porcentaje de caballos de exhibición que tienen úlceras en el tracto digestivo. Incluso los potros de los caballos de altas cualidades han resultado afectados por este estado, teniendo úlceras en el tracto digestivo aproximadamente el sesenta por ciento de los potros de los caballos de altas cualidades. Aunque los caballos de recreo presentan una menor incidencia de úlceras en el tracto digestivo que los caballos de exhibición, la creciente incidencia de úlceras en el tracto digestivo en los dos últimos decenios ha sido significativa en todos los segmentos de la población de caballos, incluyendo los caballos de recreo.

Aunque las incidencias de úlceras colónicas (úlceras en el ciego y/o colon del caballo) han quedado en gran medida sin explorar, también pueden representar un problema de salud diferente e igualmente grave para los caballos. Uno de los únicos estudios científicos hasta la fecha se centraba específicamente en la incidencia de úlceras colónicas y mostraba unos sorprendentes resultados. En este estudio, una muestra representativa aleatoria de caballos presentaba una incidencia de úlceras gástricas de aproximadamente cincuenta y cinco por ciento y una incidencia de úlceras colónicas de cuarenta por ciento. Las incidencias de úlceras gástricas y colónicas no eran idénticas, lo que significaba que algunos caballos sólo presentaban úlceras gástricas y otros caballos sólo presentaban úlceras colónicas. Sin embargo un gran porcentaje de los caballos que presentaban úlceras colónicas también presentaban úlceras gástricas, no teniendo úlceras gástricas ni colónicas menos del treinta por ciento de la población de caballos en su totalidad. Como se mencionó anteriormente, la incidencia de úlceras en el tracto digestivo de los caballos de exhibición y los caballos de carreras es incluso mayor que estas estadísticas para la población general de caballos.

Hay diversas soluciones para el problema de las úlceras de tracto digestivo en los caballos, que se han utilizado en la técnica. Dichas soluciones han incluido el uso de antiácidos para neutralizar temporalmente el ácido del estómago, el uso de fármacos para inhibir la producción de ácido gástrico, y el descanso prolongado y una dieta de forraje. Más recientemente, se ha desarrollado un complemento dietético nuevo y muy eficaz para tratar y/o prevenir las úlceras gástricas y las úlceras colónicas, como se describe en la Solicitud de Patente de EE.UU. nº 10/435.367, presentada el 9 de mayo de 2003 y titulada "Dietar y Supplement and Method for the Treatment and Prevention of Digestive Tract Ulcers in Equines and Other Animals", solicitud de patente que es cedida al cesionario del presente invento.

Aunque dichos tratamientos están disponibles, ha seguido siendo muy difícil diagnosticar úlceras gástricas en caballos con un alto grado de precisión, y no ha sido posible en absoluto diagnosticar úlceras colónicas en los caballos. Se ha mostrado que el método más comúnmente utilizado para diagnosticar úlceras equinas, es decir, el uso de síntomas (que son signos inespecíficos frecuentemente vagos, tales como pérdida de peso, poco apetito, letargia y fiebre intermitente) combinado con los resultados percibidos del tratamiento, es casi completamente nada fiable. Esto se debe al hecho de que puede haber muchas posibles causas de los mismos síntomas, y no todos los caballos muestran los mismos síntomas de ulceración o ni siquiera muestran síntomas notables de ulceración. Como tal, el uso de esta técnica es a menudo poco mejor que un acertijo.

En el Documento WO2006/062800 se describe un aparato para el diagnóstico intestinal y un método relacionado para detectar y localizar úlceras gástricas y colónicas en caballos. En el ensayo se buscan anticuerpos hacia la hemoglobina y la hematina equinas, y se utilizan marcadores visuales en los kits de ensayo para significar la detección de cualquiera de estos componentes o de ambos.

El Documento US2006/0134707 es similar al WO2006/062800 anteriormente discutido, y de nuevo se utilizan anticuerpos hacia la globina y la hematina equinas en aparatos, kits y métodos de ensayo para detectar y localizar úlceras gástricas y colónicas en caballos.

En el Documento WO200/29852 se describe un método para detectar la presencia de un analito en una muestra biológica detectando globina o hemoglobina y utilizando esto para detectar sangrías gastrointestinales superiores e inferiores en caballos.

Zhang et al., "Early diagnosis for colorectal cancer in China", febrero de 2002, World Journal of Gastroenterology, volumen 8, nº 1, páginas 21-25, discuten estudios existentes sobre el diagnóstico precoz del cáncer colorrectal.

El único modo fiable de diagnosticar úlceras gástricas en caballos ha sido por medio del uso de un videoendoscopio de tres metros, el cual tiene las desventajas significativas de ser caro, llevar mucho tiempo y ser estresante (tanto para el caballo como para el entrenador/propietario) . El coste de adquisición de un videoendoscopio de tres metros es bastante elevado y es prohibitivamente costoso para los propietarios y demás salvo para la minoría más selecta de entrenadores. Por encima del coste del endoscopio está el hecho de que el procedimiento es molesto y lleva mucho tiempo. Los propietarios, entrenadores y veterinarios que no tienen un videoendoscopio de tres metros deben consultar a un médico o veterinario que tenga un endoscopio. Esto lleva tiempo adicional y es caro, es aún más estresante para el caballo y es frustrante ya que deja el cuidado del caballo fuera del alcance del propietario, el entrenador o el veterinario habitual.

