UN DISPOSITIVO DE ENSAYO Y MÉTODO PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE UN ANALITO RESIDUO EN UNA MUESTRA.

Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos,

que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos

Se han desarrollado kits y métodos de ensayo inmunocromatográfico o de flujo lateral para detectar la presencia o concentración de residuos químicos o analitos, o clases de los mismos, a partir de muestras líquidas. Un ejemplo de uno de tales kits de ensayo incluye un kit de prueba de embarazo.

Particularmente, hace mucho que se ha reconocido en el área de salubridad de los alimentos que se debería efectuar de modo preciso, económico y sencillo la detección de residuos. Los consumidores y los gobiernos son cada vez más conscientes de la necesidad de hacer ensayos con los alimentos para detectar la presencia de residuos no deseables que se presentan naturalmente, o de otro modo.

Ya que una gran parte de los consumidores son niños, la salubridad de los alimentos hace mucho que es crítica en la industria láctea. Los residuos antibióticos usados en una granja láctea aparecen ocasionalmente en el suministro de leche. Los peligros asociados con estos residuos no deseables incluyen las reacciones alérgicas, la ayuda a la propagación de nuevos microbios, y a veces resistentes a los medicamentos, y otros riesgos sanitarios a largo plazo.

Los organismos públicos han establecido, en algunos casos, límites legales para ciertos residuos en los alimentos, por ejemplo, residuos antibióticos en la leche. Los residuos por encima del límite legal se consideran inseguros para el consumo humano. Los niveles de residuos por debajo del límite legal se consideran “seguros”. Es importante, por lo tanto, que los métodos de detección, además de ser efectuados de modo económico y sencillo, no proporcionen resultados positivos cuando los residuos están por debajo de los límites legales, de manera que la leche u otros alimentos, por otra parte aceptables, no se descarten o se traten de otro modo como que contienen residuos por encima de los límites legales.

El documento WO 93/17338 describe un ensayo para determinar la presencia de un concentración umbral de un solo analito en una muestra, que comprende, primero hacer reaccionar la muestra con una cantidad de anti-analito seleccionado para reducir el analito libre hasta una concentración ligeramente detectable, poner después en contacto la muestra con anti-analito inmovilizado en una región de ensayo sobre una fase sólida.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para la detección del analito o residuo en una muestra.

En su sentido más amplio, la invención se define en la reivindicación independiente 1:

Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos, que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: a) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos.

Habitualmente, un líquido, tal como leche, tiene una o más impurezas o analitos que están en cantidades mínimas que se tienen que analizar. A fin de detectar el analito, la presente invención emplea un receptor marcado que reacciona con el analito para formar un complejo analito-receptor. El receptor marcado está situado dentro de o próximo a una membrana y, cuando se expone al líquido, se presenta flujo capilar lateral sobre el mismo. En el flujo, el líquido porta con él el complejo analitoreceptor y cualquier receptor marcado desunido. Una zona de ensayo está situada sobre la membrana en la trayectoria de flujo. La zona de ensayo tiene un analito conjugado representativo fijado a la membrana, para unir un receptor desunido a fin de formar un primer complejo analito-conjugado-receptor que, como consecuencia del marcador, tiene una señal que se puede ver a simple vista o leer con un instrumento.

El flujo capilar del líquido sigue sobre la membrana hasta una zona de control. La zona de control incluye un aglutinante fijado a la membrana, que se une con el receptor marcado. Una vez unido, la zona de control cambia a una señal que se puede ver a simple vista, leer con un instrumento o ver bajo condiciones especiales de luz, tal como con luz ultravioleta. Si la señal en la zona de ensayo es más intensa que la señal en la zona de control, el ensayo indica que el analito no está presente en una cantidad suficiente (un ensayo negativo). Si la señal en la zona de ensayo es menos intensa que la señal en la zona de control, el ensayo indica que el analito está presente en una cantidad en exceso de los niveles permisibles (un ensayo positivo).

El receptor puede unir una familia de analitos (uno o una pluralidad de analitos) que tengan puntos de unión estructural similares. Los miembros de una familia de analitos pueden tener diferentes requisitos de niveles de detección y, por lo tanto, se pueden emplear aglutinantes adicionales de analitos, por ejemplo, anticuerpos monoclonales o policlonales, que unen una porción del analito en competencia con el receptor, en la muestra, disminuyendo por ello la sensibilidad del ensayo. Los anticuerpos se mezclan con el receptor marcado en una cantidad a fin de ajustar la sensibilidad frente a un analito específico o un grupo de analitos. La sensibilidad del ensayo se ajusta de manera que no se obtenga un resultado positivo en las pruebas a menos que un cierto umbral de analito esté presente en la muestra.

