FAGOS AISLADOS Y SU UTILIZACIÓN COMO DESINFECTANTE EN ALIMENTOS Y PARA LA HIGIENIZACIÓN DE UN ENTORNO DE FABRICACIÓN.

Aislado de fagos, con potencial lítico sustancial contra E. sakazakii seleccionado del grupo que consiste en CNCM I-3127,

CNCM I-3128, CNCM I-3129, CNCM I-3130, CNCM I- 3131, CNCM I-3132 y CNCM I-3133

Sector de la invención

La presente invención se refiere a fagos aislados que tienen una fuerte actividad lítica contra cepas de Enterobacter sakazakii y su utilización como agente antimicrobiano en productos alimenticios, en particular en formulaciones para niños y para la higienización de entornos de fabricación.

Antecedentes de la invención

Las enterobacterias representan una parte predominante de la “flora de recontaminación” de los productos de la leche realizados a base de leche pasteurizada. Su presencia indica frecuentemente una higienización inadecuada y/o construcción defectuosa de los equipos de proceso. Los miembros del género Enterobacter se encuentran frecuentemente en productos en seco, tales como leche en polvo.

Entre las enterobacterias, las E. sakazakii pueden provocar serias infecciones, especialmente entre individuos muy jóvenes. Han sido implicadas en una forma rara pero grave de meningitis neonatal entre neonatos y niños, habiéndose implicado como modo de transmisión formulaciones en seco para niños.

La fabricación aséptica de formulaciones en seco para niños no es factible porque los costes de fabricación serían demasiado elevados. Por lo tanto, los fabricantes se basan en la utilización de desinfectantes y zonas de trabajo higiénicas específicas durante el proceso para conseguir productos seguros. No obstante, cantidades reducidas de bacterias pueden crecer hasta un número considerable cuando una formulación reconstituída para niños no es consumida rápidamente y mantenida a temperatura ambiente. Éste puede hacer el producto potencialmente peligroso para el niño que lo consume.

En vista de las deficiencias de la técnica anterior, el problema de la presente invención consiste en dar a conocer un alimento, en particular productos basados en la leche, tales como formulaciones para niños, que pueden ser seguras incluso después de almacenamiento en condiciones que favorecen el crecimiento de E. sakazakii. Asimismo, la invención está destinada a desarrollar un agente seguro que pueda ser utilizado para la decontaminación de E. sakazakii en cualquier producto alimenticio y para la higienización de entornos de fabricación.

El problema ha sido solucionado al dar a conocer preparaciones bacteriófagas y que a diferencia de los bacteriófagos conocidos en la técnica anterior (Grimon F. y otros, Current Microbiology, vol. 6, no.2, 1981, páginas 65-69 y Current Microbiology vol. 5, no.2, 1981, páginas 61-66), tienen un potencial lítico sustancial contra E. sakazakii y que son seguras y no tóxicas.

Resumen de la invención

Es un objetivo de la presente invención desarrollar aislados de fagos nuevos y útiles con un potencial lítico sustancial contra E. sakazakii y que pueden ser utilizado solos o en mezcla (“cocktail”) para impedir o tratar productos alimenticios y entornos de producción de las contaminaciones producidas por E. sakazakii, en particular en formulaciones para niños.

Por lo tanto, es otro objetivo de la presente invención dar a conocer un producto alimenticio que contiene aislados de fagos seleccionados para la lisis de E. sakazakii, en particular una formulación basada en la leche, una composición nutritiva, un producto alimenticio para animales domésticos, un suplemento de dieta o para cualquier tipo de alimento con riesgo de contaminación por E. sakazakii.

Otro objetivo de la presente invención consiste en dar a conocer un agente para la decontaminación de productos alimenticios y para la higienización de un entorno de producción, que comprende una cantidad efectiva de, como mínimo, un aislado de fago o cóctel, tal como se ha descrito anteriormente.

En otra realización, la presente invención se refiere a la utilización de, como mínimo, un aislado de fago o cóctel, tal como se ha descrito anteriormente, para la decontaminación de productos alimenticios y la higienización de un entorno de producción o en la preparación de una composición destinada a prevenir o tratar infecciones provocadas por E. sakazakii en humanos o animales.

Además, se describe un método de decontaminación de productos alimenticios o para la higienización de un entorno de fabricación que comprende la utilización de, como mínimo, un preparado bacteriófago con potencial lítico sustancial contra E. sakazakii tal como se ha descrito en lo anterior.

También se describe un método para seleccionar una aislado de fago con potencial lítico sustancial contra E.

sakazakii, tal como se ha descrito en lo anterior.

