Vacuna contra el Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP),

que comprende el virus de SRRP vivo, caracterizada porque contiene una o varias de las cepas del virus de SRRP que se han depositado el 27 de octubre de 2004 en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC), Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 0JG, Gran Bretaña, con los números de entrada ECACC 04102703, ECACC 04102702 y ECACC 04102704, opcionalmente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, pero no la cepa depositada con el número de entrada ECACC 04102701

Vacunas contra el SRRP.

Antecedentes de la invención

La presente invención pertenece al campo de las vacunas contra enfermedades infecciosas. Más particularmente, se refiere a vacunas contra el Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP), una enfermedad vírica que afecta a los cerdos.

El Virus del Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (VSRRP) es un virus de ARNss de cadena (+) que pertenece a la familia Arteriviridae. El virus existe en forma de dos genotipos denominados tipo "US" y tipo "EU" que comparten aproximadamente el 50% de homología de secuencia (Dea S y col. (2000). Arch Virol 145:659-88), y que se pueden distinguir por sus propiedades inmunológicas. La mayor parte de la información de la secuenciación de diversos materiales aislados se basa en las proteínas estructurales, es decir, la proteína de la envoltura GP5 que justifica sólo ~ 4% del genoma vírico, mientras que se conoce sólo poco de las proteínas no estructurales (nsp, del inglés "non-structural proteins").

La proteína nsp2 tiene 1078 aminoácidos en el Virus Lelystad (VL), prototipo del tipo EU y sólo comparte 32% de homología con VSRRP-US (Allende R y col. (1999). J Gen Virol 80:307-15). Induce anticuerpos séricos durante la infección natural (Oleksiewicz MB y col. (2001a). J Virol 75:3277-90, Oleksiewicz MB y col. (2001b). Vet Microbiol 81:109-25), parece tener un papel crucial en la replicación vírica (Snijder EJ y col. (2001). J Gen Virol 82:985-94, van der Meer Y y col. (1998). J Virol 72:6689-98) y se cree que tiene funciones específicas de la especie (de Vries AAF y col. (1997). Seminars in Virology 8:33-47). La secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia de aminoácidos de nsp2 está representada en SEQ ID NO: 2. Variaciones en la longitud de la región codificadora de nsp2 sólo se han descrito hasta la fecha para un material aislado de tipo US (Shen S y col. (2000). Arch Virol 145:871-83) y para las cepas de tipo EU encontradas en US (Fang Y y col. Virus Res. 2004 Mar 15;100(2):229-35, Ropp SL y col. J Virol. Abril 2004;78(7):3684-703).

El aislamiento de VSRRP y la preparación de vacunas se han descrito en diversas publicaciones (documentos WO 92/21375, WO 93/06211, WO 93/03760, WO 93/07898, WO 96/36356, EP 0 676 467, EP 0 732 340, EP 0 835 930). El documento WO 96/36356 describe una vacuna viva y atenuada contra PRRS. Allende R y col. (2000), Arch Virol 145:1149-1161 compararon la secuencia genómica de una vacuna atenuada contra PRRSV con la de su parental VR-2332 y con la cepa patógena 16244B, e identificaron nueve cambios de aminoácidos. Shen y col. (2000), Arch Virol 145:871-883 determinaron la secuencia de nucleótidos de una cepa de vacuna contra SRRP e identificaron un gen Nsp2 con una única inserción. Fang y col. (2004), Virus Res. 100:229-235 informaron sobre una heterogeneidad de la secuencia en Nsp2 de VSRRP similar al europeo, aislado en los Estados Unidos de América.

Todavía existe la necesidad de proporcionar vacunas con características mejoradas, en particular en relación con la eficacia y la seguridad.

Breve sumario de la invención

La presente invención se refiere a vacunas mejoradas, del tipo vivas modificadas de SRRP, de genotipo Europeo y a nuevas cepas de VSRRP que se pueden utilizar para la preparación de tales vacunas. En particular, la invención proporciona cepas mejoradas del virus de SRRP que se han depositado en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC, del inglés "European Collection of Cell Cultures") con los números de orden ECACC 04102703, ECACC 04102702 y ECACC 04102704.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1: Gel de agarosa (2% de agarosa, teñido con bromuro de etidio) de productos de RT-PCR obtenidos a partir de la región nsp2 (pos. 2068 - 2713) de un material aislado similar a Lelystad (pista 1), Porcilis® PRRS (pista 2) y testigo negativo (pista 3). Pista 4: escalera de 100 pb. Los productos de Porcilis® PRRS (banda doble en 434 y 416 pb y una banda en 347 pb) son menores que el producto similar a LV (569 pb).

Figura 2: Productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de una selección de placas después de un pase sobre el un cultivo de células Ma104.

Figura 3: Secuencia de nucleótidos de una placa representativa de cada variante de longitud, comparada con la secuencia de nucleótidos del Virus Lelystad (LV) prototipo de la cepa.

Figura 4: Productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de diferentes muestras de las dos cerdas que muestran un fracaso reproductor después de la vacunación con Porcilis® PRRS y sus descendientes.

Figura 5: Los productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de muestras clínicas de lechones de 6 semanas de edad, vacunados con Porcilis® PRRS. El círculo muestra las muestras de cerdos con la enfermedad PMWS.

