SISTEMAS DE EXPRESIÓN INDUCIBLES.

La invención se relaciona con la biología molecular, en particular se refiere a sistemas de expresión mejorados de ácidos nucleicos. Sistemas para modular la expresión de ácido nucleico son importantes para una amplia variedad de áreas de investigación biológica básica y aplicada, que incluyen genómica funcional, terapia de genes, vacunación, modelos animales para enfermedades humanas y producción biofarmacéutica de proteína. En estas aplicaciones la expresión de un ácido(s) nucleico(s) de interés se controla preferiblemente de una manera cuantitativa y temporal. En la actualidad se encuentran disponibles varios sistemas de expresión genéticos artificiales que se regulan por moléculas efectoras no tóxicas de una manera dependiente de la dosis y reversible. El sistema Tet en el cual la expresión génica se controla rigurosamente por tetraciclina (Tc) o sus derivados doxiciclina (dox), es el circuito regulatorio más ampliamente usado (Baron et al. 2000; Gossen et al. 2001; Berens et al. 2003). Este sistema se basa en el enlace específico de secuencia, de alta afinidad, de la proteína represora Tet de Escherichia coli (TetR) con la secuencia de ADN de operador tet (tetO). Tc o dox se enlazan a TetR y provoca un cambio conformacional que previene que la proteína represora se enlace con tetO. La fusión del dominio de activación VP16 del virus herpes simplex al TetR dio lugar al activador transcricional tTA, lo cual induce expresión de ácido nucleico de promotores (Ptet) que contienen tetO en células eucariotas (Gossen et al. 1992). La presencia de Tc o dox deroga la interacción tTA-tetO y desconecta la expresión génica (sistema Tet-off). Una variante tTA con cuatro sustituciones de amino ácido en la fracción TetR fue identificada, la cual exhibe un fenotipo reverso (Gossen et al. 1995). Este tTA reverso (llamado rtTA) se enlaza a Ptet exclusivamente en presencia de dox, pero no en su ausencia (sistema Teton). Ambos sistemas Tet son ampliamente aplicados ahora para controlar la expresión de ácido nucleico en eucariotas, que incluyen las de mamíferos, plantas e insectos (reseñado en Gossen et al. 2001)). WO 96/01313 describe una tetraciclina o sistema regulatorio inducible análogo usando rtTA que pueden usarse para regular expresión génica de un gen diana. El rtTA consiste de al menos dos polipéptidos de los cuales el primero se enlaza a las secuencias operadoras Tet y el segundo activa la transcripción en células eucariotas. Debido a que la exposición a largo plazo a los efectores es a menudo indeseable, el sistema Tet-on se prefiere en aplicaciones en los que la expresión de ácido nucleico ha de sustentarse en estado desconectado por períodos largos, o cuando se requiere inducción rápida de expresión de ácido nucleico. Desafortunadamente, las sustituciones de amino ácido en rtTA que confieren el fenotipo reverso también afectan su afinidad de enlazamiento para efectores. Como consecuencia, rtTA ha perdido la habilidad de activarse por Tc y otros compuestos del tipo Tc, y requiere 100 veces más dox para inducción máxima de lo que se necesita para inhibición de tTA. Estas características limitan severamente el uso in vivo del sistema Tet-on. Por ejemplo, para activar expresión transgénica controlada en el cerebro de rata, los animales deben alimentarse con altas dosis de dox que es casi tóxico (Baron et al. 1997). Por lo tanto, el sistema Tet-on, particularmente su sensibilidad efectora, debe mejorarse. Previamente el sistema Tet ha sido optimizado mediante la introducción de mutaciones diseñadas racionalmente (Baron et al. 1997; Baron et al. 1999), y por evolución directa en la que la mutagénesis aleatoria de los componentes del sistema Tet fue seguida por tamizaje (screening) funcional de los mutantes en sistemas de ensayo bacterianos o de levadura (Gossen et al. 1995; Urlinger et al. 2000). Sin embargo, estas propuestas involucran mucho trabajo y las mutaciones seleccionadas en sistemas de ensayo bacteriano o de levadura no son necesariamente mejoras en eucariotas superiores. Otra desventaja de sistemas actuales rtTA es el riesgo de dependencia reducida de dox después de múltiples rondas de replicación. Este problema surge, por ejemplo, durante aplicaciones de vacunación donde la replicación de al menos parte de un patógeno está bajo control de un sistema rtTA. En tales aplicaciones de vacunación se adquiere protección contra dichos patógenos mediante replicación inducible, controlada, de dicha al menos parte de un patógeno, preferiblemente durante un lapso de tiempo moderado. Si, no obstante, el sistema rtTA pierde su dependencia dox, dicha al menos parte de un patógeno replicará de manera constitutiva, lo que resulta en demasiado ácido nucleico y/o proteínas, lo cual involucra un problema de seguridad. El mismo tipo de problema surge