Una perhidrolasa aislada que es al menos un 70% idéntica a la perhidrolasa de M.

smegmatis que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona procedimientos y composiciones que comprenden al menos una enzima perhidrolasa para limpieza y otras aplicaciones. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la presente invención proporciona procedimientos y composiciones para la generación de perácidos. La presente invención encuentra un uso particular en aplicaciones que implican limpieza, blanqueamiento y desinfección.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los detergentes y otras composiciones limpiadoras incluyen típicamente una combinación compleja de ingredientes activos. Por ejemplo, la mayoría de productos de limpieza incluyen un sistema tensioactivo, enzimas para limpiar, agentes blanqueantes, agentes de refuerzo, supresores de jabonaduras, agentes de suspensión de la suciedad, agentes de liberación de la suciedad, abrillantadores ópticos, agentes suavizantes, dispersantes, compuestos inhibidores de la transferencia de tinte, abrasivos, bactericidas y perfumes. A pesar de la complejidad de los actuales detergentes, hay muchas manchas que son difíciles de eliminar completamente. Además, a menudo se produce la formación de residuos, que da como resultado decoloración (por ejemplo, amarilleamiento) y una estética reducida debido a una limpieza incompleta. Estos problemas se combinan con el uso aumentado de bajas temperaturas de lavado (por ejemplo, agua fría) y ciclos más cortos de lavado. Además, muchas manchas están compuestas por mezclas complejas de material fibroso, que incorporan principalmente carbohidratos y derivados de carbohidratos, fibra y componentes de la pared celular (por ejemplo, material vegetal, madera, suciedad basada en lodo/arcilla y fruta). Estas manchas presentan retos difíciles a la formulación y uso de composiciones limpiadoras.

Además, las prendas coloreadas tienden a desgastarse y a mostrar empeoramientos del aspecto. Una parte de esta pérdida de color es debida a la abrasión en el proceso de lavandería, particularmente en las lavadoras y secadoras automáticas. Además, la pérdida de resistencia a la tracción de la tela parece ser un resultado inevitable de la acción mecánica y química debido al uso, desgaste y/o lavado y secado. Por tanto, es necesario un medio para lavar eficiente y eficazmente prendas coloreadas de modo que se minimicen estos empeoramientos del aspecto.

Son bien conocidas en la técnica las composiciones limpiadoras que comprenden esterasas, lipasas y cutinasas. Sin embargo, estas enzimas tienen una relación de perhidrólisis a hidrólisis muy baja. Esto da como resultado la conversión de la mayoría del sustrato éster en ácido, en lugar del más deseable perácido. Esto es un grave inconveniente, puesto que las consideraciones de espacio y coste de la fórmula hacen factible incluir solo una cantidad limitada de sustrato.

El documento US-A-5.352.594 describe procedimientos de preparación y selección de enzimas esterasas que tienen una relación de perhidrólisis a hidrólisis mejorada.

El documento EP-A-0375102 describe un sistema de perhidrólisis enzimática y una enzima que es hidrolítica y perhidrolíticamente activa.

El documento WO 2004/058961 describe variantes de subtilisina que tienen actividad perhidrolasa mejorada.

En suma, a pesar de las mejoras de las capacidades de las composiciones limpiadoras, sigue habiendo la necesidad en la técnica de detergentes que eliminen manchas, mantengan el color y aspecto de la tela y eviten la transferencia de tinte. Además, sigue habiendo la necesidad de composiciones detergentes y/o de cuidado de la tela que proporcionen y/o restauren la resistencia a la tracción, así como que proporcionen propiedades antiarrugas, antiapelotonamiento y/o antiencogimiento a la tela, así como que proporcionen un control de la estática, suavidad a la tela, que mantengan el aspecto de color deseado y propiedades y beneficios antidesgaste de la tela. En particular, sigue habiendo la necesidad de la inclusión de composiciones que sean capaces de eliminar los componentes coloreados de las manchas, que a menudo permanecen unidos a la tela que se está lavando automáticamente. Además, sigue habiendo la necesidad de procedimientos y composiciones mejorados adecuados para el blanqueamiento textil. [0009] Además de en el campo de la limpieza de telas y prendas, el blanqueamiento se usa comúnmente en la industria de la pulpa y el papel. Antes de la producción de papel, se trata típicamente la pulpa para eliminar los contaminantes coloreados indeseables. Esto proporciona una pulpa que es adecuada para la producción de papel de mayor calidad que la pulpa que no se trata para eliminar los contaminantes coloreados y otros componentes indeseables presentes en la pulpa. Por ejemplo, en la industria del reciclaje del papel, es necesaria la eliminación de tinta. Aunque los procedimientos estándares son adecuados para destintar papel con tintas basadas en aceite o agua, el uso aumentado de tintas electrostáticas ha vuelto problemático el destintado, ya que estas tintas son mucho más difíciles de eliminar. Hay disponibles diversos procedimientos para destintar papel, incluyendo el uso de enzimas (véase, por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 5.370.770). Sin embargo, sigue habiendo la necesidad en la técnica de procedimientos eficientes y económicos para el tratamiento de pulpa para la producción de producto de papel (reciclado y nuevo).

El blanqueamiento se usa comúnmente también en el mercado del cuidado personal (por ejemplo, blanqueantes dentales, decolorantes del cabello, etc.). Aunque los productos decolorantes del cuidado personal han mejorado con los años, sigue habiendo la necesidad de procedimientos de decoloración suaves, fáciles de usar y económicos para este escenario.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona procedimientos y composiciones que comprenden al menos una enzima perhidrolasa como se define en la reivindicación 1 para limpieza y otras aplicaciones. En algunas realizaciones particularmente preferidas, la presente invención proporciona procedimientos y composiciones para la generación de perácidos. La presente invención encuentra un uso particular en aplicaciones que implican limpieza, blanqueamiento y desinfección.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona composiciones que comprenden al menos una perhidrolasa como se define en la reivindicación 1, en las que la que perhidrolasa exhibe una relación de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de 1.

