El péptido IEIGLEGKGFEPTLEALFGK (SEC ID Nº:31) o un epítope contenido en este péptido,

una forma oxidada de este péptido o un aldehído o malondialdehído derivado de este péptido.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un nuevo péptido, en particular a un péptido que va a usarse para terapia de inmunización para el tratamiento de aterosclerosis.

En particular, la invención incluye el uso de un péptido para diagnosticar la presencia o ausencia de anticuerpos relacionados con el aumento o la disminución de riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares isquémicas.

Antecedentes

La aterosclerosis es una enfermedad crónica que produce un engrosamiento de la capa más interna (la íntima) de arterias de tamaño grande y mediano. Disminuye la circulación sanguínea y puede producir isquemia y destrucción de tejido en órganos suministrados por el vaso afectado. La aterosclerosis es la causa principal de enfermedad cardiovascular que incluye infarto de miocardio, accidente cerebrovascular y enfermedad de las arterias periféricas. Es la causa principal de muerte en el mundo occidental y se predice que se convertirá en la causa principal de muerte en el mundo entero dentro de dos décadas.

La enfermedad se inicia por la acumulación de lipoproteínas, principalmente la lipoproteína de baja densidad (LDL), en la matriz extracelular del vaso. Estas partículas de LDL se agregan y experimentan una modificación oxidativa. La LDL oxidada es tóxica y produce lesión vascular. La aterosclerosis representa en muchos sentidos una respuesta a esta lesión que incluye inflamación y fibrosis.

En 1.989, Palinski y colaboradores identificaron autoanticuerpos en circulación contra LDL oxidada en seres humanos. Esta observación sugirió que la aterosclerosis puede ser una enfermedad autoinmunitaria producida por reacciones inmunitarias contra lipoproteínas oxidadas. En ese momento, varios laboratorios empezaron a buscar asociaciones entre títulos de anticuerpos contra LDL oxidada y enfermedad cardiovascular. Sin embargo, el cuadro que apareció de estos estudios estaba lejos de ser claro. Existieron anticuerpos contra un gran número de diferentes epítopes en LDL oxidada, pero la estructura de estos epítopes era desconocida. Por tanto, el término “anticuerpos de LDL oxidada” se refirió a una mezcla desconocida de diferentes anticuerpos, en vez de a un anticuerpo específico. Los anticuerpos IgM independientes de linfocitos T fueron más frecuentes que los anticuerpos IgG dependientes de linfocitos T.

Lo anticuerpos contra LDL oxidada estaban presentes en tanto pacientes con enfermedad cardiovascular como en controles sanos. Aunque algunos estudios previos informaron de asociaciones entre títulos de anticuerpos de LDL oxidada y enfermedad cardiovascular, otros no pudieron encontrar tales asociaciones. Una debilidad principal de estos estudios era que las pruebas de ELISA usadas para determinar títulos de anticuerpos usaron partículas de LDL oxidada como ligando. La composición de LDL es diferente en diferentes individuos, el grado de modificación oxidativa es difícil tanto de controlar como de evaluar y no pueden determinarse los niveles de anticuerpos contra los diferentes epítopes en las partículas de LDL oxidada. Hasta cierto punto, debido a los problemas técnicos, ha sido difícil evaluar la función de respuestas de anticuerpos contra LDL oxidada usando las técnicas disponibles hasta este punto, pero, sin embargo, no es posible crear componentes bien definidos y reproducibles de una vacuna si tuvieran que usarse partículas de LDL oxidada intactas.

Otra forma para investigar la posibilidad de que reacciones autoinmunitarias contra LDL oxidada en la pared vascular desempeñen una función clave en el desarrollo de aterosclerosis es inmunizar animales contra su propia LDL oxidada. La idea tras este enfoque es que si las reacciones autoinmunitarias contra LDL oxidada se refuerzan usando técnicas de inmunización clásicas, esto podría producir un aumento de la inflamación vascular y progresiva de aterosclerosis. Para probar esta hipótesis se inmunizaron conejos con LDL oxidada homóloga y luego se indujo aterosclerosis alimentando a los animales con una dieta rica en colesterol durante 3 meses.

Sin embargo, a diferencia de la hipótesis original, la inmunización con LDL oxidada tiene un efecto protector que reduce la aterosclerosis aproximadamente el 50%. También se obtuvieron resultados similares en un estudio posterior en el que la dieta rica en colesterol se combinó con lesión por globo vascular para producir un desarrollo de placas más agresivo. En paralelo a los estudios de los inventores, varios otros laboratorios informaron de observaciones similares. Considerados en conjunto, los datos disponibles demuestran claramente que existen reacciones inmunitarias que protegen contra el desarrollo de aterosclerosis y que esto implica autoinmunidad contra LDL oxidada.

Estas observaciones también sugieren la posibilidad de desarrollar una inmunoterapia o “vacuna” para el tratamiento de enfermedad cardiovascular basada en aterosclerosis en el hombre. Un enfoque para hacer esto sería inmunizar un individuo con su propia LDL después de haberse oxidado por exposición a, por ejemplo, cobre. Sin embargo, este enfoque es complicado por el hecho de que no se sabe qué estructura en la LDL oxidada es responsable de la inducción de la inmunidad protectora y si la LDL oxidada también puede contener epítopes que puedan dar lugar a reacciones inmunitarias adversas.

La identificación de epítopes en LDL oxidada es importante por varios aspectos:

Primero, es probable que uno o varios de estos epítopes sean responsables de la activación de la respuesta inmunitaria antiaterogénica observada en animales inmunizados con LDL oxidada. Por tanto, los péptidos que contienen estos epítopes pueden representar una posibilidad para el desarrollo de una inmunoterapia o “vacuna contra la aterosclerosis” en el hombre. Además, pueden usarse para el tratamiento terapéutico de aterosclerosis desarrollada en el hombre.

