PROCEDIMIENTO PARA SEPARAR LEUCOCITOS DE LA SANGRE.

La invención se refiere a un procedimiento para separar leucocitos de la sangre, así como a un dispositivo para llevar a cabo este procedimiento. La sangre se compone, esencialmente, de plasma y elementos celulares. Entre estos últimos se cuentan eritrocitos (glóbulos rojos), trombocitos (plaquetas) y leucocitos (glóbulos blancos). Entre los glóbulos blancos se encuentran linfocitos, monocitos y granulocitos neutrófilos (neutrófilos, leucocitos polimorfonucleados (PMN)). Los linfocitos desempeñan una acción decisiva en la inmunidad específica. Los monocitos y granulocitos neutrófilos son tipos de células que intervienen en las defensas inmunitarias inespecíficas o reacciones inflamatorias. Su misión es, por ejemplo, anular microorganismos invasores, marcados previamente por determinadas proteínas propias del organismo (por ejemplo, C3b del sistema del complemento o la inmunoglobulina IgG) como organismos extraños. Una vez que las células se han aproximado a los microorganismos invasores, vierten tanto radicales de oxígeno como proteasas que destruyen los microorganismos, para ser fagocitados posteriormente. Cuando esta reacción no se produce de forma íntegra, o transcurre sin control y de forma crónica, la liberación de radicales de oxígeno y proteasas, de carácter agresivo, puede dañar tejidos propios del organismo. Durante la inflamación se establece entre todos los tipos de células una intensa comunicación y coordinación que son utilizadas, entre otras, por diversas citoquinas. La reacción es muy compleja y aún no ha sido completamente dilucidada. Sin embargo, en último término, da lugar a los síntomas clínicamente observables de la inflamación, que incluyen tumefacción, enrojecimiento y fiebre. En este contexto, son característicos, entre otros, un aumento de los monocitos y granulocitos neutrófilos generados en la médula ósea, y circulantes en la sangre, así como de determinados mensajeros químicos. Además de las citoquinas proinflamatorias mencionadas, se forman también las proteínas del complemento C3a y C5a, que se generan por la activación de las proteínas C3 y C5, y que actúan como parámetro de la activación del complemento durante la reacción inflamatoria o de fase aguda. En una serie de enfermedades inflamatorias tales como colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y artritis reumatoide, se utilizan actualmente terapias extracorporales. Según el actual estado de la técnica, para ello se extrae del paciente un número determinado de células (probablemente, monocitos y granulocitos neutrófilos especiales), haciendo circular la sangre del paciente de forma extracorporal y tratándola con un filtro para células. Se utilizan como filtros de leucocitos, por ejemplo, columnas rellenas con partículas o perlas de acetato de celulosa. En este caso, la separación se produce principalmente por adsorción celular sobre la superficie de las perlas. Estos productos están disponibles ya en el comercio. La sangre se hace pasar a través de una columna que contiene esferas de acetato de celulosa. Las esferas de acetato de celulosa reducen por adsorción, en especial, los granulocitos y monocitos contenidos en la sangre. El documento US 6.489.007 da a conocer un procedimiento para separar leucocitos de la sangre por adsorción sobre un soporte. En este caso, se hace contactar la sangre con este soporte, preferentemente en forma de lo que se denomina perlas, en donde el soporte posee una afinidad mayor para leucocitos infectados, activados o defectuosos en comparación con leucocitos que no exhiben estas características. De manera alternativa, se utilizan también fieltros o tejidos para la separación extracorporal de filtros leucocitarios. Por ejemplo, para la separación de leucocitos a partir de una conserva de sangre para transfusiones (tal como un concentrado de eritrocitos o de plaquetas), se utilizan productos basados en fieltros, en los cuales tiene lugar la separación celular principalmente por filtración mecánica a través de dicho fieltro. Para la transfusión, se filtran típicamente lotes de 500 ml de sangre en un plazo menor de media hora. El proceso se lleva a cabo con ayuda de la fuerza de gravedad en un único paso y no en la circulación. Para poder utilizar un filtro celular en la circulación extracorporal, debe ser posible filtrar aproximadamente 1 a 6 l de sangre, impulsados por una bomba, durante algunas horas. Para ello, están disponibles en el comercio fieltros de