CUBETA.

Microcubeta desechable con por lo menos una cavidad para la determinación espectrofotométrica de hemoglobina en sangre entera sin diluir,

caracterizada porque la cavidad incluye un agente hemolizante no higroscópico seco, seleccionado de entre el grupo que consiste en desoxicolato de sodio, desoxicolato de potasio, desoxicolato de calcio, desoxicolato de morfolina, desoxicolato de ciclohexilamonio, y desoxicolato de amonio o mezclas de los mismos, en la que la cavidad está libre de azida y nitrito y cualquier otro aditivo

Campo de la invención

La presente invención se refiere a una cubeta desechable para su uso en un método para la determinación de hemoglobina en sangre entera sin diluir. 5

Antecedentes de la invención

Una cubeta desechable para tomar muestras de un fluido, mezclar la muestra con un reactivo y efectuar directamente un análisis óptico de la muestra mezclada con el reactivo es conocida anteriormente a partir de la patente U.S. Nº 4.088.448. Esta cubeta conocida tiene varias ventajas ya que entre otras cosas simplifica el procedimiento de muestreo, reduce el número de utensilios y mejora considerablemente la precisión del análisis haciendo el 10 procedimiento del análisis independiente de la técnica de operación del operario que realiza el análisis. Una estructura de cubeta basada en el mismo principio y con unas características de flujo mejoradas se describe en la patente US 5.674.457.

Una cubeta desechable desarrollada de acuerdo con estas patentes se utiliza ampliamente en la actualidad para la medición de la hemoglobina (determinación de Hb) de sangre entera sin diluir. Con este fin la cavidad 15 de cubeta ha sido tratada previamente con un reactivo, de manera que cuando una muestra de sangre es aspirada a la cubeta, las paredes de los glóbulos rojos se desintegran y se inicia una reacción química. El resultado de la reacción permite la determinación de Hb mediante la medición de la absorción directamente a través de las paredes transparentes de la cubeta que, en la zona de medición, también denominada ventana óptica, tiene una distancia predeterminada y definida con precisión entre las superficies interiores de las paredes planas opuestas. El método de 20 medición se basa en un método de la azidametahemoglobina modificado de acuerdo con Vanzetti, G., Am. J. Lab. & Clin. Med. 67, 116 (1966).

Las mediciones espectrofotométricas se llevan a cabo a 570 y 880 nm. Este método de medición cuantitativa basado en la química seca ha tenido un éxito considerable como puede verse, p. ej., en el artículo de von Schenck et al. en Clinical Chemistry, vol. 32, nº 3, 1986 ya que el método da resultados iguales o incluso superiores en 25 comparación con los resultados obtenidos con los métodos húmedos estandarizados para la determinación de Hb. El reactivo utilizado se compone de desoxicolato de sodio que hemoliza los glóbulos rojos, azida sódica y nitrito de sodio, que convierte la hemoglobina en azidametahemoglobina.

Debido a las propiedades higroscópicas de los reactivos utilizados, la durabilidad es limitada y se requiere el almacenamiento de las cubetas en paquetes sellados que incluyan a un agente secante. Aún más problemático es el 30 hecho de que, en climas con alta humedad, la cubeta debe utilizarse a los pocos minutos de la extracción del paquete, ya que de lo contrario los reactivos serán destruidos y la medición será poco precisa y por lo tanto inútil.

La patente US Nº 5.300.779 describe la determinación de hemoglobina en base a la absorbancia de un hemolisado que resulta de tratar una muestra de sangre con desoxicolato de sodio. La muestra de sangre se hemoliza y se filtra antes de ser introducida en un dispositivo de cubeta donde se llevan a cabo las mediciones. 35

La patente US Nº 5.686.316 describe un método para la determinación de la cantidad de hemoglobina glicosilada presente en los eritrocitos de una muestra de sangre entera. La cantidad de hemoglobina glicosilada es la determinación de acuerdo con un método de unión por afinidad e implica hemolizar la muestra de sangre. La muestra hemolizada se trata posteriormente con un agente de afinidad o ligante específico para la hemoglobina glicosilada para separar las diferentes variantes de hemoglobina. La muestra se diluye y se llevan a cabo las mediciones de absorción 40 en una cubeta a la que se traslada la muestra después de la reacción con el agente de afinidad y la dilución. Se llevan a cabo las mediciones de absorción en el intervalo de 340 a 633 nm y a las longitudes de onda específicas de 553 y 628 nm. El método determina la cantidad relativa de hemoglobina glicosilada en la muestra de sangre y no el contenido de hemoglobina cuantitativo.

La publicación internacional WO 99/18433 (PCT/US98/20551) describe una cámara de lisis que 45 comprende un componente de lisis en una superficie de la cámara de lisis. El material de lisis en la superficie puede ser saponina o un detergente. El material de lisis también puede unirse a una malla dentro de la cámara de lisis.