Además, incluso si se dispone de un videoendoscopio de tres metros y se utiliza, los resultados están restringidos a lo que es visible mediante el dispositivo, es decir, a tejidos estomacales. Aunque dicho dispositivo es eficaz para ver y diagnosticar úlceras estomacales, el diagnóstico de ulceración en el restante noventa y cinco por ciento del tracto digestivo de un caballo es aún imposible con este dispositivo. El intestino posterior (aproximadamente veintitrés metros del intestino delgado, el ciego y el colon) no se puede ver utilizando un endoscopio ya que no se dispone de endoscopios de suficiente longitud y ya que el uso de un endoscopio requeriría vaciar suficientemente el intestino posterior, lo que probablemente mataría al caballo. De hecho, sólo ha ocurrido recientemente que se haya documentado la elevada incidencia de úlceras colónicas en caballos, y eso se realizó únicamente por medio del uso... [Seguir leyendo]

1. Un kit de ensayo rápido para la detección y localización de úlceras o sangrías del tracto digestivo en equinos, que comprende:

una primera tira de ensayo para un inmunoensayo o una reacción de peroxidasa rápidos para detectar la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino;

en que dicha primera tira de ensayo permite detectar la presencia de hemoglobina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino; y una segunda tira de ensayo para un inmunoensayo rápido para detectar la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino;

en que dicha segunda tira de ensayo permite detectar la presencia de albúmina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino.

2. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 1, en que dicha primera tira de ensayo contiene un anticuerpo anti-hemoglobina equina que se une específicamente a la hemoglobina equina.

3. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 2, en que dicho anticuerpo anti-hemoglobina equina es un anticuerpo monoclonal.

4. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 2, en que dicho anticuerpo anti-hemoglobina equina es un anticuerpo policlonal.

5. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 2, en que dicho anticuerpo anti-hemoglobina equina es aislado del suero sanguíneo o los bazos macerados de conejos, ratones, ratas o cobayas sometidos a inoculación.

6. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 2, en que dicho anticuerpo anti-hemoglobina equina es producido por una línea celular de hibridoma que produce y secreta anticuerpos monoclonales que se unen específicamente a la hemoglobina equina.

7. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 2, en que dicho anticuerpo anti-hemoglobina equina es producido mediante la expresión de anticuerpos hacia hemoglobina equina por células inmunes que han sido hibridadas con líneas de mieloma inmortales.

8. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 7, en que dichas células inmunes son aisladas del suero sanguíneo o los bazos macerados de conejos, ratones, ratas o cobayas sometidos a inoculación.

9. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 1, en que dicha primera tira de ensayo también contiene un indicador testigo para demostrar que el ensayo ha sido llevado a cabo apropiadamente.

10. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 1, en que dicha segunda tira de ensayo contiene un anticuerpo anti-albúmina equina que se une específicamente a la albúmina equina.

11. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 10, en que dicho anticuerpo anti-albúmina equina es un anticuerpo monoclonal.

12. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 10, en que dicho anticuerpo anti-albúmina equina es un anticuerpo policlonal.

13. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 10, en que dicho anticuerpo anti-albúmina equina es aislado del suero sanguíneo o los bazos macerados de conejos, ratones, ratas o cobayas sometidos a inoculación.

14. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 10, en que dicho anticuerpo anti-albúmina equina es producido por una línea celular de hibridoma que produce y secreta anticuerpos monoclonales que se unen específicamente a la albúmina equina.

15. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 10, en que dicho anticuerpo anti-albúmina equina es producido mediante la expresión de anticuerpos hacia albúmina equina por células inmunes que han sido hibridadas con líneas de mieloma inmortales.

16. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 15, en que dichas células inmunes son aisladas del suero sanguíneo o los bazos macerados de conejos, ratones, ratas o cobayas sometidos a inoculación.

17. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 1, en que dicha segunda tira de ensayo contiene

un indicador testigo para demostrar que el ensayo ha sido llevado a cabo apropiadamente.

18. Un kit de ensayo rápido como el definido en la Reivindicación 1, en que dichas tiras de ensayo primera y segunda comprenden:

una única tira de ensayo para detectar tanto la presencia de hemoglobina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino, como la presencia de albúmina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino.

19. Un método para preparar un kit de ensayo rápido para la detección y localización de úlceras o sangrías del tracto digestivo en equinos, que comprende:

proporcionar una primera tira de ensayo para un inmunoensayo o una reacción de peroxidasa rápidos para detectar la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino;

en que dicha primera tira de ensayo se proporciona para detectar la presencia de hemoglobina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría gástrica y/o una úlcera o sangría colónica en un equino; y proporcionar una segunda tira de ensayo para un inmunoensayo rápido para detectar la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino;

en que dicha segunda tira de ensayo se proporciona para detectar la presencia de albúmina equina, que es indicativa de la presencia de una úlcera o sangría colónica en un equino.

20. Un método como el definido en la Reivindicación 19, en que dicha primera tira de ensayo contiene un anticuerpo anti-hemoglobina equina que se une específicamente a la hemoglobina equina.

21. Un método como el definido en la Reivindicación 19, en que dicha segunda tira de ensayo contiene un anticuerpo anti-albúmina equina que se une específicamente a la albúmina equina.

22. Un método como el definido en la Reivindicación 19, en que dicha primera tira de ensayo también contiene un indicador testigo para demostrar que el ensayo ha sido llevado a cabo apropiadamente, y en que dicha segunda tira de ensayo también contiene un indicador testigo para demostrar que el ensayo ha sido llevado a cabo apropiadamente.

23. Un método como el definido en la Reivindicación 19, en que dichas tiras de ensayo primera y segunda comprenden:

una única tira de ensayo para detectar tanto la presencia de hemoglobina equina como la presencia de albúmina equina.

FIG. 1

FIG. 4