Una ventaja principal de la presente invención es que da a conocer un decontaminante que tiene una elevada especificidad para E. sakazakii. Puede impedir la contaminación y crecimiento de E. sakazakii en cualquier producto alimenticio, siendo especialmente útil para productos basados en la leche, tales como formulaciones para niños. También puede ser eficaz para el tratamiento o prevención de infecciones provocadas por E. sakazakii en humanos

o animales.

Otra ventaja de la presente invención es que proporciona un agente que ayuda a desinfectar, limpiar y decontaminar superficies de trabajo o equipo de proceso en fábricas, así como pisos, paredes y similares.

Otra ventaja de la presente invención es que da a conocer un agente que es ambientalmente seguro y no tóxico para humanos.

Descripción detallada de la invención

Dentro de la siguiente descripción, el término “FSM-fago” designa la colección de bacteriófagos de Microbiología para la Seguridad de Alimentos (Centro de Investigación Nestlé, Vers-chez-les-Blanc, Lausanne, Suiza).

Un agente para decontaminación de alimentos y para higienización de un entorno de fabricación comprende, como mínimo, un aislado de fago con potencial lítico sustancial contra E. sakazakii.

Los fagos, de acuerdo con la siguiente invención, pueden ser obtenidos por cribado de bacteriófagos candidato para los que infectan cepas de E. sakazakii utilizando la prueba de ensayo local (“spot assay”) (Pelczar, M.J., E.C.S. Chan, y N.R. Krieg. Conceptos de Microbiología y aplicaciones, Capítulo 16 Virus: métodos de cultivo, patogenizidad

p. 436-452, McGraw-Hill, Inc. Nueva York 1993) o en un cultivo líquido (H.W. Ackermann y M.S. DuBow. Viruses of Prokaryotes (Virus de procariotes) Volumen 1. Capítulo 6. Description and identification of new phages (Descripción e identificación de nuevos fagos) p. 103-142. CRC Press Inc, Boca Raton, Florida, USA). El método para seleccionar los bacteriófagos se indica en detalle en el ejemplo 1, preferentemente se seleccionaron los aislados de fagos con capacidad de infectar:

i) como mínimo, 9 cepas bacterianas de E. sakazakii procedentes del grupo que consiste en FSM-16; FSM-33; FSM-261; FSM-265; FSM-266. FSM-269; FSM-270; FSM-271; FSM272; FSM-273; FSM-274; FSM-280; FSM-281; FSM-284; FSM-286; FSM-288; FSM-290; FSM-292; FSM-297; FSM-298;. FSM-300; FSM-303; FSM-305; FSM-308; FSM-309; FSM-311; FSM-313;, FSM-314; FSM-316;FSM-318; FSM-322; FSM-323; FSM-1360; FSM-1387-2NL; FSM-MC7; FSM-MC8; FSM-MC9; FSM-MM10 y FSM-MM11, sobre un medio sólido y,

ii) como mínimo, 9 cepas bacterianas de E. sakazakii del grupo que consiste en FSM-16; FSM-33; FSM-261; FSM265; FSM-266, FSM-269; FSM-270; FSM-271; FSM-272; FSM-273; FSM-274; FSM-280; FSM-281; FSM-284; FSM286; FSM-288; FSM-290; FSM-292; FSM-297; FSM-298; FSM-300; FSM-303; FSM-305; FSM-308; FSM-309; FSM311; FSM-313; FSM-314; FSM-316; FSM-318; FSM-322; FSM-323; FSM-1360;, FSM-1387·-2NL, FSM-MC7; FSMMC8; FSM-MC9; FSM-MM10 y FSM-MM11, en medio líquido.

Los aislados de fagos pueden ser Fago FSM 67/33/1, Fago FSM F, Fago FSM 9/261, Fago FSM F/316 y Fago FSM 73/311/2, Fago FSM 73/261, Fago FSM 33/33/1, Fago FSM 28/145/2 y Fago FSM 10/261/1.

En una realización preferente, los aislados de fagos son Fago FSM 10/261/1, Fago FSM 73/261, Fago FSM 33/33/1, Fago FSM 67/33/1, Fago FSM F/316, Fago FSM 9/261 y Fago FSM 73/311/2 junto con sus correspondientes cepas de propagación y han sido despositados a título de ejemplo en el Institut Pasteur, 28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris CEDEX 15, FRANCIA, el 14/11/2003, con el número de depósito CNCM 1-3127, CNCM 1-3128, CNCM 13129, CNCM 1-3130, CNCM 1-3131, CNCM 1-3132 y CNCM 1-3133, respectivamente.