Objetos de la invención

Un objeto de la presente invención es proporcionar una microcubeta desechable para la determinación de hemoglobina en sangre entera sin diluir en la que se eliminan los problemas que se originan a partir de las propiedades 50 higroscópicas de los reactivos.

Otros objetos se pondrán de manifiesto a partir de la siguiente descripción y de las reivindicaciones adjuntas.

Resumen de la invención

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona una microcubeta desechable con por lo menos una cavidad para la determinación espectrofotométrica de hemoglobina en sangre entera sin diluir, caracterizada porque la cavidad incluye un agente hemolizante no higroscópico seco, seleccionado de entre el grupo que consiste en desoxicolato de sodio, desoxicolato de potasio, desoxicolato de calcio, desoxicolato de morfolina, 5 desoxicolato de ciclohexilamonio, y desoxicolato de amonio o mezclas de los mismos, en la que la cavidad está libre de azida y de nitrito y de cualquier otro aditivo.

La cubeta es útil en un método para proporcionar una determinación de hemoglobina de este tipo comprende las etapas de introducir una muestra de sangre entera sin diluir por capilaridad en una microcubeta desechable con por lo menos una cavidad para recibir la muestra. La cavidad incluye un agente hemolizante 10 básicamente no higroscópico seco, tal como se define en la reivindicación 1, que es disuelto por la sangre, hemoliza los glóbulos rojos y libera la hemoglobina contenida en las células sanguíneas. A continuación se lleva a cabo una primera medición de la absorción en un intervalo de longitudes de onda de 490-520 nm directamente en la muestra en la microcubeta, y se lleva a cabo una segunda medición de la absorción para compensar la interferencia de fondo.

De esta manera se ha descubierto inesperadamente que las determinaciones cuantitativas de 15 hemoglobina pueden llevarse a cabo sin los reactivos químicos azida de sodio y nitrito de sodio anteriormente mencionados. Más concretamente, se ha descubierto que las determinaciones cuantitativas pueden llevarse a cabo directamente en la sangre hemolizada siempre que se seleccione un agente hemolizante apropiado o una mezcla de los mismos.

De acuerdo con la presente invención se ha descubierto por tanto que pueden eliminarse los reactivos 20 higroscópicos. Además, se ha descubierto que puede reducirse el tiempo para obtener la determinación analítica. Como los análisis se llevan a cabo en grandes cantidades, p. ej. en hospitales y bancos de sangre, la característica de la duración es importante.

Descripción detallada de la invención

La microcubeta desechable de acuerdo con la presente invención puede ser del tipo descrito en la patente 25 US 4 088 448 o preferentemente en la patente US 5 674 457. Puede definirse como un elemento de cuerpo unitario que incluye por lo menos una cavidad con una ventana óptica (zona de medición) en la que dos superficies, planas o curvadas, de cara a la cavidad se colocan a una distancia predeterminada entre sí y por tanto definen una longitud de camino óptico predeterminada. Esta distancia entre las superficies que definen la zona de medición es un parámetro crítico en proporcionar la longitud de camino óptico adecuada para la medición de hemoglobina y en una forma de 30 realización preferente esta distancia es de entre 0,05 y 0,2 mm. La distancia entre las superficies interiores del resto de la cavidad es preferentemente del orden de 0,1-2 mm que es eficaz para permitir que la muestra entre a la cavidad por capilaridad a través de la entrada de la cavidad, que está en comunicación con el exterior del elemento de cuerpo. Además, la cavidad tiene un volumen fijo predeterminado inferior a aproximadamente 25 µl. Un agente hemolizante seco como se define en la reivindicación 1 está recubierto en la superficie de la cavidad. El agente hemolizante está 35 preferentemente presente por encima de la cantidad requerida... [Seguir leyendo]

1. Microcubeta desechable con por lo menos una cavidad para la determinación espectrofotométrica de hemoglobina en sangre entera sin diluir, caracterizada porque la cavidad incluye un agente hemolizante no higroscópico seco, seleccionado de entre el grupo que consiste en desoxicolato de sodio, desoxicolato de potasio, desoxicolato de calcio, desoxicolato de morfolina, desoxicolato de ciclohexilamonio, y desoxicolato de amonio o mezclas 5 de los mismos, en la que la cavidad está libre de azida y nitrito y cualquier otro aditivo.

2. La microcubeta según la reivindicación 1 en la que el agente hemolizante comprende una mezcla de desoxicolato de sodio y desoxicolato de amonio.

3. La microcubeta según la reivindicación 2, en la que la cantidad de desoxicolato de amonio es de entre el 20 y el 80 por ciento en peso. 10