durante otras aplicaciones que involucran diversas rondas de amplificación de rtTA. Por lo tanto se desea mejorar la estabilidad genética de sistemas rtTA actuales. Es un objeto de la presente invención suministrar rtTA y variantes de rtTA de cadena individual. Preferiblemente rtTA y variantes rtTA de cadena individual se suministran con al menos una propiedad mejorada. La invención suministra un método para expresar de manera inducible una secuencia de ácido nucleico de interés y el método comprende: 2 ES 2 366 227 T3 - suministrar una construcción de ácido nucleico que comprende dicha secuencia de ácido nucleico de interés enlazada de manera operativa a una expresión génica inducible que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual, dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual que comprende una mutación en un codón en la posición de aminoácido rtTA; - introducir dicha construcción de ácido nucleico a un sistema de expresión adecuado; y - permitir expresión inducible de dicha secuencia de ácido nucleico de interés. Según la presente invención, una mutación en el codón arriba mencionado de un ácido nucleico rtTA o de un ácido nucleico de rtTA de cadena individual (sc rtTA) da lugar a un rtTA o sc rtTA mejorado si se compara con sistemas Tet-on usados en la actualidad, tales como se describen en (Gossen et al. 1995), (Urlinger et al. 2000) y (Krueger et al. 2003). Usando un rtTA o una variante de sc rtTA de la presente invención, se suministra un rtTA o sc rtTA mejorado que tiene una actividad transcripcional, una sensibilidad dox superior, una estabilidad genética superior y/o un nivel más bajo de trascripción en ausencia de un inductor, tal como se compara con sistemas rtTA o sc rtTA usados en la actualidad. El nivel de trascripción en ausencia de un inductor se llama aquí actividad basal. Además, se proporcionan sistemas rtTA y sc rtTA que son inducibles mediante antibióticos diferentes de doxiciclina. Por lo tanto, el uso de un rtTA y/o sc rtTA de la presente invención se prefiere para expresar de manera inducible una secuencia de ácido nucleico de interés. Una modalidad preferida proporciona un método de acuerdo con la invención donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además una mutación en un codón en posición amino ácido rtTA 12, y/o 86, y/o 209. Se ha mostrado que tales mutaciones adicionales dan lugar a características mejoradas de los sistemas rtTA y sc rtTA resultantes. Un rtTA (sc rtTA) de cadena individual es un monómero que comprende las mismas propiedades trans-regulatorias que el dímero rtTA en tipo, no necesariamente en cantidad. Dicho sc rtTA comprende preferiblemente dos fracciones TetR y un dominio regulatorio eucariota. Dichas dos fracciones TetR se conectan preferiblemente unas a otras mediante un agente de enlace, dicho agente de enlace comprende preferiblemente una secuencia que codifica un agente de enlace (SG4)5 que es suficientemente largo y flexible para permitir ensamble intramolecular de las dos proteínas TetR. Ejemplos no limitantes de trans-reguladores Tet de cadena individual se describen en (Krueger et al. 2003). Los métodos descritos aquí en la página 3050, último párrafo y página 3051 para generar un tTA de cadena individual y/o un rtTA de cadena individual se incorporan aquí por referencia. Estos métodos son ejemplos no limitantes de la generación de sc rtTA. De acuerdo con la presente invención, una mutación en un sc rtTA que corresponde a una mutación de acuerdo con la presente invención en un transregulador dimérico rtTA da lugar a un rtTA mejorado. Una mutación en un sc rtTA corresponde a una mutación según la invención en un rtTA dimérico cuando una mutación está presente en un codón que codifica un residuo de amino ácido en una posición... [Seguir leyendo]

1. Un método para expresar de manera inducible una secuencia de ácido nucleico de interés, que comprende: - proporcionar una construcción de ácido nucleico que comprende dicha secuencia de ácido nucleico de interés enlazada de manera operacional a un sistema de expresión génica inducible que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica transactivador controlado por tetraciclina inversa (rtTA) y/o una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual, dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende una mutación en un codón en posición 67 de amino ácido rtTA; - introducir dicha construcción de ácido nucleico a un adecuado sistema de expresión; y - permitir expresión inducible de dicha secuencia de ácido nucleico de interés. 2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón en posición 19 de amino ácido de rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de glutamato, y/o un codón en posición 37 de rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de una alanina, una lisina o un codón de serina, y/o una glutamina o codón de lisina en posición 56 de amino ácido rtTA. 3. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de glicina en posición 19 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de glutamato. 4. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de alanina, cisteína, fenilalanina, histidina, isoleucina, leucina, metionina, asparagina, arginina, serina, treonina, valina, triptofano o tirosina en posición 19 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de glutamato. 5. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de histidina, de leucina o de arginina en posición 37 de amino ácido de rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de alanina, de lisina o de serina. 6. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón en posición 9 de amino ácido rtTA que codifica isoleucina, y/o un codón en posición 19 de amino ácido rtTA que codifica alanina, cisteína, aspartato, fenilalanina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparagina, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, triptofano o tirosina, y/o a codón en posición 37 de amino ácido rtTA que codifica cisteína, metionina, glutamina, treonina, histidina, leucina o arginina, y/o un codón en posición 56 de amino ácido rtTA que codifica lisina o glutamina, y/o un codón en posición 67 de amino ácido rtTA que codifica serina, y/o un codón en posición 68 de amino ácido rtTA que codifica arginina, y/o un codón en posición 86 de amino ácido rtTA que codifica tirosina, y/o a codón en posición 138 amino ácido rtTA que codifica aspartato o serina, y/o un codón en posición 157 de amino ácido rtTA que codifica lisina, y/o un codón en posición 171 de amino ácido rtTA que codifica lisina, y/o un codón en posición 177 de amino ácido rtTA que codifica leucina, y/o un codón en posición 195 amino ácido rtTA que codifica serina, y/o un codón en posición 209 de amino ácido rtTA que codifica treonina. 7. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende F67S F86Y, F67S V9I F86Y, F67S V9I G19M G138D F86Y, F67S V9I S12G G138D F86Y, F67S V9I C68R G138D F86Y, F67S V9I G138D F86Y, F67S V9I E157K F86Y, F67S V9I R171K F86Y, F67S S12G F86Y, F67S G19M F86Y, F67S E37Q F86Y, F67S G138D F86Y, F67S E157K F86Y, F67S R171K F86Y, F67S F177L F86Y, F67S A209T, F67S V9I A209T, F67S V9I G19M G138D A209T, F67S V9I S12G G138D A209T, F67S V9I C68R G138D A209T, F67S V9I G138D A209T, F67S V9I E157K A209T, F67S V9I R171K A209T, F67S S12G A209T, F67S G19M A209T, F67S E37Q A209T, F67S G138D A209T, F67S E157K A209T, F67S R171K A209T, F67S F177L A209T, F67S F86Y A209T, F67S V9I F86Y A209T, F67S V9I G19M G138D F86Y A209T, F67S V9I S12G G138D F86Y A209T, F67S V9I C68R G138D F86Y A209T, F67S V9I G138D F86Y A209T, F67S V9I E157K F86Y A209T, F67S V9I R171K F86Y A209T, F67S S12G F86Y A209T, F67S G19M F86Y A209T, F67S E37Q F86Y A209T, F67S G138D F86Y A209T, F67S E157K F86Y A209T, F67S R171K F86Y A209T or F67S F177L F86Y A209T. ES 2 366 227 T3 8. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además al menos una mutación de codón en comparación con la secuencia de ácido nucleico de la variante de rtTA2 s -S2. 9. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde dicho ácido nucleico de interés se expresa en un sistema de expresión eucariota superior. 10. Un método de acuerdo con la reivindicación 9, donde dicho ácido nucleico de interés se expresa en una célula de mamífero. 11. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde dicho ácido nucleico de interés comprende una secuencia viral esencial para replicación. 12. Un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, donde dicho ácido nucleico de interés comprende al menos parte de un genoma deVIH esencial para replicación. 13. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual, y la secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o la secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende un codón mutado en posición 67 de amino ácido rtTA. 14. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con la reivindicación 13, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón en posición 19 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón glutamato y/o un codón en posición 37 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de alanina, de lisina o de serina, y/o un codón de glutamina o de lisina en posición 56 de amino ácido rtTA. 15. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-14, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de glicina en posición 19 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de glutamato. 16. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-15, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de alanina, cisteína, fenilalanina, histidina, isoleucina, leucina, metionina, asparaginas, arginina, serina, treonina, valina, triptofano o tirosina en posición 19 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de glutamato. 17. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-16, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón de histidina, de leucina o de arginina en posición 37 de amino ácido rtTA que difiere en al menos dos nucleótidos de un codón de alanina, de lisina o de serina. 18. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-17, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además un codón en posición 9 de amino ácido rtTA que codifica isoleucina, y/o un codón en posición 19 de amino ácido rtTA que codifica alanina, cisteína, aspartato, fenilalanina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparaginas, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, tritptofano o tirosina, y/o un codón en posición 37 de amino ácido rtTA que codifica cisteína, metionina, glutamina, treonina, histidina, leucina o arginina, y/o un codón en posición 56 de amino ácido rtTA que codifica lisina o glutamina, y/o un codón en posición 67 de amino ácido rtTA que codifica serina, y/o un codón en posición 68 de amino ácido rtTA que codifica arginina, y/o un codón en posición 86 de amino ácido rtTA que codifica tirosina, y/o un codón en posición 138 de amino ácido rtTA que codifica aspartato o serina, y/o un codón en posición 157 de amino ácido rtTA que codifica lisina, y/o un codón en posición 171 de amino ácido rtTA que codifica lisina, y/o un codón en posición 177 de amino ácido rtTA que codifica leucina, y/o un codón en posición 195 de amino ácido rtTA que codifica serina, y/o un codón en posición 209 de amino ácido rtTA que codifica treonina. 19. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-18, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico rtTA de cadena individual que codifica comprende F67S F86Y, F67S V9I F86Y, F67S V9I G19M G138D F86Y, F67S V9I S12G G138D F86Y, F67S V9I C68R G138D F86Y, F67S V9I G138D F86Y, F67S V9I E157K F86Y, F67S V9I 36 ES 2 366 227 T3 R171K F86Y, F67S S12G F86Y, F67S G19M F86Y, F67S E37Q F86Y, F67S G138D F86Y, F67S E157K F86Y, F67S R171K F86Y, F67S F177L F86Y, F67S A209T, F67S V9I A209T, F67S V9I G19M G138D A209T, F67S V9I S12G G138D A209T, F67S V9I C68R G138D A209T, F67S V9I G138D A209T, F67S V9I E157K A209T, F67S V9I R171K A209T, F67S S12G A209T, F67S G19M A209T, F67S E37Q A209T, F67S G138D A209T, F67S E157K A209T, F67S R171K A209T, F67S F177L A209T, F67S F86Y A209T, F67S V9I F86Y A209T, F67S V9I G19M G138D F86Y A209T, F67S V9I S12G G138D F86Y A209T, F67S V9I C68R G138D F86Y A209T, F67S V9I G138D F86Y A209T, F67S V9I E157K F86Y A209T, F67S V9I R171K F86Y A209T, F67S S12G F86Y A209T, F67S G19M F86Y A209T, F67S E37Q F86Y A209T, F67S G138D F86Y A209T, F67S E157K F86Y A209T, F67S R171K F86Y A209T o F67S F177L F86Y A209T. 20. Una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-19, donde dicha secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende además al menos una mutación en comparación con la secuencia de ácido nucleico de la variante rtTA2 s -S2. 21. Una secuencia de amino ácido aislada, sintética o recombinante, codificada por una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20. 22. Una secuencia de amino ácido aislada, sintética o recombinante, codificada por la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 13 que comprende además una secuencia rtTA y/o una secuencia rtTA de cadena individual, y la secuencia rtTA y/o la secuencia rtTA de cadena individual comprende una isoleucina en posición 9, y/o una alanina, cisteína, aspartato, fenilalanina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparaginas, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, triptofano o tirosina en posición 19, y/o una cisteína, metionina, glutamina, treonina, histidina, leucina o arginina en posición 37, y/o una lisina o glutamina en posición 56, y/o una serina en posición 67, y/o una arginina en posición 68, y/o una tirosina en posición 86, y/o un aspartato o serina en posición 138, y/o una lisina en posición 157, y/o una lisina en posición 171, y/o una leucina en posición 177, y/o una serina en posición 195, y/o una treonina en posición 209. 23. Uso de una secuencia de ácido nucleico aislada, sintética o recombinante, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20 para expresión inducible de una secuencia de ácido nucleico de interés. 24. Uso de una secuencia de amino ácido codificada por una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20 o una secuencia de amino ácido de acuerdo con la reivindicación 22 para expresión inducible de una secuencia de ácido nucleico de interés. 25. Uso de acuerdo con la reivindicación 23, donde dicha secuencia de ácido nucleico codifica una secuencia de amino ácido que comprende una secuencia de amino ácido de acuerdo con la reivindicación 20. 