LA INVENCION SE REFIERE A UN METODO DE TRATAMIENTO DE CANCERES GASTROINTESTINALES,

DEPENDIENTE DE LOS PRECURSORES HORMONALES AMIDADOS GASTRINA-17 (G-17) Y G-17 PROLONGADA CON GLICINA. DICHO METODO CONSISTE EN ADMINISTRAR AL PACIENTE UN INMUNOGENO DE ANTIGASTRINA-17, INDUCTOR DE ANTICUERPOS QUE SE UNEN Y NEUTRALIZAN LA G-17 AMIDADA Y PROLONGADA CON GLICINA

Antecedentes de la invención

La hormona gastrina madura se produce en dos formas moleculares que se nombran en relación con el número de aminoácidos en el péptido, es decir tetratriacontagastrina (G34) y heptadecagastrina (G17). En las células productoras de gastrina, estas hormonas gastrina se procesan después de la traducción a partir de una molécula precursora común denominada “preprogastrina”, que contiene un péptido señal. El péptido señal “pre” se elimina en el retículo endoplásmico de la célula, lo que da como resultado el péptido “progastrina”, que, a su vez, se procesa adicionalmente en la célula para dar las gastrinas maduras G34 y G17 antes de su secreción a la corriente sanguínea (Dickinson 1991). (Las citas completas de las referencias mencionadas en el presente documento se proporcionan en la sección Referencias anterior a las Reivindicaciones). Las formas maduras de G34 y G17 están, las dos, amidadas (NH2) en su extremo carboxi terminal. Se ha dilucidado que hay múltiples formas de G17 resultantes del procesamiento diferencial de la molécula precursora, cada una de las cuales puede tener actividades biológicas diferentes (Dickinson 1995 y Ciccotosto y col. 1995). Actualmente, la hormona gastrina es un factor de crecimiento bien reconocido para los adenocarcinomas colorrectales humanos (véase Watson y col. 1993, para una revisión). Los pacientes con cáncer colorrectal presentan niveles plasmáticos elevados de gastrina total, y, en particular, se han detectado mayores cantidades del precursor de la hormona, progastrina, en muchos tumores colorrectales usando antisuero frente a gastrina (Ciccotosto y col. 1995).

En general, en tumores como los presentes en el cáncer de colon dependiente de gastrina, las células cancerosas pierden la capacidad de procesar prohormonas hasta el final debido a los defectos en las vías reguladoras de la secreción de hormonas. Esto conduce a la producción y secreción de diferentes formas moleculares de la hormona. Las células de carcinoma de colon no procesan de forma eficiente la progastrina y, por tanto, producen principalmente gastrinas incompletas o aberrantes, lo que da lugar a menos conversión del precursor de la gastrina en los péptidos maduros (Dickinson 1993 y Rehfeld y col. 1993). El incremento de los niveles de gastrina en los tumores colorrectales se atribuye, en parte, a la expresión aberrante del gen de la gastrina en las células de tumores colorrectales (Hoosein y col. 1990, Baldwin y col. 1992 y Finley y col. 1993). Se han identificado péptidos similares a la gastrina en dichas células (Hoosein y col. 1988, Watson y col. 1991 y Finley y col. 1993) y se confirmó que eran especies precursoras de la gastrina (Van-Solinge y col. 1993 y Nemeth y col. 1993).

La G17 asociada con el suero tiene el potencial de estimular el crecimiento de tumores colorrectales de un modo endocrino mediado por los receptores de CCKB/gastrina (Watson y col. 1993). La gastrina-17 parece estar particularmente involucrada en la estimulación del crecimiento de adenocarcinomas colorrectales humanos debido a una posible afinidad mayor por los receptores de gastrina/colecistoquinina (CCK) B sobre las células tumorales, con respecto a la otra especie de hormona gastrina (Rehfeld, J.F. 1972). Se ha descubierto que los receptores de CCKB/gastrina se expresan en una forma de alta afinidad sobre el 56,7% de los tumores colorrectales primarios humanos (Upp y col. 1989). Se ha postulado que también puede existir un potencial bucle autocrino debido a la producción endógena de los péptidos precursores de gastrina por parte de dichos tumores (Van-Solinge y col. 1993 y Nemeth y col. 1993), dado que recientemente se ha demostrado que la molécula precursora de la gastrina, gastrina 17 extendida con glicina (G17-Gly) estimulaba el crecimiento de una línea de células tumorales gastrointestinales. Se ha demostrado que los efectos tróficos de la G17-Gly sobre los tumores están mediados por un receptor distinto al receptor de CCKB/gastrina y se ha postulado que un bucle de crecimiento autocrino, que posiblemente implique a los precursores de la gastrina, está involucrado en la proliferación de tumores gastrointestinales (Seva y col. 1994).

Los tratamientos disponibles para los tumores estimulados o inducidos por la gastrina y para los tumores que producen gastrina consisten en, principalmente, la resección quirúrgica del tejido canceroso. Con frecuencia, este enfoque no tiene éxito; en muchos casos, no pueden localizarse los tumores o están en puntos anatómicos inoperables. En la mayoría de los casos, estos tumores no responden bien a los regímenes de radio o quimioterapia, y se necesitan nuevos tratamientos para complementar los presentes procedimientos.

Se han descrito numerosos antagonistas del receptor de CCKB/gastrina de alta afinidad, tales como L-365,260 (Bock y col. 1989) y CI-988 (Hughes y col. 1990), que se ha demostrado que neutralizan de forma eficaz los efectos de la gastrina exógena sobre el crecimiento del tumor gastrointestinal tanto in vitro como in vivo (Watson y col. y Romani y col., 1994). No obstante, los antagonistas carecen de especificidad, ya que bloquean las acciones de todos los ligandos potenciales del receptor, como la gastrina-34 (G34) y la CCK. Además, los receptores celulares que reconocen y se unen al precursor de la gastrina, G17-Gly, no se unen a todos los inhibidores analizados (Seva y col. 1994). Por tanto, si un receptor distinto está implicado en la cascada de crecimiento autocrina, los antagonistas de la gastrina pueden ser útiles para bloquear este mecanismo de estimulación del crecimiento tumoral.