El dispositivo de ensayo incluye una banda soporte y una matriz de banda absorbente adjunta a la banda soporte. La matriz de muestra absorbente es un material para absorber una cantidad de la muestra por ejemplo una esponja. El dispositivo de ensayo también incluye un soporte de fase móvil para sostener una composición de fase móvil. El soporte de fase móvil está adjunto a la banda soporte y está en contacto con la matriz de muestra absorbente. Se coloca una composición de fase móvil dentro o sobre el soporte de fase móvil y tiene un receptor marcado para unirse con el analito. La composición de fase móvil puede ser llevada en la muestra y fluir junto con la muestra. Se adjunta una membrana de fase estacionaria a la banda soporte y tiene un primer extremo de la membrana en contacto con la composición de fase móvil y un segundo extremo en contacto con la zona de eliminación. La membrana permite flujo capilar lateral de la muestra desde el primer extremo de la membrana hasta el segundo extremo de la membrana. Una zona de ensayo está en la membrana de fase estacionaria entre el primer extremo de membrana y segundo extremo de membrana y tiene un analito conjugado para unirse con un receptor marcado libre. Hay una zona de control sobre la membrana de fase estacionaria entre la zona de ensayo y el segundo extremo de membrana y tiene una unión, por ejemplo un anticuerpo del receptor particular, para unirse con un receptor analito-unido y exceso de receptor libre.

La presente descripción también incluye un dispositivo de ensayo de analito para detectar, en una posición general horizontal, un analito en una muestra líquida mediante flujo capilar lateral en una banda de ensayo de cromatografía. El dispositivo incluye un hueco alargado que define una cavidad de banda alargada que tiene una apertura de utilización abierta en un extremo y tiene otro extremo. La cavidad está adaptada para recibir y sostener una banda de ensayo. El hueco se caracteriza por una cavidad de utilización dilatada que se extiende hacia fuera desde la cubierta superior y tiene o se adapta para tener un extremo abierto en el extremo de utilización. El dispositivo de ensayo incluye una banda de ensayo colocada en la cavidad de banda.

La banda de ensayo incluye una banda soporte con varias zonas secuenciales de contacto, muestra líquida, permeables que se extienden desde el primer extremo al segundo extremo. Las zonas permiten flujo capilar lateral...

1. Un método que emplea una tira de ensayo de flujo lateral para determinar si uno o más miembros de una familia de analitos, que comprende antibióticos betalactámicos se encuentra presente en una muestra de ensayo, comprendiendo dicho método: b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un receptor microbiano betalactámico, donde dicho receptor se caracteriza por una capacidad de unirse a miembros de dicha familia de analitos, para permitir que dicho receptor se una a uno o más miembros de dicha familia de analitos en dicha muestra; b) permitir que dicha muestra entre en contacto con un aglutinante de analito adicional, teniendo dicho aglutinante de analito adicional especificidad de unión para al menos un miembro de dicha familia de analitos al que se une dicho receptor, de modo que hay competición entre el receptor y el aglutinante de analito adicional para unirse a dicho al menos un analito, causando dicha competición una disminución en la sensibilidad de ensayo, relativa a dicho al menos un miembro, a un nivel umbral seleccionado; y c) detectar dicho uno o más miembros de dicha familia de analitos.

2. Un método según la reivindicación 1, que comprende además detectar dicho uno o más miembros mediante observación comparativa del color de una zona de ensayo y zona de control en la tira de ensayo de flujo lateral.

3. Un método según la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que el receptor comprende un receptor etiquetado.

4. Un método según cualquier reivindicación precedente, que comprende además permitir que dicha muestra entre en contacto con una zona de ensayo en la tira de ensayo de flujo lateral, comprendiendo dicha zona de ensayo un aglutinante de la zona de ensayo, donde dicho aglutinante de la zona de ensayo comprende un analito conjugado que se une al receptor si dicho receptor no está unido a un analito de la muestra.

5. Un método según la reivindicación 4, caracterizado adicionalmente por que el método es para determinar el nivel de beta-lactama en leche.

6. Un método según cualquier reivindicación precedente, que comprende además permitir que dicha muestra entre en contacto con una zona de control en la tira de ensayo de flujo lateral, comprendiendo dicha zona de control un aglutinante de

5 la zona de control que se une a dicho receptor.

7. Un método según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho método comprende un ensayo para beta-lactamas en leche a un nivel seguro y donde dicho receptor es una proteína bacteriana.

8. Un método según cualquier reivindicación precedente, en el que dicho aglutinante de analito adicional es un anticuerpo.

9. Un método según la reivindicación 8, en el que dicho aglutinante adicional es un anticuerpo monoclonal específico para un miembro de la familia de analitos.

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