Uso de un copolímero de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico,

preparado sin impresión molecular, como un adsorbente de EFS para inmovilizar ocratoxina A

Campo de la Invención

La presente invención se refiere a un copolímero adecuado para la unión de ocratoxina A. El copolímero puede usarse para la extracción en fase sólida de ocratoxinas y la inmovilización de ocratoxinas en cartuchos de extracción en fase sólida (EFS) para el análisis cualitativo o cuantitativo de ocratoxinas en soluciones extraídas de productos alimenticios.

Antecedentes de la Invención

Una amplia diversidad de alimentos humanos y piensos animales, incluyendo nueces comestibles, semillas oleaginosas, granos de cereales y forrajes y productos derivados de los mismos son susceptibles de contaminación por micotoxinas, que son subproductos metabólicos tóxicos de hongos que pueden aparecer en los cultivos de alimentos y piensos tanto antes como después de la recolección

La ocratoxina A es la más importante y la que aparece más comúnmente de un grupo estructuralmente relacionado de compuestos de ocratoxina producidos por algunas especies de Aspergillus, tales como A. ochraceus, principalmente en regiones tropicales, y por Penicillium verrucosum, un hongo del almacenamiento común en áreas templadas tales como Canadá, Europa occidental y noroccidental y partes de Sudamérica. La UE ha propuesto recientemente límites máximos reglamentarios para la ocratoxina A de 5 g/kg en granos de cereales sin procesar incluyendo arroz y trigo sarraceno, 3 g/kg para productos de cereales derivados o para granos de cereales para consumo humano directo y 10 g/kg en pasas. Por consiguiente, la determinación directa del nivel de ocratoxina es un aspecto importante del control de calidad en alimentos y piensos.

Las mediciones del contenido de micotoxinas se han llevado a cabo convencionalmente mediante el uso de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Sin embargo, en los casos en los que no está disponible o no es apropiado un equipo de HPLC, también es posible la determinación por cromatografía en capa fina (CCF). Están disponibles aparatos de exploración comerciales para la determinación de micotoxinas después de la separación por CCF, usando lámparas de mercurio con una longitud de onda de emisión de 366 nm como fuente de luz para estimular la fluorescencia, que se detecta y cuantifica por fotomultiplicadores. Para el ensayo cuantitativo también existen técnicas de radioinmunoensayo y técnicas basadas en inmunoquímica tales como procedimientos de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).

Antes de que una solución obtenida por extracción a partir de una muestra de producto alimenticio se someta a una medición cuantitativa usando HPLC, por ejemplo, la solución puede someterse a un procedimiento de "limpieza" usando una extracción en fase sólida para eliminar los compuestos que puedan interferir con la evaluación de micotoxinas.

La detección cualitativa de micotoxinas puede llevarse a cabo usando columnas cromatográficas pequeñas (demominadas "minicolumnas") en las que las micotoxinas se inmovilizan como una capa dentro de un adsorbente mineral en las minicolumnas. Las minicolumnas se observan con luz ultravioleta para provocar la fluorescencia de la micotoxina inmovilizada. Se han adoptado diversos procedimientos de minicolumna como ensayos oficiales de la AOAC International (Association of Official Analytical Communities).

El documento WO 2006/123189 describe aparatos para el ensayo fluorométrico cuantitativo de micotoxinas inmovilizadas en capas en minicolumnas y también menciona el uso de polímeros no imprimidos molecularmente (en blanco) y polímeros imprimidos molecularmente como adsorbentes para micotoxinas en cartuchos de EFS.

El documento WO 2003/101580 desvela un procedimiento de unión de micotoxinas a un soporte sólido que incluye preparar un polímero imprimido molecularmente (MIP) usando la micotoxina como molde. A partir de las listas exhaustivas de micotoxinas y monómeros funcionales que se mencionan, los únicos MIP que se preparan realmente usan las micotoxinas desoxinivalenol (DON) y zearalenona (ZON) como moldes. El MIP para el DON se polimeriza a partir de metacrilato de dietilaminoetilo (DEAMA), 4vinilpiridina (4-VP) o ácido metacrílico (MAA), con etilendiglicol-metacrilato (EDMA) o divinilbenceno (DVP) como reticulante. El MIP para la ZON se polimeriza a partir del ácido trifluorometacrílico (TFM) o 4-VP usando EDMA como reticulante.

El documento WO 2006/120381 desvela un sensor que comprende un polímero imprimido molecularmente para la unión del anestésico propofol. El polímero está compuesto por un monómero seleccionado de uno o más de metacrilato de N,N-dietilaminoetilo (DEAEM), acrilamida, ácido 2(trifluorometil)acrílico (TFMAA), ácido itacónico y fosfato de metacrilato de etilenglicol (EGMP) y un reticulante. Durante la polimerización, el propofol se usa como molde para conseguir la impresión molecular deseada.

Un objeto de la presente invención es proporcionar un polímero que pueda usarse como un adsorbente de EFS que sea selectivo para ocratoxinas.

Sumario de la Invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que un copolímero de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico, preparado sin impresión molecular, es capaz de inmovilizar la ocratoxina A cuando se usa como un adsorbente de EFS.

Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención proporciona un copolímero de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico, preparado sin impresión molecular, para su uso como un adsorbente de EFS para inmovilizar la ocratoxina A.

Cuando dichos polímeros son novedosos en sí mismos también constituyen otro aspecto de la presente invención.

Los polímeros usados en la invención pueden prepararse por técnicas de polimerización convencionales sin el uso de ocratoxinas, o análogos estructurales, como moldes. Preferentemente, los polímeros se preparan en forma macroporosa, por ejemplo mediante el uso de un porógeno durante la polimerización.

Un aspecto adicional de la presente invención es una unidad adsorbente de EFS que comprende una columna, cubeta, barra, aguja, membrana o superficie plana cargada o revestida con una capa adsorbente de un polímero que contiene restos amido o aminoalquilo y restos ácidos

Otro aspecto de la presente invención es el uso de un copolímero de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico, preparado sin impresión molecular, como adsorbente para ocratoxinas.

Un aspecto adicional de la presente invención es un análisis fluorométrico para ocratoxinas que comprende adsorber las ocratoxinas sobre un polímero que contiene restos amido o aminoalquilo y restos ácidos cargados en o sobre una cubeta, cartucho, barra o superficie plana, exponiendo las ocratoxinas inmovilizadas a luz UV y detectando la fluorescencia emitida por las ocratoxinas inmovilizadas.

Los monómeros que pueden usarse para la preparación de copolímeros para proporcionar restos apropiados en el polímero incluyen metacrilato de dietilaminoetilo (DEAEM) y un monómero ácido seleccionado de ácido itacónico (IA).

Preferentemente, el copolímero está reticulado con un agente reticulante eficaz que no interfiere con la interacción con la ocratoxina. Los reticulantes adecuados incluyen diacrilatos de poliol, tales como dimetacrilato de etilenglicol (EGDMA), bis-acrilamidas tales como N'N'-metilenbisacrilamida y compuestos de divinilo, tales como divinilbenceno (DVB) y sus análogos.

Ventajosamente, el polímero o copolímero es poroso para aumentar el área superficial disponible para la interacción con las ocratoxinas.

Breve Descripción de los Dibujos

La Figura 1 es una vista de sección transversal de un cartucho adsorbente de EFS de acuerdo con la invención,

la Figura 2 es una vista de sección transversal de una configuración alternativa del cartucho adsorbente de EFS de la Figura 1.

Descripción Detallada de la Invención

Un polímero que comprende unidades que contienen restos aminoalquilo y ácido como componente primario de la presente invención puede prepararse por copolimerización de los monómeros apropiados que contienen, respectivamente, restos aminoalquilo y ácido (los monómeros funcionales), preferentemente en presencia de un agente reticulante.

Preferentemente, el polímero se prepara poroso para aumentar el área superficial disponible para la interacción con las... [Seguir leyendo]

1. Uso de un copolímero de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico, preparado sin impresión molecular, como un adsorbente de EFS para inmovilizar ocratoxina A.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el copolímero se ha reticulado con un monómero reticulante.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el reticulante es dimetacrilato de etilenglicol, N'N'-metilenbisacrilamida o divinilbenceno.

4. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el copolímero se ha obtenido por polimerización UV a una temperatura por debajo de la temperatura ambiente.

5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el copolímero se ha hecho macroporoso por eliminación de un porógeno presente durante la polimerización.

6. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el copolímero y la ocratoxina A absorbida sobre el mismo se usan como una muestra en un procedimiento de análisis fluorométrico.

7. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la ocratoxina A absorbida se eluye del copolímero y se usa como una muestra en un procedimiento de medición cuantitativa.

8. Un copolímero macroporoso que puede obtenerse por polimerización de metacrilato de dietilaminoetilo y ácido itacónico con reticulación por dimetacrilato de etilenglicol, N'N'metilenbisacrilamida o divinilbenceno, o una mezcla de los mismos, sin impresión molecular y en presencia de un disolvente de porógeno, seguida de lavado para eliminar el porógeno.

9. Una unidad adsorbente de EFS que comprende una cubeta, cartucho, aguja, membrana, barra o superficie plana cargada o revestida con una capa adsorbente de un copolímero de acuerdo con la reivindicación 8.

10. Un procedimiento de análisis fluorométrico para ocratoxina A que comprende adsorber la ocratoxina A sobre un copolímero de acuerdo con la reivindicación 8 cargado en o revestido o injertado sobre una cubeta, cartucho, aguja, membrana, barra o superficie plana, exponiendo las ocratoxinas inmovilizadas a luz UV y detectando la fluorescencia emitida por la ocratoxina A inmovilizada.

11. Un procedimiento de limpieza antes de la medición cuantitativa de ocratoxinas, en el que un líquido de muestra se pone en contacto con un copolímero de acuerdo con la reivindicación 8 cargado en

o revestido o injertado sobre una cubeta, cartucho, barra, aguja, membrana o superficie plana para adsorber cualquier ocratoxina que esté presente, y las ocratoxinas se eluyen del polímero para la medición cuantitativa de cualquier ocratoxina presente.