polipropileno con una carcasa cilíndrica, con una conexión de entrada en la zona de cabeza y una conexión de salida en el extremo opuesto a la zona de cabeza. Con el fieltro utilizado en este caso, los leucocitos quedan retenidos gracias a los efectos de la filtración y la adsorción. Lo mismo es válido para los dispositivos destinados a separar componentes de la sangre del documento EP 0 312 595, en el que se describe una carcasa cilíndrica rellena con fibras de algodón, con un elemento de entrada y un elemento de salida para la sangre. Las fibras de algodón son fibras cortadas que, según las figuras del documento EP 0 312 595, se encuentran dispuestas en dos capas formadas por agregados de fibras en orden aleatorio. Los componentes de la sangre tales como, por ejemplo, los glóbulos blancos o las plaquetas, quedan retenidos por exclusión de tamaño en los espacios intermedios entre las fibras de los agregados de fibra. Según el documento EP 1 230 940 se usa también un filtro para separar leucocitos de la sangre. El filtro puede ser un fieltro, un tejido o una membrana de fibras planas o huecas, de carácter poroso. La sangre que se debe tratar se hace circular a través del fieltro, el tejido o la membrana porosa. El material de filtro tiene un revestimiento de un polímero sintético hidrófilo. Este revestimiento permite el paso de trombocitos a través del filtro, con la separación simultánea de leucocitos por adsorción. 2 ES 2 369 630 T3 El documento WO 95/18665 da a conocer un filtro y un procedimiento para la separación de leucocitos y sustancias con potencial inactivador de virus a partir del plasma u otras fracciones sanguíneas. El filtro se basa en una red de fibras textiles. Sobre la red están unidos, de forma covalente, ligandos con alta afinidad por sustancias inactivadoras de virus o leucocitos. En este caso, se trata de un método selectivo, pero técnicamente muy costoso, puesto que los ligandos deben estar unidos a una matriz polímera de forma directa o a través de un enlazador. En el documento US 4.925.572 se describe un filtro por el que se hace circular un producto sanguíneo para separar los leucocitos, en el que, según su composición de elemento poroso, los leucocitos se separan tanto por adsorción como por filtración. El elemento poroso puede ser, preferentemente, un elemento formado por fibras, en donde estos elementos porosos pueden tener un diámetro de poro en el intervalo de aprox. 4 hasta aprox. 8 m. El elemento poroso para separar los leucocitos puede mostrar una modificación superficial con el fin de generar, de este modo, una determinada tensión superficial y, con ella, una buena capacidad de reticulación del elemento. El documento US 4.925.572 aspira a una separación de los leucocitos principalmente por adsorción. La retención de los leucocitos con este tipo de filtros se basa en un atrapamiento celular en fieltros de fibras, así como en una adsorción más o menos intensa de las células sobre la superficie de las fibras. En general, con este procedimiento, las diferentes células sanguíneas son sometidas a una fuerte sobrecarga mecánica, lo que puede conducir a una activación celular o, incluso, a la destrucción de las células sanguíneas. Un inconveniente esencial de los sistemas y procedimientos existentes radica en que los diferentes tipos de células no se pueden adsorber de manera dirigida o específica y en que, además de los monocitos y granulocitos, también se adsorben linfocitos, trombocitos y eritrocitos. Dependiendo de la indicación, esto puede no ser necesario o, incluso, perjudicial para el paciente. La adsorción de trombocitos constituye un caso especial. Tras su activación, los trombocitos desempeñan un papel central en la coagulación de la sangre. Para que durante la circulación extracorporal no se coagule la sangre, la coagulación se debe contrarrestar de manera medicamentosa por medio de la administración de heparina como anticoagulante. Si, a pesar del anticoagulante, se produce coagulación, la consecuencia es la obstrucción del filtro. Un inconveniente adicional de los filtros convencionales para leucocitos es la a menudo difícil manipulación antes de su aplicación clínica, por ejemplo en lo que se refiere a la ventilación. En la circulación extracorporal, las burbujas de aire representan un riesgo potencial para el paciente, por lo que es muy deseable evitarlas. Cuanto más sencilla... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para reducir el número de leucocitos en sangre por medio de un tratamiento in vitro de la sangre en una estructura consistente en una multiplicidad de fibras a base de polímeros orgánicos, en donde esta multiplicidad de fibras está contenida en una carcasa con un elemento de entrada y un elemento de salida, en la que la sangre se introduce en la carcasa a través del elemento de entrada, circula seguidamente por la carcasa, circulando la sangre a lo largo de las superficies exteriores de las fibras y, finalmente, abandona la carcasa a través del elemento de salida, caracterizado por que se utilizan fibras que con la circulación de la sangre a lo largo de su superficie exterior determinan una formación del producto activador del complemento C5a en una concentración de al menos 10 m por m 2 de superficie de fibras, y por que la disposición de las fibras exhibe un grado elevado de organización, entendiéndose por grado elevado de organización que una gran parte de las fibras están dispuestas de manera adyacente a lo largo de su dirección de extensión. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que las fibras determinan una formación en sangre del producto activador del complemento C5a en una concentración de al menos 75 g por m 2 de superficie de fibras. 3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado por que las fibras a base de polímeros orgánicos son fibras huecas, y por que la sangre circula a lo largo de la superficie exterior de las fibras huecas. 4. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que el número de fibras a base de polímeros orgánicos se encuentra dentro del intervalo de 2.000 hasta 20.000 fibras. 5. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que el diámetro de fibra de las fibras a base de polímeros orgánicos es de entre 0,05 mm y 2 mm. 6. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que la superficie específica de la estructura de las fibras a base de polímeros orgánicos se encuentra entre 0,1 y 100 cm 2 por ml de sangre a tratar. 7. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que las fibras a base de polímeros orgánicos están compuestas por celulosa regenerada, acetato de celulosa o celulosa modificada con grupos bencilo (bencilcelulosa). 8. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que las fibras a base de polímeros orgánicos están compuestas, esencialmente, de polietersulfona o polisulfona. 9. Procedimiento según la reivindicación 7 u 8, caracterizado por que la estructura de la multiplicidad de fibras contiene, adicionalmente, también fibras de tereftalato de polietileno. 10. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado por que el grado de relleno de la carcasa con fibras se encuentra dentro del intervalo de 10% hasta 70%. 11. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado por que el tiempo de permanencia de la sangre en la carcasa es de 0,5 min hasta 5 min. 12. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado por que la velocidad de flujo lineal con la que circula la sangre a través de la carcasa es de entre 5 y 30 cm/min. 13. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado por que las fibras a base de polímeros orgánicos están presentes en forma de haces de fibras con fibras esencialmente paralelas. 14. Procedimiento según una o varias de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado por que las fibras a base de polímeros orgánicos están dispuestas en una o múltiples capas, y por que las fibras dentro de una capa se disponen de forma esencialmente paralela. 15. Dispositivo para la reducción de leucocitos de la sangre, que comprende una multiplicidad de fibras a base de polímeros orgánicos en una carcasa con un elemento de entrada y un elemento de salida, en donde las fibras tienen incluidos al menos uno de sus extremos en una masa de relleno fijada a la cara interior de la carcasa, de manera que alrededor de las fibras se forma un espacio exterior a través del que circula la sangre, caracterizado por que la disposición de las fibras exhibe un grado elevado de organización, en donde por grado elevado de organización se entiende que una gran parte de las fibras están dispuestas de modo adyacente a lo largo de su dirección de extensión, y por que las fibras a base de polímeros orgánicos determinan una formación del producto activador del complemento C5a en una concentración de al menos 10 g por m 2 de superficie de fibras. ES 2 369 630 T3 11 ES 2 369 630 T3 12 ES 2 369 630 T3 13 ES 2 369 630 T3 14 ES 2 369 630 T3 ES 2 369 630 T3 16 ES 2 369 630 T3 17 ES 2 369 630 T3 18 ES 2 369 630 T3 19