26. Uso de una secuencia de ácido nucleico aislada o recombinante que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o una secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual, y la secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA y/o la secuencia de ácido nucleico que codifica rtTA de cadena individual comprende F67S F86Y A209T, F67S V9I E157K F86Y A209T, F67S V9I R171K F86Y A209T, F67S V9I F86Y A209T, F67S S12G F86Y A209T, F67S G19M F86Y A209T, F67S E37Q F86Y A209T, G12M F67S V9I G138D F86Y A209T, S12G F67S V9I G138D F86Y A209T or C68R F67S V9I G138D F86Y A209T para expresión inducible por tetraciclina y/o inducible por minociclina de un ácido nucleico de interés. 27. Un vector que comprende una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20. 28. Un replicón inducible viral que comprende una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20, y al menos una secuencia viral que es esencial para replicación bajo control directo o indirecto de dicha secuencia de ácido nucleico. 29. Un replicón inducible viral de acuerdo con la reivindicación 28 que comprende todas las secuencias virales que son esenciales para replicación bajo control directo o indirecto de dicha secuencia de ácido nucleico. 30. Un replicón de acuerdo con la reivindicación 28 o 29, que se deriva de un virud de inmunodeficiencia humana. 31. Un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-30, donde dicha secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20 se inserta al gen nef. 32. Un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-31 que comprende al menos un motivo tetO en al menos un LTR funcional. 37 33. Un replicón de acuerdo con la reivindicación 32, que comprende al menos 2, 4, 6, u 8 de tales elementos en al menos un LTR funcional. 34. Un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-33, donde al menos un LTR se modifica para evitar reversión al virus de tipo silvestre. 35. Un método para producir un virus dependiente de un agente inductor para replicación, que comprende proveer a una célula permisiva con un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-34, cultivar dicha célula en la presencia de dicho agente de inducción y cosechar dicho virus dependiente a partir de dicho cultivo. 36. Un método de acuerdo con la reivindicación 35 en el que dicho virus dependiente es un virus de inmunodeficiencia humana. 37. Un método de acuerdo con la reivindicación 35 or 36, en el que dicho virus es un virus atenuado. 38. Un virus dependiente de un agente inductor para replicación que puede obtenerse por un método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 35-37. 39. Un virus de acuerdo con la reivindicación 38, que es un virus de inmunodeficiencia humana virus. 40. Una composición inmunogénica que comprende una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20, y/o un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-34, y/o un virus de acuerdo con la reivindicación 38 o 39, y un adyuvante y/o soporte adecuados. 41. Una composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 40, donde dicho replicón y/o dicho virus se derivan de un virus de inmunodeficiencia humana. 42. Un método para la replicación controlada de un virus o de un replicón viral que comprende: - proveer a una célula permisiva con un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-34, y/o con un virus según la reivindicación 38 o 39; - cultivar dicha célula en la presencia de dicho agente inductor; y - manipular la cantidad de agente inductor presente. ES 2 366 227 T3 43. Una secuencia de ácido nucleico aislada o recombinante de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13- 20, un replicón según cualquiera de las reivindicaciones 28-34, o un virus según las reivindicaciones 38 o 39, para usar como un medicamento y/o vacuna. 44. Use de una secuencia de ácido nucleico aislada o recombinante de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20, un replicón de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 28-34, o un virus según cualquiera de las reivindicaciones 38 o 39, para la preparación de un medicamento y/o composición inmunogénica para contrarestar, al menos en parte, y/o tratar SIDA. 45. Una célula aislada que comprende una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 13-20, un replicón según cualquiera de las reivindicaciones 28-34, y/o un virus de acuerdo con la reivindicación 38 o 39. 38 ES 2 366 227 T3 39 ES 2 366 227 T3 ES 2 366 227 T3 41 ES 2 366 227 T3 42 ES 2 366 227 T3 43 ES 2 366 227 T3 44 ES 2 366 227 T3 ES 2 366 227 T3 46 ES 2 366 227 T3 47 ES 2 366 227 T3 48 ES 2 366 227 T3 49 ES 2 366 227 T3 ES 2 366 227 T3 51 ES 2 366 227 T3 52 ES 2 366 227 T3 53 ES 2 366 227 T3 54 ES 2 366 227 T3 ES 2 366 227 T3 56 ES 2 366 227 T3 57 ES 2 366 227 T3 58 ES 2 366 227 T3 59 ES 2 366 227 T3 ES 2 366 227 T3 61 ES 2 366 227 T3 62 ES 2 366 227 T3 63