Composición que comprende amiloide P sérico (SAP) o una parte del mismo,

que se une a receptores Fcγ e inhibe la diferenciación de fibrocitos a partir de monocitos, para su uso en un método para el tratamiento o prevención de la fibrosis

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a la capacidad de SAP para suprimir la diferenciación de monocitos en fibrocitos. Por consiguiente, incluye composiciones y métodos para suprimir dicha diferenciación. Estas composiciones pueden usarseen un método útil en una diversidad de aplicaciones en las que es beneficiosa una formación disminuida de fibrocitos, tal como el tratamiento de enfermedades fibrosantes y el asma.

ANTECEDENTES

Fibrocitos

La inflamación es la respuesta coordinada a lesión o infección tisular. Los acontecimientos iniciadores están mediados por la liberación local de factores quimiotácticos, la activación de plaquetas, y el inicio de la coagulación y las vías del complemento. Estos acontecimientos estimulan el endotelio local, promoviendo la extravasación de neutrófilos ymonocitos. La segunda fase de la inflamación está caracterizada por el flujo al interior del tejido de las células del sistemainmune adaptativo, incluyendo linfocitos. La fase de resolución posterior, cuando tiene lugar la apoptosis de los leucocitos enexceso y la absorción por los macrófagos tisulares, también se caracteriza por la reparación del daño tisular por células estromáticas, tales como fibroblastos.

En la inflamación crónica, la resolución de las lesiones inflamatorias está alterada, con el mantenimiento de las células inflamatorias, hiperplasia de los fibroblastos, y destrucción final del tejido. Los mecanismos que conducen a estos acontecimientos son complejos, pero incluyen un reclutamiento, supervivencia y retención potenciados de las células yemigración alterada.

La fuente de fibroblastos responsables de reparar lesiones por heridas o en otras respuestas fibróticas es controvertida. La hipótesis convencional sugiere que los fibroblastos quiescentes locales migran al área afectada, producen proteínas de matriz extracelular, y promueven la contracción de la herida o fibrosis. Una hipótesis alternativa es que los precursores en circulación de los fibroblastos (llamados fibrocitos) presentes en la sangre migran a los sitios de lesión o fibrosis, donde se diferencian y media la reparación tisular y otras respuestas fibróticas.

Se sabe que los fibrocitos se diferencian a partir de una población precursora de monocitos sanguíneos periféricos CD14+. Los fibrocitos expresan marcadores tanto de células hematopoyéticas (CD45, MHC clase II, CD34) y célulasestromáticas (colágeno tipo I y III y fibronectina). Los fibrocitos maduros entran rápidamente en los sitios de lesión tisular donde secretan citoquinas inflamatorias. Los fibrocitos también son capaces de secretar proteínas de matriz extracelular, otras citoquinas y moléculas pro-angiogénicas, que pueden provocar la fibrosis.

Los mecanismos que inhiben la diferenciación de fibrocitos a partir de monocitos CD14+ en gran medida erandesconocidos antes de la presente invención. Sin embargo, el control de la diferenciación de los fibrocitos probablemente es importante en el control de muchas enfermedades y procesos. Los fibrocitos están asociados a una diversidad de procesos y enfermedades incluyendo esclerodermia, cicatrización queloide, artritis reumatoide, lupus, dermopatía fibrosante nefrogénica, y fibrosis pulmonar idiopática. Desempeñan una tarea en la formación de lesiones fibróticas después deinfección por Schistosoma japonicum en ratones y también están implicados en fibrosis asociada con enfermedades autoinmunes. Los fibrocitos también se han implicado en fibrosis patogénica asociada con daño por radiación, enfermedadde Lyme y fibrosis pulmonar. Los fibrocitos CD34+ también se han asociado con el remodelado estromático en pancreatitis yfibrosis estromática, mientras que la ausencia de dichos fibrocitos está asociada con tumores pancreáticos yadenocarcinomas. Adicionalmente existe fibrosis en pacientes con asma y posiblemente otras enfermedades pulmonares tales como enfermedad pulmonar obstructiva crónica cuando los fibrocitos experimentan diferenciación adicional en miofibroblastos.

Amiloide P sérico

Dado el amplio intervalo de procesos y enfermedades en los que los fibrocitos desempeñan una tarea, los mecanismos que regulan su diferenciación a partir de monocitos sanguíneos periféricos son de gran interés. Los aspectos de la presente invención se basan en el descubrimiento de que la diferenciación de los fibrocitos sanguíneos periféricos a partir de monocitos está suprimida por un factor d.el suero y el plasma. El fraccionamiento del plasma humano identificó estefactor como amiloide P sérico (SAP). SAP, un miembro de la familia de proteínas de la pentraxina que incluye la proteínareactiva C (CRP), se secreta por el hígado y circula en la sangre en forma de pentámeros estables. La tarea exacta de SAPaún no está clara, aunque parece desempeñar una tarea tanto en el inicio como en las fases de resolución de la respuesta inmune. El SAP se une a restos de azúcar en la superficie de bacterias lo que conduce a su opsonización y absorción. ElSAP también se une a ADN libre y la cromatina generada por células apoptóticas en la resolución de una respuesta inmune,evitando de este modo una respuesta inflamatoria secundaria. Las moléculas unidas por SAP se retiran de las áreasextracelulares debido a la capacidad de SAP de unirse a los tres receptores Fc clásicos (FcR), con una preferencia por FcRI (CD64) y FcRII (CD32). Después de la unión al receptor, la célula absorbe el SAP y cualquier molécula unida probablemente.

