PREPARACIÓN DE AGENTES DIAGNÓSTICOS CONTENIENDO CÁPSULAS DE ÁCIDO HIALURÓNICO.

Un proceso de preparación de microcápsulas, el proceso comprendiendo atomizar una solución o dispersión de al menos un material para formación de pared en un portador líquido dentro de un gas para obtener microcápsulas por evaporación de dicho portador líquido,

en donde el material para formación de pared comprende ácido hialurónico

La presente invención se refiere a la preparación de agentes de diagnóstico que comprenden microcápsulas huecas para mejorar la imaginología por ultrasonido.

El hecho que puedan usarse burbujas de aire en el cuerpo para ecocardiografía ha sido conocido hace algún tiempo. Los líquidos conteniendo burbujas pueden inyectarse en el torrente sanguíneo para este propósito (véase Ophir 5 et al (1980) "Ultrasonic Imaging" 2, 67-77, quien estabilizó las burbujas en una membrana de colágeno, las patentes de los EE.UU. Nº 4 446 442 (Schering) y EP-A-131 540 (Schering)), y las patentes de los EE.UU. Nº 4 718 433, Nº 4 774 958 y Nº 4 844 882 revelan el uso de burbujas preparadas para aplicación del ultrasonido a una solución de albúmina. Sin embargo, la distribución del tamaño de burbujas, aparentemente, es ingobernable y las burbujas desaparecen cuando se someten a la presión que se experimenta en el ventrículo izquierdo (Shapiro et a! (1990) J. Am. Coll. Cardiology, 16(7), 10 1603-1607).

La patente europea EP-A-52575 revela, para el mismo propósito, partículas sólidas que tienen gas entrado en éstas, siendo el gas liberado de las partículas en el torrente sanguíneo.

La patente europea EP 458 745 (Sintetica) revela un proceso para preparar microbalones, llenos de aire o de gas, por polimerización interfacial de polímeros sintéticos como poliláctidos y poliglicólidos. El documento WO 91/12823 15 (Delta Biotechnology) revela un proceso similar que usa albúmina. Wheatley et al (1990) Biomaterials 11, 713-717 revela la gelación ionotrópica de alginato para formar microburbujas de unos 30 µm de diámetro. El documento WO 91/09629 revela los liposomas para su uso como agentes de contraste en ultrasonido. Nuestra solicitud pendiente de patente PCT/GB92/00643 (publicada desde la fecha de prioridad de esta solicitud en el documento WO 92/18164) revela un método de secado por spray que brinda microesferas particularmente ventajosas, que presentan la resistencia mecánica 20 requerida y una distribución de tamaños estrechamente controlada. Se revelan otros procesos de secado por spray, para propósitos diferentes, en Przyborowski et al (1982 Eur. J. Nucl. Med. 7, 71-72), a saber, la preparación de microesferas de albúmina de suero humana (HSA, por las siglas de su expresión inglesa, Human Serum Albumin) para el marcado por radiactividad y su uso posterior en imaginología por centelleo del pulmón.

El artículo de Przyborowski et. al. se refiere a dos descubrimientos más tempranos de métodos para obtener 25 partículas de albúmina para centigrafía pulmonar. Aldrich & Johnston (1974) Int. J. Appl. Rad. Isot. 25, 15-18 descubrieron el uso de un disco giratorio para generar partículas de 3-70 µm de diámetro, las que se desnaturalizan luego en aceite caliente. El aceite se retiró y se marcaron las partículas con radioisótopos. En Raju et al (1978) Isotopenpraxis 14(2), 57-61 se usó la misma técnica de disco giratorio, pero se desnaturalizó la albúmina simplemente calentando las partículas. En ningún caso se mencionó que las microesferas fueran huecas, y las partículas preparadas 30 no fueron convenientes para ecocardiografía.

Nosotros ahora hemos desarrollado nuestro anterior proceso de secado por spray (documento WO 92/18I64) y se adaptó para producir productos aún más ventajosos.

Un aspecto de la presente invención proporciona un proceso que comprende atomizar una solución o dispersión en un portador líquido de un material para formación de pared en un gas a fin de obtener microcápsulas en 35 evaporación del portador líquido.

Preferentemente, el producto obtenido en dicho proceso se somete a un segundo paso de reducir la solubilidad en agua por lo menos la del exterior de dichas microesferas.

Dichos dos pasos pueden llevarse a cabo como un solo proceso, o el producto intermedio del primer paso puede recogerse y puede separadamente tratarse en el segundo paso. Estas dos posibilidades se refieren más adelante 40 como los procesos de uno y de dos pasos.

Deben escogerse el material para la formación de una pared y las condiciones del proceso para que el producto sea lo suficientemente no tóxico y no inmunogénico en las condiciones de uso, lo que dependerá claramente de la dosis administrada y la duración del tratamiento. El material para la formación de una pared puede ser un derivado del almidón, un polímero sintético como poliglutamato de tert-butil-oxicarbonil-metilo (patente de los EE.UU. Nº 4 888 398), o 45 un polisacárido como polidextrosa o almidón.