De manera ventajosa, los fagos depositados con capaces de lisar, como... [Seguir leyendo]

1. Aislado de fagos, con potencial lítico sustancial contra E. sakazakii seleccionado del grupo que consiste en CNCM I-3127, CNCM I-3128, CNCM I-3129, CNCM I-3130, CNCM I-3131, CNCM I-3132 y CNCM I-3133.

2. Cóctel de fagos que contiene, como mínimo, un aislado de fagos, según la reivindicación 1.

3. Producto alimenticio que contiene, como mínimo, un aislado de fagos o cóctel de fagos con sustancial potencial lítico contra E. sakazakii, en el que el aislado de fagos o cóctel de fagos está de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 2, adoptando dicho producto alimenticio la forma de un producto basado en la leche, un compuesto nutritivo, alimento para animales domésticos, suplemento de dieta o cualquier producto alimenticio con riesgo de contaminación por E. sakazakii.

4. Producto alimenticio, según la reivindicación 3, en el que el producto basado en la leche es una leche fermentada, un yogur, una cuajada, un queso, un queso fresco, un producto fermentado, una leche con cuajada, una bebida, un material en polvo basado en leche, una formulación para niños o una formulación para niños en polvo en estado seco.

5. Producto alimenticio, según una de las reivindicaciones 3 a 4, en el que el aislado de fagos o cóctel de fagos se encuentra en una cantidad efectiva para impedir la contaminación y el crecimiento en E. sakazakii dicho producto.

6. Producto alimenticio, según la reivindicación 5, en el que el aislado de fagos se encuentra presente en una cantidad mínima de 1,104 pfu por ml, o gramo si es sólido, del producto alimenticio.

7. Agente para decontaminación de producto alimenticio con prevención de contaminación y crecimiento de E. sakazakii e higienización de un entorno de fabricación, que comprende una cantidad efectiva de, como mínimo, un aislado de fagos o cóctel de fagos, según una de las reivindicaciones 1 a 2.

8. Agente, según la reivindicación 7, en el que el aislado de fagos se encuentra presente en una cantidad mínima de 1,104 pfu por ml, o gramo si es sólido.

9. Agente, según una de las reivindicaciones 7 u 8, en el que el producto alimenticio es un producto basado en la leche, tal como leche fermentada, yogur, cuajada, queso, queso fresco, productos fermentados basados en la leche, leche con cuajada, bebidas, materiales en polvo basados en la leche, formulación para niños, formulación en polvo en estado seco para niños; producto fermentado no procedente de la leche; producto basado en soja, formulación nutritiva, producto de la leche, bebida enfriada o estable en almacenamiento, agua, sopa, suplemento de dieta, sustitutivo de comida, barrita o elemento de pastelería nutritivo, producto alimenticio para animales domésticos, bebida dulce o edulcorada, helado, barrita de pastelería, copos o barritas de cereales para desayuno o suplementos nutritivos para nutrición clínica o cualquier otro alimento con riesgo de contaminación por E. sakazakii.

10. Utilización de, como mínimo, un aislado de fago o cóctel de fagos, según una de las reivindicaciones 1 a 2, para descontaminación de productos alimenticios y para higienización de entorno de fabricación, en el que el producto alimenticio es un producto basado en la leche, tal como leche fermentada, yogur, cuajada, queso, queso fresco, productos fermentados basados en la leche, leche con cuajada, bebidas, materiales en polvo basados en la leche para niños, formulación para niños, formulación en polvo en estado seco; producto fermentado no procedente de la leche; producto basado en soja, formulación nutritiva, producto de la leche, bebida enfriada o estable en almacenamiento, agua, sopa, suplemento de dieta, sustitutivo de comida, barrita o elemento de pastelería nutritivo, producto alimenticio para animales domésticos, bebida dulce o edulcorada, helado, barrita de pastelería, copos o barritas de cereales para desayuno o suplementos nutritivos para nutrición clínica o cualquier otro alimento con riesgo de contaminación por E. sakazakii.

11. Utilización de, como mínimo, un aislado de fago, según una de las reivindicaciones 1 a 2, en la preparación de una composición destinada a prevenir o tratar infecciones provocadas por E. sakazakii en humanos o animales en la que el aislado de fagos se encuentra presente en una cantidad eficaz para prevenir la contaminación y crecimiento de Enterobacter sakazakii.

12. Utilización, según una de las reivindicaciones 10 a 11, en la que el aislado de fago o cóctel de fagos es utilizado en una cantidad mínima de 1,104 pfu por ml.