En segundo lugar, los péptidos que contienen los epítopes identificados pueden usarse para desarrollar ELISA que pueden detectar anticuerpos contra estructura específica en LDL oxidada. Tales ELISA serían más precisos y fidedignos que los actualmente disponibles usando partículas de LDL oxidada como antígeno. También permitirían el análisis de respuestas inmunitarias contra diferentes epítopes en LDL oxidada asociada a enfermedad cardiovascular.

La patente de EE.UU. 5.972.890 se refiere a un uso de péptidos para diagnosticar aterosclerosis. La técnica presentada en dicha patente de EE.UU. es por principio una forma de diagnóstico radiofísico. Una secuencia de péptidos se marca radiactivamente y se inyecta en la circulación sanguínea. Si esta secuencia de péptidos es idéntica a las secuencias presentes en la apolipoproteína B, se unirá al tejido en el que hay receptores presentes para la apolipoproteína B. En vasos, esto está por encima de toda la placa aterosclerótica. La concentración de radiactividad en la pared del vaso puede entonces determinarse, por ejemplo, por medio de una gammacámara. Por tanto, la técnica es un procedimiento de diagnóstico radiofísico basado en que secuencias de péptidos radiactivamente marcadas se unirán a sus receptores de tejido normales presentes en la placa aterosclerótica y se detectarán usando un análisis de radiactividad externo. Es un procedimiento de análisis directo para identificar placa aterosclerótica. Requiere que al paciente se le administren compuestos radiactivos.

La técnica de la presente invención se basa en principios y procedimientos bastante diferentes. Según la reivindicación 1, la invención se refiere a fragmentos IEIGLEGKGFEPTLEALGK (SEC ID Nº: 31) de la apolipoproteína B para inmunización contra enfermedad cardiovascular, además de a un procedimiento para diagnosticar inmunorreacciones contra secuencias de péptidos de la apolipoproteína B. Tales inmunorreacciones han mostrado a su vez que aumentan en individuos que tienen una aterosclerosis desarrollada. La presente técnica se basa en la unión de secuencias de péptidos en el fondo de pocillos de polímero. Cuando una muestra de sangre se añade a los péptidos, se unirá a los anticuerpos que son específicos para estas secuencias. Entonces, la cantidad de anticuerpos unidos se determina usando un procedimiento/técnica inmunológico. Por tanto, a diferencia de la técnica de dicha patente de EE.UU., esto no es un procedimiento de determinación directa para identificar y localizar placa aterosclerótica, pero determina una respuesta inmunológica que muestra un alto grado de covariación... [Seguir leyendo]

1. El péptido IEIGLEGKGFEPTLEALFGK (SEC ID Nº:31) o un epítope contenido en este péptido, una forma oxidada de este péptido o un aldehído o malondialdehído derivado de este péptido.

2. El péptido, epítope o derivado según la reivindicación 1 para su uso en inmunización o tratamiento terapéutico de mamíferos que incluyen seres humanos contra aterosclerosis o enfermedades cardiovasculares isquémicas.

3. El péptido, epítope o derivado según la reivindicación 1 para su uso en el diagnóstico de la presencia o ausencia de anticuerpos relacionados con el aumento o la disminución de riesgo de desarrollar aterosclerosis y/o enfermedades cardiovasculares isquémicas.

4. Un péptido, epítope o derivado para el uso según la reivindicación 2 ó 3 en una forma nativa.

5. Un péptido para el uso según la reivindicación 2 ó 3, en el que el péptido es un hapteno del derivado de aldehído.

6. Un péptido para su uso según la reivindicación 2 ó 3 en forma oxidada.

7. Un péptido para el uso según la reivindicación 6, en el que el péptido se ha oxidado usando cobre.

8. Un péptido para el uso según la reivindicación 2 ó 3, en el que el péptido se usa en una combinación con liposomas de fosfolípido.

9. Un péptido o derivado para el uso según la reivindicación 2 ó 3, en forma de un derivado de malondialdehído (MDA) del mismo o en forma de un derivado de hidroxinonenal del mismo.

10. Uso del péptido o derivado según la reivindicación 1, en forma nativa o de un derivado de MDA o de hidroxinoneal, o el epítope, la preparación de una composición farmacéutica para inmunoterapia o terapia de aterosclerosis o enfermedades cardiovasculares isquémicas, opcionalmente en combinación con un adyuvante.

11. Uso según la reivindicación 10, en el que una dosis de inmunización es 1 a 100 mg del péptido.

12. Una preparación farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido, epítope o derivado según la reivindicación 1, opcionalmente en combinación con una o más cargas y/o adyuvantes farmacéuticamente inocuos.

13. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 12, en la que el péptido está ligado a un vehículo, en el que el vehículo es albúmina de suero bovino cationizada y el adyuvante es hidróxido de aluminio.

14. Una preparación farmacéutica según la reivindicación 13, en la que la composición es una composición inyectable.

15. Una vacuna para su uso en la inmunización de mamíferos que incluye seres humanos contra aterosclerosis o enfermedades cardiovasculares isquémicas, vacuna que comprende el péptido, epítope o derivado según la reivindicación 1, opcionalmente en combinación con un adyuvante.

16. Una vacuna según la reivindicación 15, en la que el péptido está ligado a un vehículo, en la que el vehículo es albúmina de suero bovino cationizada y el adyuvante es hidróxido de aluminio.