La presente invención proporciona también perhidrolasas aisladas como se definen en la reivindicación 1, en las que las perhidrolasas exhiben una relación de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de 1. En algunas realizaciones preferidas, la perhidrolasa es perhidrolasa de M. smegmatis. La perhidrolasa es al menos un 70% idéntica a la perhidrolasa de M. smegmatis. En realizaciones adicionales, la perhidrolasa es al menos aproximadamente un 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 99% idéntica a la perhidrolasa de M. smegmatis. En realizaciones preferidas adicionales, la perhidrolasa comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2. En algunas realizaciones preferidas, las perhidrolasas tienen reactividad inmunitaria cruzada con la perhidrolasa de M. smegmatis. En otras realizaciones adicionales, la perhidrolasa es al menos una porción de la perhidrolasa de M. smegmatis, en la que la perhidrolasa tiene una relación de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de 1. En realizaciones alternativas, la perhidrolasa es un homólogo estructural de la perhidrolasa de M. smegmatis, en que el sitio activo es homólogo de al menos un aminoácido seleccionado del grupo constituido por S11, D192 y H195 de la perhidrolasa de M. smegmatis.

La presente invención proporciona también variantes de perhidrolasa aisladas como se definen en la reivindicación que tienen secuencias de aminoácidos que comprenden al menos una modificación de un aminoácido realizada en una posición equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2. En algunas realizaciones, se realiza al menos una modificación en una posición aminoacídica equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2, en la que el aminoácido modificado se selecciona del grupo constituido por Cys7, Asp10, Ser11, Leu12, Thr13, Trp14, Trp16, Pro24, Thr25, Leu53, Ser54, Ala55, Thr64, Asp65, Arg67, Cys77, Thr91, Asn94, Asp95, Tyr99, Val125, Pyro138, Leu140, Pro146, Pro148, Trp149,... [Seguir leyendo]

1. Una perhidrolasa aislada que es al menos un 70% idéntica a la perhidrolasa de M. smegmatis que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2.

2. La perhidrolasa de la reivindicación 1, en la que la perhidrolasa es al menos un 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2.

3. La perhidrolasa de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la perhidrolasa es al menos un 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 2.

4. La perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicha perhidrolasa comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2.

5. La perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicha perhidrolasa exhibe una relación de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de 1, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis e hidrólisis como se describen en el ejemplo 2.

6. La perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que:

(a) dicha perhidrolasa es al menos una porción de dicha perhidrolasa de M. smegmatis, en la que dicha perhidrolasa tiene una relación de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de 1, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis e hidrólisis como se describen en el ejemplo 2; o

(b) dicha perhidrolasa es un homólogo estructural de dicha perhidrolasa de M. smegmatis, donde el sitio activo es homólogo de al menos un aminoácido seleccionado del grupo constituido por S11, D192 y H195 de la perhidrolasa de M. smegmatis.

7. Una variante de perhidrolasa aislada de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la variante de perhidrolasa tiene una secuencia de aminoácidos que comprende al menos una modificación de un aminoácido realizada en una posición equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2.

8. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que la al menos una mutación comprende una modificación en una posición equivalente a Ser54 en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2.

9. La perhidrolasa de la reivindicación 8, en la que la mutación es la sustitución por una valina en la posición equivalente a Ser54.

10. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que:

(i) dicha al menos una modificación se realiza en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicho aminoácido modificado se selecciona del grupo constituido por Cys7, Asp10, Ser11, Leu12, Thr13, Trp14, Trp16, Pro24, Thr25, Leu53, Ser54, Ala55, Thr64, Asp65, Arg67, Cys77, The41,, Asn94, Asp95, Tyr99, Va1125, Pro138, Leu140, Pro146, Pro148, Trp149, Phe150, Ile153, Phe154, Thr159, Thr186, Ile192, Ile194 y Phe196; o

(ii) dicha modificación comprende a menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por M1, K3, R4, 15, L6, C7, D10, S11, L12, T13, W 14, W16, G15, V17, P 18, V19, D21, G22, A23, P24, T25, E26, R27, F28, A29, P30, D31, V32, R33, W34, T35, G36, L38, Q40, Q41, D45, L42, G43, A44, F46, E47, V48, 49, E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T57, T58, N59, I60, D61, D62, P63, T64, D65, P66, R67, L68, N69, G70, A71, S72, Y73, S76, C77, L78, A79, T80, L82, P83, L84, D85, L86, V87, N94, D95, T96, K97, Y99F100, R101, R102, P104, L105, D106, I107, A108, L109, G110, M111, S112, V113, L114, V115, T116, Q117, V118, L119, T120, S121, A122, G124, V125, G126, T127, T128, Y129, P146, P148, W149, F150, I153, F154, I194 y F196.

11. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio en la hidrólisis de perácido en comparación con la perhidrolasa natural.

12. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 11, en la que dicho cambio en la hidrólisis de perácido

es una reducción.

13. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 11, en la que dicho cambio en la hidrólisis de perácido es un aumento.

14. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,1 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, y en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por R4, L12, G15, P18, R27, W34L38, A44, E51, G52, L53, S54, T58, R67, L68, S72, A79, T80, D85, L86, V87, N94, K97, R101, V118, L119, G124, G126 e I194.

15. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,2 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por R4, 15, D10, L12, W14, G15, P18, V19, T25, R27, W34, L38, A44, I49, E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T58, N59, D62, T64, D65, R67, L68, N69, S72, S76, C77, A79, T80, D85, L86, V87, N94, K97, R101, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, V118, L119, A122, G124, G126, T127, Y129, W149 e I194.

16. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,3 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por R4, 15, D10, L12, W14, G15, L12, P18, V19, G22, A23, T25, E26, R27, W34, G36, L38, Q41, L42, G43, A44, 49, E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T57, N59, T58, D62, T64, D65, R67, L68, N69, G70, S72, Y73, S76, C77, A79, T80, L82, P83, D85, L86, V87, N94, T96, K97, Y99, F100, R101, R102, P104, L109, G110, M111, L114, V118, L119, A122, G124, V125, G126, T127, Y129, W149, F154 e I194.

17. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,4 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por R4,15, L6, D10, S11, L12, W14, G15, W16, P18, V19, G22, A23, T25, E26, R27, F28, W34, T35, G36, L38, Q41, L42, G43, A44, D45, E47, 49, E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T57, T58, N59, T58, I60, D62, T64, D65, R67, L68, N69, G70, S72, Y73, S76, C77, A79, T80, L82, P83, D85, L86, V87, N94, P66, T96, K97, Y99, F100, R101, R102, P104, I107, L109, G110, M111, S112, L114, V118, L119, S121, A122, G124, V125, G126, T127, Y129, W149, F150, F154, I194 y F196.

18. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,5 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A122, A23, A29, A55, D45, D62, D65, E26, E50, F 150, F46, G110, G124, G43, L109, L119, L42, L68, L78, L82, L84, N59, P66, R101, R27, R4, R67, S112, S54, S76, T116, T120, T25, V125, V48, W149, Y73, A44, A79, D85, E51, G124, G126, G15, G52, I194, K97, L119, L12, L38, L53, L68, L86, N94, P18, R101, R27, R4, R67, S54, S72, T58, T80, V118, V87, W34, R4, I5, D10, L12, W14, V19, T25, W34, 149, E50, E51, L53, S54, A55, R56, N59, D62, T64, D65, R67,L68, N69, S76, C77, T80, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, L119, W149, Y129, A122, G126, T127, A23, A55, A79, D65, D85, E26, F154, G110, G124, G126, G22, G36, G43, G52, G70, I49, K97, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L68, L86, P104, P83, Q41, R102, R56, R67, S54, T57, V118, V125, W14, W149, Y129, Y73, A122,

A23, A79, D45, D65, D85, E26, E47, E51, F150, F196, F28, G110, G124, G36, G43, G52, G70, I107, 15, I60, L109, L119, L53, L6, L68, L82, M111, P104, P66, R102, R67, S11, S112, S121, S54, S72, T25, T35, T57, T58, V118, V125, V19, W149, W16, Y99, G190, V191, G193, T197, N201, D203, L208, A209, V212, L215 y L216.

19. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,6 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A122, A23, A29, A55, D45, D62, D65, E26, E50, F1S0, F46, G110, G124, G43, L109, L119, L42, L68, L78, L82, L84, N59, P66, R101, R27, R4, R67, S112, S54, S76, T116, T120, T25, V12S, V48, W149, Y73, A44, A79, D85, E51, G124, G126, G15, G52, I194, K97, L119, L12, L38, L53, L68, L86, N94, P18, R101, R27, R4, R67, S54, S72, T58, T80, V118, V87, W34, R4, I5, D10, L12, W14, V19, T25, W34, 149, E50, E51, L53, S54, A55, R56, N59, D62, T64, D65, R67, L68, N69, S76, C77, T80, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, L119, W149, Y129, A122, G126, T127, A23, A55, A79, D65, D85, E26, F154, G110, G124, G126, G22, G36, G43, G52, G70, I49, K97, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L68, L86, P104, P83, Q41, R102, R56, R67, S54, T57, V118, V125, W14, W149, Y129, Y73, A122, A23, A79, D45, D65, D85, E26, E47, E51, F150, F196, F28, G110, G124, G36, G43, G52, G70, I107, I5, I60, L109, L119, L53, L6, L68, L82, M111, P104, P66, R102, R67, S11, S112, S121, S54, S72, T25, T35, T57, T58, V118, V25, V19, W149, W16, A108, A122, A23, A29, A79, C7, D106, D21, D45, D62, D65, D85, E50, F150, F28, G124, G126, G22, G36, G52, I107, I194, K97, L105, L109, L114, L119, L38, L68, L78, L82, L84, M111, N69, N94, P104, P63, P66, R102, R27, S11, S112, S54, S72, T16, T120, T127, T13, T25, T57, T80, T96, V113, V125, V19, W16, Y129, Y73, Y99, G190, V191, G193, T197, N201, D203, L208, A209, V212, L215 y L216.

20. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,7 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A122, A23, A29, A55, D45, D62, D65, E26, E50, F150, F46, G110, G124, G43, L109, L119, L42, L68, L78, L82, L84, N59, P66, R101, R27, R4, R67, S112, S54, S76, T116, T120, T25, V125, V48, W149, Y73, A44, A79, D85, E51, G124, G126, G15, GS2, I194, K97, L119, L12, L38, L53, L68, L86, N94, P18, R101, R27, R4, R67, S54, S72, T58, T80, V118, V87, W34, R4, I5, D10, L12, W14, V19, T25, W34,149, E50, E51, L53, S54, A55, R56, N59, D62, T64, D65, R67, L68, N69, S76, C77, T80, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, L119, W149, Y129, A122, G126, T127, A23, A55, A79, D65, D85, E26, F154, G110, G124, G126, G22, G36, G43, G52, G70,149, K97, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L68, L86, P104, P83, Q41, R102, R56, R67, S54, T57, V118, V125, W14, W149, Y129, Y73, A122, A23, A79, D45, D65, D85, E26, E47, E51, F150, F196, F28, G110, G124, G36, G43, G52, G70, I107, I5, I60, L109, L119, L53, L6, L68, L82, M111, P104, P66, R102, R67, S11, S112, S121, S54, S72, T25, T35, T57, T58, V118, V125, V19, W149, W16, A108, A122, A23, A29, A79, C7, D106, D21, D45, D62, D65, D85, E50, F150, F28, G124, G126, G22, G36, G52, I107, I194, K97, L105, L109, L114, L119, L38, L68, L78, L82, L84, M111, N69, N94, P104, P63, P66, R102, R27, S11, S112, S54, S72, T116, T120, T127, T13, T25, T57, T80, T96, V113, A122, A29, A71, A79, C7, D106, D21, D61, D65, D85, E47, E50, F150, F196, F28, F46, G124, G126, G15, G36, G70, 149, I5, I60, LI05, L109, L12, L38, L42, L53, L84, L86, M111, N59, P146, P24, P66, Q41, R102, R27, R56, S112, S121, S54, S72, T116, T120, T127, T128, T13, T57, T64, V125, V17, V19, W14, W149, W16, Y129, Y73, Y99, G190, V191, G193, T197, N201, D203, L208, A209, V212, L215 y L216.

21. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,8 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A122, A23, A29, A55, D45, D62, D65, E26, E50, F150, F46, G110, G124, G43, L109, L119, L42, L68, L78, L82, L84, N59, P66, R101, R27, R4, R67, S112, S54, S76, T116, T120, T25, V125, V48, W149, Y73, A44, A79, D85, E51, G124, G126, G15, G52, I194, K97, L119, L12, L38, L53, L68, L86, N94, P18, R101, R27, R4, R67, S54, S72, T58, T80, V118, V87, W34, R4, I5, D10, L12, W14, V19, T25, W34, I49, E50, E51, L53, S54, A55, R56, N59, D62, T64, D65, R67, L68, N69, S76, C77, T80, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, L119, W149, Y129, A122, G126, T127, A23, A55, A79, D65, D85, E26, F154, G110, G124, G126, G22, G36, G43, G52, G70, I49, K97, L109, L114, L119, L12,

L38, L42, L53, L68, L86, P104, P83, Q41, R102, R56, R67, S54, T57, V118, V125, W14, W149, Y129, Y73, A122, A23, A79, D45, D65, D85, E26, E47, E51, F150, F196, F28, G110, G124, G36, G43, G52, G70, I107, I5, I60, L109, L119, L53, L6, L68, L82, M111, P104, P66, R102, R67, S11, S112, S121, S54, S72, T25, T35, T57, T58, V118, V125, V19, W149, W16, A108, A122, A23, A29, A79, C7, D106, D21, D45, D62, D65, D85, E50, F150, F28, G124, G126, G22, G36, G52, I107, I194, K97, L105, L109, L114, L119, L38, L68, L78, L82, L84, M111, N69, N94, P104, P63, P66, R102, R27, S11, S112, S54, S72, T116, T120, T127, T13, T25, T57, T80, T96, V113, A122, A29, A71, A79, C7, D106, D21, D61, D65, D85, E47, E50, F150, F196, F28, F46, G124, G126, G15, G36, G70, I49, I5, I60, L105, L109, L12, L38, L42, L53, L84, L86, M111, N59, P146, P24, P66, Q41, R102, R27, R56, S112, S121, S54, S72, T116, T120, T127, T128, T13, T57, T64, V125, V17, V19, W14, W149, W16, Y129, Y99, A108, A122, A23, A29, A44, A55, A71, A79, C77, D45, D61, D65, D85, D95, E47, E51, F150, F196, F46, G110, G126, G36, G43, G52, I107, I194, I49, I5, I60, I89, L114, L42, L53, L68, L78, L84, M111, N59, N94, P146, P24, P30, P63, P66, P83, Q117, R101, R4, S112, S121, S72, T116, T120, T127, T13, T57, T96, V113, V125, V17, V19, V32, V87, W149, Y129, Y73, G190, V191, G193, T 197, N201, D203, L208, A209, V212, L215 y L216.

22. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de aproximadamente 1,5 o mayor, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A122, A23, A29, A55, D45, D62, D65, E26, E50, F150, F46, G110, G124, G43, L109, L119, L42, L68, L78, L82, L84, N59, P66, R101, R27, R4, R67, S112, S54, S76, T116, T120, T25, V125, V48, W149, Y73, A44, A79, D85, E51, G124, G126, G15, G52, I194, K97, L119, L12, L38, L53, L68, L86, N94, P18, R101, R27, R4, R67, S54, S72, T58, T80, V118, V87, W34, R4, I5, D10, L12, W14, V19, T25, W34, I49, E50, E51, L53, S54, A55, R56, N59, D62, T64, D65, R67, L68, N69, S76, C77, T80, L82, P83, L86, V87, N94, T96, F100, R101, L109, M111, L114, L119, W149, Y129, A122, G126, T127, A23, A55, A79, D65, D85, E26, F154, G110, G124, G126, G22, G36, G43, G52, G70, I49, K97, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L68, L86, P104, P83, Q41, R102, R56, R67, S54, T57, V118, V125, W14, W149, Y129, Y73, A122, A23, A79, D45, D65, D85, E26, E47, E51, F150, F196, F28, G110, G124, G36, G43, G52, G70, I107, I5, I60, L109, L119, L53, L6, L68, L82, M111, P104, P66, R102, R67, S11, S112, S121, S54, S72, T25, T35, T57, T58, V118, V125, V19, W149, W16, A108, A122, A23, A29, A79, C7, D106, D21, D45, D62, D65, D85, E50, F150, F28, G124, G126, G22, G36, G52, I107, I194, K97, L105, L109, L114, L119, L38, L68, L78, L82, L84, M111, N69, N94, P104, P63, P66, R102, R27, S11, S112, S54, S72, T116, T120, T127, T13, T25, T57, T80, T96, V113, A122, A29, A71, A79, C7, D106, D21, D61, D65, D85, E47, E50, F150, F196, F28, F46, G124, G126, G15, G36, G70, I49, I5, I60, L105, L109, L12, L38, L42, L53, L84, L86, M111, N59, P146, P24, P66, Q41, R102, R27, R56, S112, S121, S54, S72, T116, T120, T127, T128, T13, T57, T64, V125, V17, V19, W14, W149, W16, Y129, Y99, A108, A122, A23, A29, A44, A55, A71, A79, C77, D45, D61, D65, D85, D95, E47, E51, F150, F196, F46, G110, G126, G36, G43, G52, I107, I194, I49, I5, I60, I89, L114, L42, L53, L68, L78, L84, M111, N59, N94, P146, P24, P30, P63, P66, P83, Q117, R101, R4, S112, S121, S72, T116, T120, T127, T13, T57, T96, V113, V125, V17, V19, V32, V87, W149, Y129 y Y73, Y99, A108, A44, C7, D10, D106, D31, D61, D85, E26, E51, F100, F28, F46, G110, G22, G36, G43, G52, G70, I107, I153, I49, I5, I89, K3, L105, L53, L6, L78, L86, M1, N69, P104, P146, P18, P24, P30, P83, Q117, Q40, Q41, R102, R27, R33, R4, S121, S72, S76, T120, T128, T13, T35, T80, T96, V115, V118, V32V48, V87, W34, G190, V191, G193, T197, E198, A199, R202, D203, G205, V206, A209, E210, Q211, S214 y L215.

23. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe una relación de hidrólisis de perácido de entre aproximadamente 1,2 y aproximadamente 1,5, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que la relación se determina usando ensayos de hidrólisis de perácido como se describen en el ejemplo 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, C7, D106, D31, D61, D85, E26, E50, E51, F100, F150, F28, F46, G110, G126, G22, G70, I107, K3, L105, L42, L6, L78, M111, N59, N69, P104, P146, P148, P18, P30, P63, Q117, Q40, Q41, R102, R27, R33, R4, S54, S76, T116, T120, T128, T64, T80, T96, V113, V115, V118, W34 e Y73.

24. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio en la perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de al menos aproximadamente 1,2, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del

grupo constituido por C7, D10, L12, G 15, P18, V19, G22, T25, E26, R27, F28, A29, P30, D31, G36, Q40, Q41, L42, G43, A44, D45, F46, E47, I49, E51, L53, S54, A55, T57, D61, P63, T64, D65, P66, R67, L68, N69, A71, S72, Y73, S76, L78, A79, T80, L82, P83, D85, L86, D95, K97, R101, T103, P104, L105, D106, I107, L109, M111, V113, Q117, V118, S121, G124, V125, G126, T127, P148, F150, I153, F154 y F196.

25. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio en la perhidrólisis tal que la relación de perhidrólis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,8 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A108, A122, A23, A29, A44, A55, A71, A79, C7, C77, D10, D106, D21, D45, D61, D62, D65, D85, E26, E47, E50, E51, F100, F150, F154, F196, F28, F46, G110, G124, G126, G15, G22, G36, G52, G70, I107, I153, I194, I49, I5, I60, I89, K3, K97, L105, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L6, L68, L78, L82, L84, K86, M1, M111, N59, N94, P146, P18, P24, P30, P66, P83, Q40, Q41, R101, R102, R27, R33, R4, R56, R67, S11, S112, S54, S72, S76, T103, T116, T120, T127, T128, T13, T25, T35, T57, T64, T80, T96, V113, V115, V118, V125, V17, V19, V32, V48, V87, W 13, W149, W16, W34, Y129, Y73 y Y99.

26. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A108, A122, A23, A29, A44, A55, A71, A79, C7, C77, D10, D106, D21, D31, D45, D61, D62, D65, D85, E26, E47, E50, E51, F100, F150, F154, F196, F28, F46, G110, G124, G126, G15, G22, G36, G43, G52, G70, I107, I153, I194, I49, I5, I60, I89, K3, K97, L105, L109, L114, L119, L12, L38, L42, L53, L6, L68, L78, L82, L84, L86, M1, M111, N59, N69, N94, P104, P146, P148, P18, P24, P30, P63, P66, P83, Q117, Q40, Q41, R101, R102, R27, R33, R4, R56, R67, S11, S112, S121, S54, S72, S76, T103, T116, T120, T127, T128, T13, T25, T35, T57, T58, T64, T80, T96, V113, V115, V118, V125, V17, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, Y129, Y73 y Y99.

27. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural está entre aproximadamente 1,2 y aproximadamente 2, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por C7, D10, L12, G15, P18, V19, G22, T25, E26, R27, F28, A29, P30, D31, G36, Q40, Q41, L42, G43, A44, D45, F46, E47, I49, E51, L53, S54, A55, T57, D61, P63, T64, D65, P66, R67, L68, N69, A71, S72, Y73, S76, L78, A79, T80, L82, P83, D85, L86, D95, K97, R101, T103, P104, L105, D106, I107, L109, M111, V113, Q117, V118, S121, G124, V125, G126, T127, P148, F150, I153, F154, F196, G190, E198, A199, R202, D203, V206, A209, E210, Q211 y V212.

28. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural está entre aproximadamente 2 y aproximadamente 2,5, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A44, C7, D10, D85, D95, E26, E47, I107, L12, L42, P104, P148, S54, Q40, Q117, D203, V206, E210.

29. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural está entre aproximadamente 2,5 y aproximadamente 3, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A44, C7, I107, K97, L12, L78, P104, Q40 y V125.

30. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un

cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural está entre aproximadamente 3,0 y aproximadamente 5, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por D10, D85, L53, L78 y S54.

31. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,1 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16 y W34.

32. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,2 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, y en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V 19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W 149, W16, W34, Y129 y Y73.

33. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,3 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, 189, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34 y Y129.

34. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,4 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W 16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, I89, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34, Y129, A55, C77, E51, F100, F150, F154, G110, G126, G22, I194, I89, K97, L114, L84, N59, P146, P83, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S54, S72, S76, T120, T127, T13, T25, T57, T96, V118, V125, V19 y V87.

35. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa

natural es de aproximadamente 0,5 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, I89, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34, Y129, A55, C77, E51, F100, F150, F154, G110, G126, G22, I194, I89, K97, L114, L84, N59, P146, P83, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S54, S72, S76, T120, T127, T13, T25, T57, T96, V118, V125, V19, V87, A23, A55, D10, D23, E26, E50, E51, F150, G110, G126, G15, G36, I107, I49, I5, K97, L109 ,L119, L12, L38, L6, L68, L84, L86, M111, N59, P146, P24, Q40, R101, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S72, S76, T127, T25, T35, T80, T96, V115, V32, V87, W34 e Y129.

36. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,6 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, I89, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34, Y129, A55, C77, E51, F100, F150, F154, G110, G126, G22, I194, I89, K97, L114, L84, N59, P146, P83, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S54, S72, S76, T120, T127, T13, T25, T57, T96, V118, V125, V19, V87, A23, A55, D10, D23, E26, E50, E51, F150, G110, G126, G15, G36, I107, I49, I5, K97, L109 ,L119, L12 L38, L6, L68, L84, L86, M111, N59, P146, P24, Q40, R101, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S72, S76, T127, T25, T35, T80, T96, V115, V32, V87, W34, Y129, A108, A44, A55, D21, D62, F150, g126, G36, G52, I107, I5, 189, L109, L114, L119, L12, L42, L53, L6, L68, L78, L84, P146, P24, P66, P83, R27, S112, S72, S76, T120, T127, T13, T35, T57, T58, T80, T96, V115, V118, V32, V48, V87, W149 e Y73.

37. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,7 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, y en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, I89, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34, Y129, A55, C77, E51, F100, F150, F154, G110, G126, G22, I194, I89, K97, L114, L84, N59, P146, P83, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S54, S72, S76, T120, T127, T13, T25, T57, T96, V118, V125, V19, V87, A23, A55, D10, D23, E26, E50, E51, F150, G110, G126, G15, G36, I107, I49, I5, K97, L109 ,L119, L12 L38, L6, L68, L84, L86, M111, N59, P146, P24, Q40, R101, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S72, S76, T127, T25, T35, T80, T96, V115, V32, V87, W34, Y129, A108, A44, A55, D21, D62, F150, g126, G36, G52, I107, I5, I89, L109, L114, L119, L12, L42, L53, L6, L68, L78, L84, P146, P24, P66, P83, R27, S112, S72, S76, T120, T127, T13, T35, T57, T58, T80, T96, V115,V118, V32, V48, V87, W149,Y73, A122, A23, A29, A71, A79, C7, D61, D62, D85, E26, E51, F100, F28, F46, G110, G126, G52, G70, I107, I49, I5, I60, I89, L109, L114, L12, L38, L68, L82, L86, M111, N59, N94, P83, R102, R33, R4, S112, S72, S76, T103, T116, T128, T25, T35, T57, T58, T64, V19, V32, V48, V87, Y129, Y73 y Y99.

38. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un

cambio de perhidrólisis tal que la relación de perhidrólisis de variante de perhidrolasa a perhidrólisis de perhidrolasa natural es de aproximadamente 0,8 o menos, en la que la relación se determina usando ensayos de perhidrólisis como se describen en el ejemplo 2, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A23, A55, D10, D62, F150, F196, F28, G110, G52, G70, I107, I194, I5, K97, L12, L53, L6, L86, N94, P83, R102, R4, R56, S11, 854. T120, T13, T25, T80, V115, V19, V32, V48, V87, W14, W149, W16, W34, A108, A23, A55, D62, F150, F154, G110, G22, G52, G70, I194, K3, K97, L105, L12, L38, L53, L68, L84, N59, N94, P146, P18, R102, R33, R4, R56, S112, S54, T127, T13, T35, T64, T80, T96, V118, V48, W149, W16, W34, Y129, Y73, A122, A23, A44, C7, D10, D62, F150, G110, G22, G70, I153, I194, I60, I89, K97, L114, L119, L12, L38, L6, L68, L82, M111, N94, P146, Q41, R102, R27, R4, R56, S11, S54, T120, T13, T25, T35, T80, V48, W14, W149, W16, W34, Y129, A55, C77, E51, F100, F150, F154, G110, G126, G22, I194, I89, K97, L114, L84, N59, P146, P83, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S54, S72, S76, T120, T127, T13, T25, T57, T96, V118, V125, V19, V87, A23, A55, D10, D23, E26, E50, E51, F150, G110, G126, G15, G36, I107, I49, I5, K97, L109 ,L119, L12 L38, L6, L68, L84, L86, M111, N59, P146, P24, Q40, R101, R102, R27, R33, R4, R56, S112, S72, S76, T127, T25, T35, T80, T96, V115, V32, V87, W34, Y129, A108, A44, A55, D21, D62, F150, g126, G36, G52, I107, I5, I89, L109, L114, L119, L12, L42, L53, L6, L68, L78, L84, P146, P24, P66, P83, R27, S112, S72, S76, T120, T127, T13, T35, T57, T58, T80, T96, V115,V118, V32, V48, V87, W149,Y73, A122, A23, A29, A71, A79, C7, D61, D62, D85, E26, E51, F100, F28, F46, G110, G126, G52, G70, I107, I49, I5, I60, I89, L109, L114, L12, L38, L68, L82, L86, M111, N59, N94, P83, R102, R33, R4, S112, S72, S76, T103, T116, T128, T25, T35, T57, T58, T64, V19, V32, V48, V87, Y129, Y73, Y99, A108, A122, A29, A55, C77, D10, D106, D45, D61, D62, D65, D85, E47, E50, F100, F150, F28, F46, G110, G124, G126, G15, G36, I153, I194, I5, I60, I89, K3, K97, L10S, L109, L114, L119, L38, L42, L68, L84, L86, M1, N59, P24, P30, P83, R101, R27, R4, R56, S112, S54, S76, T103, T116, T120, T127, T128, T13, T35, T64, V113, V17, V19, V32, V48, V87, Y129, Y73 e Y99.

39. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha variante exhibe una mayor actividad de perhidrólisis y una actividad de hidrólisis de perácido reducida en comparación con la perhidrolasa natural.

40. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha perhidrolasa exhibe una relación de actividad de perhidrólisis de al menos aproximadamente 1,2 y una relación de actividad de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,8 o menos, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que las relaciones se determinan usando ensayos de perhidrólisis e hidrólisis de perácido como se describen en los ejemplos 2 y 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A29, A44, A55, A71, A79, C7, D10, D106, D31, D85, E26, E47, F150, F154, F196, F28, G124, G126, G36, G43, I153, L109, L42, L53, L109, L42, L53, L109, L42, L53, L68, L82, L86, M111, N69, P104, P148, P18, P63, P66, P83, Q117, Q40, R101, R67, S54, S121, S72, S76, T25, T64, V115 y V19.

41. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 7, en la que dicha perhidrolasa exhibe una relación de actividad de perhidrólisis de al menos aproximadamente 1,2, una relación de actividad de hidrólisis de perácido de aproximadamente 0,8 o menos y una relación de concentración de proteína de al menos 0,5, en comparación con la perhidrolasa natural, en la que las relaciones se determinan usando ensayos de perhidrólisis e hidrólisis de perácido como se describen en los ejemplos 2 y 3, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A29, A44, A71, A79, C7, D85, E26, E47, E51, F150, F154, F196, F28, G124, G126, G36, I153, L109, L12, L53, L68, L82, M111, N69, P104, P148, P18, P63, P66, P83, Q117, Q40, R101, R67, S121, S54, S72, S76, T25, T64, V125 y V19.