Generalmente, el material para formación de la pared (en adición al ácido hialurónico) puede seleccionarse entre polímeros fisiológicamente compatibles, mayoritariamente hidrófilos, biodegradables. Entre tales polímeros se pueden citar polisacáridos de baja solubilidad en agua, poliláctidos y poliglicólidos y sus copolímeros, copolímeros de láctidos y lactonas como є-caprolactona, δ-valerolactona, polipéptidos, y proteínas como gelatina, colágeno, globulinas y 50 albúminas. Otros polímeros convenientes incluyen poli-(orto)ésteres (véanse, por ejemplo, las patentes de los EE.UU. Nº A-4.093.709; EE.UU. A-4.131.648; EE.UU. A-4.138.344; EE.UU. A-4.180.646; el ácido poliláctico y poliglicólico y sus copolímeros, por ejemplo DEXON (véase J. Heller (1980) Biomaterials 1, 51; poli(DL-lactido-co-δ-caprolactona), poli(DL-lactido-co-δ-valerolactona), poli(DL-lactido-co-g-butirolactona), poli(alquil-ciano-acrilatos); poliamidas, poli-hidroxi-butirato; poli-di-oxanona; poli-β-aminocetonas (Polymer 23 (1982), 1693); polifosfacenos (Science 193 (1976), 1214); y 55 polianhídridos. Pueden encontrarse referencias sobre polímeros biodegradables en Langer et al (1983) Macromol. Chem. Phys. C23, 61-125. También pueden usarse Poli(aminoácidos) como ácidos poliglutámico y poliaspártico, así como sus derivados, es decir, los ésteres parciales con alcoholes o glicoles inferiores. Un ejemplo útil de tales polímeros es el poli-

(t,butil-glutamato). También son posibles copolímeros con otros aminoácidos como metionina, leucina, valina, prolina, glicina, alamina, etc. Recientemente se han informado algunos nuevos derivados de ácidos poliglutámico y poliaspártico con una biodegradabilidad controlada (véanse los documentos WO 87/03891; la patente de los EE.UU. Nº 4.888.398 y EP 130 935 incorporados en la presente solicitud por referencia). Estos polímeros (y copolímeros con otros aminoácidos) tienen fórmulas del siguiente tipo: 5

–(NH-CHA-CO)x(NH-CHX-CO)y

en la que X designa la cadena lateral de un residuo de amino-ácido y A es un grupo de fórmula

- (CH2)nCOOR1R2OCOR (II)

siendo R1 y R2 un átomo de H o alquilos inferiores, y siendo R alquilo o arilo; ó R y R1 se interconectan juntos por un miembro vinculante sustituido o no sustituido para proporcionar anillos de 5 ó 6 miembros. 10

El grupo A también puede representar grupos de fórmulas:

- (CH2)nCOO-CHR1COOR (I)

y

–(CH2)nCO(NH-CHX-CO)mNH–CH(COOH)-(CH2)nCOOH (III)

y los correspondientes anhídridos. En todas estas fórmulas n, m y p son números enteros bajos (no excediendo 5) así 15 como x e y también son enteros, seleccionados por tener pesos moleculares no inferiores a 5000.

Los polímeros mencionados anteriormente son convenientes para confeccionar las microesferas según la presente invención y, dependiendo de la naturaleza de los sustituyentes R, R1, R2 y X, pueden controlarse las propiedades de la pared, por ejemplo, resistencia, elasticidad y biodegradabilidad. Por ejemplo, X puede ser metilo (alanina), isopropilo (valina), isobutilo (leucina e isoleucina) o bencilo (fenil-alanina). 20

Preferentemente, el material para la formación de la pared es proteináceo. Por ejemplo, puede ser colágeno, gelatina o albúmina (suero), en cada caso preferentemente de origen humano (es decir, derivado de humanos o correspondiendo a la estructura de la proteína humana). Más preferentemente, es la albúmina de suero humana (HA, por las siglas de su expresión inglesa, Human Protein) derivada de donaciones de sangre o de la fermentación por microorganismos (incluyendo las líneas celulares) que se han transformado o transfectado para expresar la HA. 25

Las técnicas para expresar la HA (cuyo término incluye análogos y fragmentos de albúmina humana, por ejemplo, aquellos de la patente europea... [Seguir leyendo]

1. Un proceso de preparación de microcápsulas, el proceso comprendiendo atomizar una solución o dispersión de al menos un material para formación de pared en un portador líquido dentro de un gas para obtener microcápsulas por evaporación de dicho portador líquido, en donde el material para formación de pared comprende ácido hialurónico. 5

2. Microcápsulas de las cuales al menos 90% son de 1,0 a 10,0 en diámetro, las paredes de las microcápsulas comrendiendo ácido hialurónico.

3. Una preparación estéril, libre de pirógenos, de microcápsulas según la Reivindicación 2 o microcápsulas hechas por el proceso de la Reivindicación 1.

4. Microcápsulas según la Reivindicación 2 o hechas por el proceso de la Reivindicación 1 para uso en 10 medicina.

5. Microcápsulas según la Reivindicación 2 o hechas por el proceso de la Reivindicación 1 en la preparación de un agente diagnóstico de contraste.

6. Un método de generar una imagen para subsiguiente inspección, comprendiendo (a) inyectar en el cuerpo de un mamífero microcápsulas según la Reivindicación 2 o hechas por el proceso de la Reivindicación 1, (b) 15 someter el mamífero o parte del mismo a una radiación ultrasónica adecuada y (c) detectar radiación ultrasónica reflejada, transmitida, resonada o modulada en frecuencia por dichas microcápsulas.