Figura 6A: Secuencia de nucleótidos de los productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de diferentes muestras de campo que muestran la misma deleción de 222 nucleótidos que un grupo de placas obtenidas a partir del frasco de la vacuna Porcilis PRRS (p. ej. la placa P45), comparada con la secuencia de longitud completa (similar a Lelystad) de la placa 36 obtenida a partir de Porcilis.

Figura 6B: Secuencia de nucleótidos de los productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de diferentes muestras de campo que muestran la misma deleción de 135 nucleótidos que un grupo de placas obtenidas a partir del frasco de la vacuna Porcilis PRRS (p. ej. la placa P27), comparada con la secuencia de longitud completa (similar a Lelystad) de la placa 36 obtenida a partir de Porcilis.

Figura 6C: Secuencia de nucleótidos de los productos de la PCR de nsp2 obtenidos a partir de diferentes muestras de campo que muestran la misma deleción de 153 nucleótidos que un grupo de placas obtenidas a partir del frasco de la vacuna Porcilis PRRS (p. ej. la placa 31), comparada con la secuencia de longitud completa (similar a Lelystad) de la placa 36 obtenida a partir de Porcilis.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a vacunas mejoradas contra el SRRP. En particular, la invención se refiere a vacunas vivas modificadas (VVM). Una vacuna viva modificada se caracteriza porque contiene virus vivos que se pueden replicar en cerdos, pero que no ejercen síntomas clínicos de SRRP o sólo pocos síntomas moderados de la enfermedad. Además, después de la administración se induce una respuesta inmune en los cerdos que conduce generalmente a un grado significativo de protección contra una infección posterior con virus patógenos de SRRP. Los virus que muestran tales características se denominan generalmente virus atenuados. En general, el virus atenuado se puede generar a partir de material aislado de virus patógenos, haciendo pases repetidos en células hospedadoras adecuadas, hasta que muestra las propiedades deseadas (documentos WO 92/21375, WO 93/06211, WO 93/03760, WO 93/07898, WO 96/36356, EP 0 676 467, EP 0 732 340, EP 0 835 930). Alternativamente, se puede generar por ingeniería genética, mediante el uso de un clon infeccioso, normalmente un transcrito de ADN complementario de longitud completa del genoma vírico (documentos WO 98/18933, EP 1 018 557, WO 03/062407, Nielsen y col., J Virol 2003, 77:3702-3711). En una realización preferida, la presente invención se refiere a un VVM que contiene virus del SRRP con genotipo Europeo.

La presente invención se basa en el hallazgo inesperado de que la seguridad y la eficacia de un MMV de SRRP se pueden mejorar, si se tiene cuidado de que el virus utilizado para la vacuna no muestre ciertas deleciones en la secuencia de nsp2. Más específicamente, un virus de acuerdo con la invención debe contener una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos que difiera de SEQ ID NO: 1 en 1, 2, 3, 4 o 5 nucleótidos (tanto sustituciones y deleciones como inserciones), como parte de una secuencia codificadora de nsp2 parcial o completa. En otras palabras, los nucleótidos que se corresponden con los nucleótidos nºs. 145 a 163 de la SEQ ID NO: 1 no deben estar suprimidos en dicho virus.

Las cepas de virus atenuados que se pueden utilizar para las vacunas de acuerdo con la presente invención, han sido depositadas por Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, bajo el Tratado de Budapest, el 27 de octubre de 2004, en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC), Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 0JG, Gran Bretaña, con los números de entrada 04102703 (VSRRP bs104-P27), 04102702 (VSRRP...

1. Vacuna contra el Síndrome Reproductor y Respiratorio Porcino (SRRP), que comprende el virus de SRRP vivo, caracterizada porque contiene una o varias de las cepas del virus de SRRP que se han depositado el 27 de octubre de 2004 en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC), Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 0JG, Gran Bretaña, con los números de entrada ECACC 04102703, ECACC 04102702 y ECACC 04102704, opcionalmente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, pero no la cepa depositada con el número de entrada ECACC 04102701.

2. Vacuna de la reivindicación 1, que contiene las cepas del virus de SRRP que se han depositado con los números de entrada ECACC 04102703, ECACC 04102702 y ECACC 04102704.

3. Vacuna de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que contiene adicionalmente un coadyuvante.

4. Vacuna de la reivindicación 3, en la que el coadyuvante es acetato de a-tocoferol.

5. Vacuna de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende una composición liofilizada del virus.

6. Una cepa del virus de SRRP que es una cualquiera de las cepas del virus de SRRP que se han depositado el 27 de octubre de 2004 en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC), Porton Down, Salisbury, Wiltshire, SP4 0JG, Gran Bretaña, con los números de entrada ECACC 04102703, ECACC 04102702 y ECACC 04102704.

7. Método para preparar una vacuna, que comprende incorporar por mezcla una o varias cepas del virus de SRRP según la reivindicación 6, con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Uso de un virus de SRRP según la reivindicación 6, para la preparación de una vacuna.

9. Producto de vacuna, que comprende en recipientes separados una composición liofilizada según la reivindicación 5, y un disolvente para la reconstitución y opcionalmente contiene, además, un folleto o una etiqueta que comprende las instrucciones de uso.

10. Producto de vacuna de la reivindicación 9, en donde el disolvente contiene un coadyuvante.

11. Vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque contiene al menos un antígeno adicional activo contra una enfermedad porcina que no es el SRRP.