Un procedimiento terapéutico de neutralizar inmunológicamente de forma selectiva la actividad biológica de la hormona gastrina proporcionaría un medio eficaz de controlar o prevenir los cambios patológicos resultantes del exceso de producción de gastrina.

Las patentes de EE.UU. números 5.023.077 y 5.468.494 divulgan composiciones inmunógenas útiles para controlar los niveles de G17 y de G34 en un paciente a través de la generación de anticuerpos anti-gastrina y el uso de dichas composiciones para el tratamiento de úlceras gástricas y duodenales y tipos de cáncer inducidos por gastrina..

La composición inmunógena de la patente de EE.UU. 5.023.077 para inmunización activa toma la forma de un péptido conjugado que comprende

(1) un fragmento de gastrina-17 que consiste en los primeros n aminoácidos N-terminales, en el que n es de 4 a 12, especialmente de 4 a 8,

(2) un vehículo inmunógeno, preferentemente el toxoide diftérico, y, opcionalmente

(3) un péptido espaciador unido al extremo C terminal del fragmento a través del cual el fragmento de gastrina 17 está conjugado al vehículo. El espaciador puede ser, por ejemplo, Lys Arg Pro Pro Pro Pro Lys, proporcionando las lisinas entrecruzamiento.

La patente de EE.UU. anterior menciona anticuerpos del fragmento definido anteriormente para inmunización pasiva.

La patente europea EP-B 380,230 es similar.

La patente de EE.UU.5.468.494 se refiere a dos péptidos conjugados específicos del tipo anterior en los que n es 9 y el péptido está conjugado al vehículo a través de un espaciador Ser Ser Pro Pro Pro Pro Cys o Arg Pro Pro Pro Pro Cys.

Watson, SA y coI., Anti-Gastrin antibodies raised by Gastrimmune inhibit growth of the human colorectal tumor AP5, Int. J. Cancer, 61: 233-240, 1995, describen la producción de antisuero en conejos contra gastroinmune, un inmunógeno construido a partir de la porción N-terminal de la G17 humana conjugada con el toxoide diftérico y que este antisuero bloqueaba el crecimiento basal in vitro de la línea celular de tumores colorrectales humanos AP5.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona el uso de un inmunógeno anti-gastrina-17 en la fabricación de una formulación para tratar tumores gastrointestinales de mamífero dependientes de gastrina-17 extendida con glicina, en el que:

el inmunógeno comprende un péptido amino-terminal de gastrina-17 conjugado con un vehículo inmunógeno mediante un péptido espaciador, en el que el péptido amino-terminal de la gastrina-17 comprende los aminoácidos 1 a 9 de la gastrina-17 y los aminoácidos 1 a 9 son la secuencia pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu; y el inmunógeno induce un título suficiente de anticuerpos anti-gastrina 17 para neutralizar la gastrina-17 amidada y la gastrina-17 extendida con glicina.

También se proporciona el uso de un anticuerpo anti-gastrina-17 en la fabricación de un medicamento...

1. Uso de un inmunógeno anti-gastrina-17 en la fabricación de una formulación para tratar tumores gastrointestinales de mamífero dependientes de gastrina-17 extendida con glicina, en el que:

el inmunógeno comprende un péptido amino-terminal de gastrina-17 conjugado con un vehículo inmunógeno mediante un péptido espaciador, en el que el péptido amino-terminal de la gastrina-17 comprende los aminoácidos 1 a 9 de la gastrina-17 y los aminoácidos 1 a 9 son la secuencia pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu; y el inmunógeno induce suficiente título de anticuerpos anti-gastrina 17 para neutralizar la gastrina17 amidada y la gastrina 17 extendida con glicina.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el transportador inmunógeno es la toxina diftérica.

3. Uso de un anticuerpo anti-gastrina-17 en la fabricación de un medicamento para tratar tumores gastrointestinales de mamífero dependientes de gastrina-17 extendida con glicina, en el que el anticuerpo neutraliza la gastrina-17 amidada y la gastrina-17 extendida con glicina.

4. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el tumor gastrointestinal es un tumor colorrectal.

5. Un inmunógeno anti-gastrina-17 para usar en el tratamiento de tumores gastrointestinales de mamífero dependientes de gastrina-17 extendida con glicina, en el que:

el inmunógeno comprende un péptido amino-terminal de gastrina-17 conjugado con un vehículo inmunógeno mediante un péptido espaciador, en el que el péptido amino-terminal de la gastrina-17 comprende los aminoácidos 1 a 9 de la gastrina-17 y los aminoácidos 1 a 9 son la secuencia pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu; y el inmunógeno induce suficiente título de anticuerpos anti-gastrina 17 para neutralizar gastrina-17 amidada y gastrina 17 extendida con glicina.

6. El inmunógeno de la reivindicación 5, en el que el transportador inmunógeno es la toxina diftérica.

7. El inmunógeno de la reivindicación 5 o de la reivindicación 6, en el que el tumor gastrointestinal es un tumor colorrectal.

8. Un anticuerpo anti-gastrina-17 para usar en el tratamiento de tumores gastrointestinales de mamífero dependientes de gastrina-17 extendida con glicina, en el que el anticuerpo neutraliza la gastrina-17 amidada y la gastrina-17 extendida con glicina.

9. El anticuerpo de la reivindicación 8, en el que el tumor gastrointestinal es un tumor colorrectal.