42. Una variante de perhidrolasa de la reivindicación 1, en la que dicha variante de perhidrolasa exhibe un aumento de la expresión de dicha variante de perhidrolasa en comparación con la expresión de perhidrolasa natural, en la que dicha modificación comprende al menos una sustitución en una posición del aminoácido equivalente a una posición en la perhidrolasa de M. smegmatis que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:2 y en la que dicha al menos una sustitución se selecciona del grupo constituido por A2, I5, C7, F8, S11, L12, T13, W14, W16, V17, P18, V19, E20, G22, A23, P24, T25, A29, P30, V32, T35, G36, V37, A39, F46, E47, S54, A55, R56, T58, I60, D61, D62, P63, T64, P66, R67, L68, N69, G70, S72, Y73, L74, P75, S76, C77, L78, A79, T80, L82, P83, L84, L86, 89, T93, T96, K97, A98, Y99, F100, R101, R102, T103, P104, L105, D106, I107, A108, L109, G110, S112, V113, L114, V115, T116, Q117, V118, L119, T120, S121, A122, G124, V125, G126, T127, T128, Y129, P130,

P132, K133, L135, V136, S138, P141, L142, A143, M145, H147, W149, F150, Q151, I153, G157, Q159, T161, T162, L164, A165, R166, V167, Y168, A170, L171, A172, M175, K176, P178, A182, G183, S184, V185, I186, T188, I194, F196, V191, N201, L208, A209, Q211, Q213, S214, L215 y L216.

43. Una perhidrolasa aislada de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la perhidrolasa comprende al menos tres restos seleccionados del grupo constituido por L6, W14, W34, L38, R56, D62, L74, L78, H81, P83, M90, K97, G110, L114, L135, F180, G205, S11, D192 y H195.

44. Una perhidrolasa aislada de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que tiene actividad perhidrolasa, en la que dicha perhidrolasa está en forma de un multímero en disolución.

45. La perhidrolasa de la reivindicación 44, en la que dicha proteína está en forma de un multímero en disolución y dicha proteína se selecciona del grupo constituido por perhidrolasa de M. smegmatis, homólogos de perhidrolasa de M. smegmatis y variantes de perhidrolasa de M. smegmatis.

46. La proteína aislada de la reivindicación 44 o la reivindicación 45, en la que:

(i) dicha proteína es una perhidrolasa que comprende un dímero; o

(ii) dicha proteína es una perhidrolasa que comprende un octámero; o

(iii) dicha proteína se selecciona del grupo constituido por serina hidrolasas modificadas y cisteína hidrolasas modificadas, en la que dichas serina hidrolasas modificadas y cisteína hidrolasas modificadas comprenden una actividad perhidrolasa aumentada en comparación con las serina hidrolasas no modificadas o cisteína hidrolasas no modificadas.

47. Una perhidrolasa aislada de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que tiene actividad perhidrolasa, en la que dicha perhidrolasa comprende al menos un motivo seleccionado del grupo constituido por GDSL-GRTT, GDSL-ARTT, GDSN-GRTT, GDSNARTT y SDSL-GRTT.

48. Una variante de perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicha variante de perhidrolasa tiene una especificidad de sustrato alterada en comparación con la perhidrolasa de M. smegmatis natural.

49. Una variante de perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicha variante de perhidrolasa tiene un pI alterado en comparación con la perhidrolasa de M. smegmatis natural.

50. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 48, en la que dicha variante tiene actividad de caproato de para-nitrofenilo (PNC) alterada, en comparación con la perhidrolasa de M. smegmatis natural.

51. La variante de perhidrolasa de la reivindicación 49, en la que:

(a) dicha variante de perhidrolasa comprende al menos una mutación cargada positivamente; o

(b) dicha variante de perhidrolasa comprende al menos una mutación cargada negativamente.

52. Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, o una secuencia complementaria de la misma.

53. Un vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 52.

54. Una célula hospedadora transformada con el vector de la reivindicación 53.

55. Un procedimiento de producción de una enzima que tiene actividad perhidrolasa que comprende:

(a) transformar una célula hospedadora con un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica perhidrolasa que es al menos un 70% idéntico al polinucleótido de la SEQ ID NO:1;

(b) cultivar dicha célula hospedadora transformada en condiciones adecuadas para que dicha célula hospedadora produzca dicha perhidrolasa; y

(c) recuperar dicha perhidrolasa.

56. El procedimiento de la reivindicación 55, en el que dicha célula hospedadora se selecciona del grupo constituido por especies de Streptomyces, Pantoea, Escherichia y Bacillus.

57. Una composición que comprende una perhidrolasa aislada de la reivindicaciones 1 a 50.

58. La composición de la reivindicación 57, que es una composición limpiadora, una composición blanqueante o una composición desinfectante.

59. Una composición limpiadora que comprende: a) al menos un 0,0001% en peso de dicha perhidrolasa de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a

50; b) una molécula que comprende un resto éster; y c) opcionalmente, un ingrediente auxiliar.

60. Una composición limpiadora de la reivindicación 59, que comprende: a) al menos un 0,001% en peso de dicha perhidrolasa; b) un material seleccionado del grupo constituido por una fuente de peroxígeno, peróxido de hidrógeno

y mezclas de los mismos, estando seleccionada dicha fuente de peroxígeno del grupo constituido por:

i. una sal de perácido;

ii. un peroxiácido orgánico;

iii. complejo de urea-peróxido de hidrógeno;

iv. una mezcla de carbohidrato y carbohidrato oxidasa, y

v. mezclas de los mismos; c) de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50% en peso de una molécula que comprende un

resto éster; y d) opcionalmente, un ingrediente auxiliar.

61. Una composición limpiadora según la reivindicación 60, comprendiendo dicha composición un ingrediente auxiliar.

62. Una composición limpiadora según la reivindicación 60 o 61, en la que dicho ingrediente auxiliar se selecciona del grupo constituido por tensioactivos, agentes de refuerzo, agentes quelantes, agentes inhibidores de la transferencia de tinte, auxiliares de deposición, dispersantes, enzimas y estabilizadores enzimáticos, materiales catalíticos, activadores de blanqueamiento, reforzadores de blanqueamiento, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de eliminación de suciedad de arcilla/antirredeposición, abrillantadores, supresores de jabonaduras, tinte, perfumes, agentes elastificantes de la estructura, suavizantes de la tela, vehículos, hidrotropos, auxiliares de procesamiento, pigmentos y mezclas de los mismos.

