Una composición para administrar un agente a una célula, en la que un compuesto potenciador de la administración y el agente se proporcionan por separado antes de mezclarse de manera previa a su administración a un paciente y el compuesto potenciador de la administración es un compuesto de fórmula III,

que tiene la siguiente estructura: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

Antecedentes de la invención

La presente invención pertenece al campo de la administración terapéutica y de otros agentes a las células. Genes, polipéptidos, y otras moléculas están entre los agentes que se pueden administrar usando los compuestos y procedimientos de la invención. Las células pueden estar presentes individualmente o como un tejido u órgano biológico.

La administración de un compuesto a una célula es una primera etapa crítica de muchos procedimientos diagnósticos y terapéuticos La terapia génica, por ejemplo, es una herramienta muy prometedora para la terapéutica y otros usos que requieren la administración de un ácido nucleico a una célula Se han desarrollado, por ejemplo, distintos enfoques para tratar neoplasmas basándose en procedimientos de transferencia génica. Se han desarrollado procedimientos para corregir lesiones específicas en loci genéticos definidos que proporcionan un incremento de la transformación y progresión neoplásicas (Spandidos y col., Anticancer Res. 10: 1543-1554 (1990); Banerjee y col., Cancer Res. 52: 6297-6304 (1992)). Se puede resolver el exceso en la expresión de oncogenes dominantes usando técnicas para inhibir la transformación del gen o del producto génico. Se puede resolver la pérdida de función génica supresora tumoral usando procedimientos para reconstituir la función génica supresora tumoral natural (Goodrich y col., Cancer Res. 52: 1968-1973 (1992)). Además de estos procedimientos para conseguir la compensación de la mutación, se han desarrollado técnicas genéticas para erradicar específica y selectivamente las células tumorales. Estos enfoques de quimioterapia molecular se basan en la expresión específica de genes de toxinas en células neoplásicas (Abe y col., Proc Soc Exp Biol Med. 203: 354-359 (1993)). Finalmente, se han usado procedimientos de transferencia génica para conseguir inmunización antitumoral. Estos procedimientos de inmunopotenciación genética usan técnicas de inmunorregulación genética para potenciar el inmunorreconocimiento de tumores. Posteriormente, se ha desarrollado una variedad de distintos enfoques para llevar a cabo la terapia génica del cáncer.

Se ha observado una elevada incidencia de mutaciones en genes supresores tumorales, tales como p53 y RB, en el caso del carcinoma de vejiga (Fujimoto y col., Cancer Res. 52: 1393-1398 (1992); Cairns y col., Oncogene 6: 23052309 (1991)). Para dichas lesiones genéticas en genes supresores tumorales, se puede demostrar la reversión del fenotipo neoplásico con la sustitución del correspondiente gen supresor tumoral natural (Spandidos, Id.; Banerjee, Id.).

El carcinoma de vejiga representa una fuente significativa de morbilidad y mortalidad. El cáncer de vejiga se encuentra en el décimo lugar entre los varones y en el duodécimo lugar entre las mujeres en la mortalidad relacionada con el cáncer (Cancer Facts and Figures, Amer. Can .Soc. 5: 11 (1995)). Las terapias disponibles para el tratamiento del cáncer de vejiga incluyen la quimioterapia o inmunoterapia adyuvante, la resección transuretral de la enfermedad superficial, la cistectomía o radioterapia radical que se combina a menudo con la quimioterapia sistémica. A pesar de estas opciones terapéuticas, la supervivencia global no ha cambiado apreciablemente. (Id.) De esta manera, deben desarrollarse nuevas modalidades terapéuticas para el tratamiento del cáncer de vejiga.

Se han desarrollado estrategias de terapia génica como un enfoque terapéutico alternativo (Véanse por ejemplo, Brewster y col., Eur Urol 25: 177-182 (1994); Takahashi y col., Proc Natl Acad Sci USA 88: 5257-5261 (1991); Rosenberg, SA, J. Clin Oncol. 10: 180-199 (1992)). El tratamiento satisfactorio del cáncer y de otras dolencias en un ser humano u otro animal puede depender de que penetre en las células una cantidad adecuada de un agente terapéutico, y de una proporción suficientemente grande de células diana capturen el agente terapéutico.

El documento WO 96/10038 da a conocer el uso de cationes de poliamina para transferir moléculas de ácido nucleico a las células diana; sin embargo, las moléculas dadas a conocer en el anterior son estructuralmente diferentes del compuesto potenciador de la administración de la presente invención.

Otros muchos agentes terapéuticos y otros agentes moduladores son polipéptidos o, por ejemplo, moléculas pequeñas. De nuevo, la cantidad del agente que alcanza una población de células diana puede tener un gran impacto sobre la eficacia del tratamiento. Por tanto, existe una necesidad de compuestos y procedimientos que puedan potenciar la cantidad de un agente que se administra a una célula o a una población de células.

La presente invención cumple esta y otras necesidades.