Los FcR son necesarios para unión de IgG a una amplia diversidad de células hematopoyéticas. Los monocitossanguíneos periféricos expresan tanto CD64 como CD32 (una subpoblación de monocitos expresa CD16), mientras que los macrófagos tisulares expresan los tres FcR clásicos. El agrupamiento de FcR en los mocitos por IgG, unidos a patógenos

o como parte de un complejo inmune, inicia una amplia diversidad de acontecimientos bioquímicos. Los acontecimientosiniciales después de la agregación del receptor incluyen la activación de una serie de proteína quinasas src. En monocitos,éstas incluyen lyn, hck y fgr, que fosforidan los restos de tirosina en el motivo ITAM de la cadena FcR- asociada con FcRI y FcRIII, o el motivo ITAM con el dominio citoplasmático de FcRII. Los ITAM fosforilados conducen a la unión de una segunda serie de quinasas src, incluyendo syk. Se ha demostrado que syk es vital para la fagocitosis de partículasrecubiertas por IgG. Sin embargo, la amplia distribución de syk en células no hematopoyéticas y la evidencia de que syk está implicada en la señalización por integrina y en receptores acoplados a proteína G, indica que esta molécula tiene muchas funciones.

**(Ver fórmula)**

Tanto SAP como CRP aumentan la fagocitosis y se unen a receptores Fcy en una diversidad de células. CRP seune con una elevada afinidad a FcRII (CD32), una afinidad inferior a FcRI (CD64), pero no se une a FcRIII (CD16). SAP se une a los tres receptores clásicos Fcy, con preferencia por FcRI y FcRII, particularmente FcRI. Aunque hayobservaciones conflictivas sobre la unión de CRP a FcyR, se ha demostrado que tanto SAP como CRP se unen a receptores Fc e inician los acontecimientos de señalización intracelular coherentes con el ligamiento de FcyR.

En suero sanguíneo humano, los hombres normalmente tienen aproximadamente 32 g/ml +/- 7 g/ml de SAP, siendo normal un intervalo de 12-50 g/ml. Las mujeres generalmente tienen 24 g/ml +/- 8 g/ml de SAP en suero sanguíneo, siendo normal un intervalo de 8-55 g/ml. En fluido cefalorraquídeo humano normalmente hay aproximadamente 12,8 g/ml de SAP en hombres y aproximadamente 8,5 g/ml en mujeres. Combinando los datos de hombre y mujeres, el nivel normal de SAP en suero humano es de 26 g/ml +/- 8 g/ml siendo normal un intervalo de 12-55 g/ml. (Los niveles séricos anteriores se expresan como la media +/- la desviación típica.)

IL-12

Otros aspectos de la presente invención se refieren a la capacidad recién descubierta de que IL-12 suprime la formación de fibrocitos por los monocitos. IL-12 se ha implicado previamente en la fibrosis y enfermedades fibrosantes, pero la mayoría de los estudios se han centrado en la tarea de IL-12 para promover la respuesta inmune Th1 o desencadenando la producción de interferón-. Los efectos directos... [Seguir leyendo]

1. Composición que comprende amiloide P sérico (SAP) o una parte del mismo, que se une a receptores Fc e inhibe la diferenciación de fibrocitos a partir de monocitos, para su uso en un método para el tratamiento o prevención de lafibrosis.

2. La composición de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente un componente adicional seleccionado entre 5 el grupo compuesto por: IL-12, laminina-I, agregados de IgG, IgG entrecruzada, y combinaciones de las mismas.

3. La composición de la reivindicación 1, en la que el SAP se proporciona a una concentración suficiente para elevar la concentración de SAP en las localizaciones diana hasta al menos aproximadamente 0,5 g/ml.

4. La composición de la reivindicación 1, donde la composición es para administración tópica.

5. La composición de la reivindicación 1, donde la composición es para administración por inyección.

10 6. La composición de la reivindicación 1, donde la composición es para administración por inhalación.

7. La composición de la reivindicación 1, en la que el SAP o parte del mismo incluye una o más secuencias seleccionadas entre KERVGEYSLYIGRHKVTPKVIEKFP (SEC.ID.Nº 1), ILSAYQGTPLPA (SEC.ID.Nº 2) y IRGYVIIKPLV(SEC.ID.Nº 3).

8. La composición de la reivindicación 1, en la que la fibrosis es el resultado de una afección o trastorno seleccionado

15 entre esclerodermia, asma, cicatrización queloide, artritis reumatoide, lupus, dermopatía fibrosante nefrogénica, lesiones fibróticas tales como las formadas después de infección con Schistosoma japonicum, enfermedades autoinmumes, fibrosispatogénica, enfermedad de Lyme, remodelado estromático en pancreatitis y fibrosis estromática, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis pulmonar, y combinaciones de las mismas.