63. Una composición limpiadora según la reivindicación 62, en la que: a) dicha perhidrolasa exhibe una relación molar de perhidrólisis a hidrólisis que es mayor de aproximadamente 0,1;

b) dicha sal de perácido se selecciona del grupo constituido por perborato de metales alcalinos, percarbonato de metales alcalinos, perfosfatos de metales alcalinos, persulfatos de metales alcalinos y mezclas de los mismos;

c) dicho carbohidrato se selecciona del grupo constituido por monocarbohidratos, dicarbohidratos, tricarbohidratos, oligocarbohidratos y mezclas de los mismos;

d) dicha carbohidrato oxidasa se selecciona del grupo constituido por aldosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.9), galactosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.9), celobiosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.25), piranosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.10), sorbosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.11), hexosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.5), glucosa oxidasa (clasificación IUPAC EC1.1.3.4) y mezclas de las mismas; y

e) dicha molécula que comprende un resto éster tiene la fórmula: R1Ox [(R2)m (R3)n]p

(i) en la que R1 es un resto seleccionado del grupo constituido por H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo y heteroarilo sustituidos o no sustituidos;

(ii) cada R2 es un resto alcoxilato;

(iii) R3 es un resto formador de éster que tiene la fórmula: R4CO- en la que R4 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo y heteroarilo;

(iv) x es 1 cuando R1 es H; cuando R1 no es H, x es un entero que es menor o igual al número de carbonos de R1;

(v) p es un entero que es menor o igual a x;

(vi) m es un entero de 0 a 50; y

(vii) n es al menos 1.

64. La composición limpiadora de la reivindicación 63, en la que: a) R1 es un resto alquilo o heteroalquilo C2-C32 sustituido o no sustituido; b) cada R2 es independientemente un resto etoxilato o propoxilato; y c) m es un entero de 1 a 12.

65. La composición limpiadora de la reivindicación 64, en la que R3 es un resto formador de éster que tiene la fórmula: R4CO- en la que R4 es: a) un resto alquilo, alquenilo o alquinilo sustituido o no sustituido que comprende de 1 a 22 átomos de carbono; o

b) un resto alquilo, alquilarilo, alquilheteroarilo o heteroarilo sustituido o no sustituido que comprende de 4 a 22 átomos de carbono.

66. La composición limpiadora de la reivindicación 63, en la que la molécula que comprende el resto éster tiene la fórmula: R1Ox[(R2)m(R3)n]p en la que:

a) R1 es H o un resto que comprende un resto amino primario, secundario, terciario o cuaternario, estando seleccionado dicho resto R1 que comprende un resto amino del grupo constituido por alquilo, heteroalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo y heteroarilo sustituidos o no sustituidos;

b) cada R2 es un resto alcoxilato; c) R3 es un resto formador de éster que tiene la fórmula: R4CO en la que R4 puede ser H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, alquilheteroarilo y heteroarilo sustituidos o no sustituidos; d) x es 1 cuando R1 es H; cuando R1 no es H, x es un entero que es menor o igual al número de

carbonos de R1; e) p es entero que es menor o igual a x f) m es un entero de 0 a 12; y g) n es al menos 1.

67. La composición limpiadora de la reivindicación 60, en la que dicha molécula que comprende un resto éster tiene un peso molecular medio ponderado menor de 600.000 Da.

68. La composición limpiadora de la reivindicación 67, en la que dicho ingrediente auxiliar se selecciona del grupo de tensioactivos, agentes de refuerzo, agentes quelantes, agentes inhibidores de la transferencia de tinte, auxiliares de deposición, dispersantes, enzimas y estabilizadores enzimáticos, materiales catalíticos, activadores de blanqueamiento, reforzadores de blanqueamiento, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de eliminación de suciedad de arcilla/antirredeposición, abrillantadores, supresores de jabonaduras, tintes, perfumes, agentes elastificantes de la estructura, suavizantes de la tela, vehículos, hidrotropos, auxiliares de procesamiento, pigmentos y mezclas de los mismos.

69. La composición blanqueante o desinfectante de la reivindicación 58, que comprende adicionalmente al menos una enzima o derivado de enzima adicional seleccionado del grupo constituido por proteasas, amilasas, lipasas, mananasas, pectinasas, cutinasas, oxidorreductasas, endoglucosidasas, lisozima, enzimas degradantes de la pared celular bacteriana, enzimas degradantes de la pared celular fúngica, hemicelulasas y celulasas.

70. La composición blanqueante o desinfectante según la reivindicación 58, en la que la composición comprende adicionalmente un éster y una fuente de peróxido de hidrógeno.

71. La composición blanqueante o desinfectante según la reivindicación 70, en la que el éster se selecciona del grupo constituido por: diacetato de propilenglicol, diacetato de etilenglicol y triacetina.

72. La composición blanqueante o desinfectante según la reivindicación 70, en la que la fuente de peróxido de hidrógeno comprende percarbonato de sodio.

73. Un procedimiento de desinfección y/o blanqueamiento de una superficie o artículo, comprendiendo el procedimiento poner en contacto dicha superficie o artículo con una perhidrolasa como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51, o con una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 58 y

70 a 72.

74. El procedimiento según la reivindicación 73, en el que la superficie o artículo se selecciona de

productos textiles, superficies duras, papel, pulpa, cabello, dientes, piel, dispositivos médicos, equipamientos 5 médicos, equipamientos industriales y fermentadores.

75. Uso de una perhidrolasa como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 51 de o una composición como se define en la reivindicación 57 para el control de biopelículas.

10 76. Un procedimiento de limpieza que comprende las etapas de: a) poner en contacto una superficie y/o artículo que comprende una tela con una composición limpiadora como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 58 a 68 y b) lavar y/o aclarar opcionalmente la superficie o material.