Resumen de la invención

La invención proporciona una composición para administrar un agente a una célula, en la que un compuesto potenciador de la administración y el agente se proporcionan separadamente antes de que se mezclen de manera previa a la administración a un paciente y el compuesto potenciador de la administración es un compuesto de fórmula III, que tiene la siguiente estructura:

**(Ver fórmula)**

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

El compuesto potenciador de la administración y el agente se pueden mezclar antes de la administración al paciente. Se puede formular la composición para la administración intravesical a la vejiga. La concentración del compuesto potenciador de la administración puede estar entre 0,002 y 2 mg/ml. El agente es preferiblemente un agente terapéutico, en particular un modulador de un proceso biológico en una célula cuando el agente está presente en la célula, en el que el proceso biológico se selecciona entre el grupo constituido por crecimiento celular, diferenciación, proliferación, una ruta metabólica o biosintética, expresión génica, un proceso asociado a enfermedad, y una respuesta inmune. En una forma de realización preferida, la proliferación es cáncer. El agente puede ser un gen que codifica un polipéptido, en particular una citocina, tal como un interferón alfa. Se puede incorporar el gen a un vector. El vector puede ser un vector vírico recombinante Se puede seleccionar el vector vírico recombinante entre el grupo constituido por un vector del virus del herpes, un vector retrovírico, un vector del virus vaccinia, un vector de un virus adenoasociado y un vector adenovírico. Se puede formular el vector vírico como una suspensión que contiene entre 1x108 partículas/ml a 5x1011 partículas/ml del vector vírico. La composición es preferiblemente para tratar el cáncer y lo más preferible para tratar el carcinoma de vejiga.

25 Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 representa gráficamente la influencia de la formulación de la transferencia y de la expresión génica mediada por adenovirus en el epitelio de la vejiga de rata tras la administración intravesical,

La Fig. 2 representa gráficamente la expresión transgénica de un adenovirus en células epiteliales de la vejiga tras la administración intravesical, La Fig. 3 representa gráficamente la expresión transgénica de un adenovirus dependiente de la dosis en la vejiga de rata tras la administración intravesical,

La Fig. 4 representa gráficamente un análisis mediante la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) de la expresión transgénica de un adenovirus recombinante en la vejiga de ratón tras la administración intravesical, La Fig. 5 representa gráficamente un curso de tiempo de la expresión transgénica de un adenovirus recombinante en tejido de vejiga, riñón, e hígado tras la administración intravesical del virus,

La Fig. 6 representa gráficamente el ADN transgénico de un adenovirus recombinante en homogenados de vejiga y riñón tras la administración intravesical,

La Fig. 7 representa gráficamente la mejora de la transferencia génica al epitelio de vejiga usando una formulación 40 Big CHAP (N, N, bis-(3-D-gluconamidopropil)-colamida (CALBIOCHEM7 Biochemicals, San Diego, California),

La Fig. 8 representa gráficamente la mejora de la transferencia génica al epitelio de vejiga usando diferentes concentraciones de adenovirus recombinante en una formulación Big CHAP 7 mM.

La Fig. 9 representa gráficamente la potenciación de la expresión transgénica de un adenovirus recombinante en tejido de vejiga usando una formulación de etanol (ETOH) o Big CHAP.

45 La Fig. 10 representa gráficamente... [Seguir leyendo]

1. Una composición para administrar un agente a una célula, en la que un compuesto potenciador de la administración y el agente se proporcionan por separado antes de mezclarse de manera previa a su administración a un paciente y el compuesto potenciador de la administración es un compuesto de fórmula III, que tiene la siguiente estructura:

**(Ver fórmula)**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la concentración del compuesto potenciador de la administración es de 0,002 a 2 mg/ml y la composición comprende adicionalmente un tampón.

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en la que la composición se formula para administración intravesical a la vejiga.

4. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el agente es un agente terapéutico.

5. La composición de la reivindicación 4, en la que el compuesto potenciador de la administración y el agente se mezclan antes de administrarse a un paciente.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 4 o 5, en la que el agente es un modulador de un proceso biológico en una célula cuando el agente está presente en la célula, en la que el proceso biológico se selecciona entre el grupo que consiste en crecimiento celular, diferenciación, proliferación, una ruta metabólica o sintética, expresión génica, un procedimiento asociado a una dolencia, y una respuesta inmune.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en la que la proliferación es un trastorno neoplásico.

8. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el trastorno neoplásico es cáncer.

9. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en la que el agente comprende un ácido nucleico que comprende un gen que codifica un polipéptido.

10. La composición de acuerdo con la reivindicación 9, en la que el gen codifica una citocina. 11. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, en la que la citocina es un alfa-interferón.

12. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la que el gen se incorpora a un vector.

13. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, en la que el vector es un vector vírico recombinante.

14. La composición de acuerdo con la reivindicación 13, en la que el vector vírico recombinante se selecciona entre el grupo que consiste en un vector del virus del herpes, un vector retrovírico, un vector del virus vaccinia, un vector vírico adenoasociado y un vector adenovírico.

15. La composición de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el vector adenovírico tiene una deleción en el gen de la proteína IX.

16. La composición de acuerdo con la reivindicación 14 o 15, en la que el vector adenovírico comprende un promotor de CMV.

17. La composición de acuerdo con la reivindicación 13 a 16, en la que el vector vírico se formula como una suspensión que contiene de aproximadamente 1 x 108 partículas/ml a 5 x 1011 partículas/ml del vector vírico. 18. La composición de acuerdo con las reivindicaciones 4 a 17 en la que la composición es para tratar el cáncer. 19. La composición de la reivindicación 18, en la que el cáncer es un carcinoma de vejiga.