Un inmunógeno polipeptídico que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO:

1, en el que dicho polipéptido confiere inmunidad de protección contra S. aureus, y en el que si una o más regiones polipeptídicas adicionales están presentes, estas regiones adicionales no proporcionan un extremo carboxilo terminal que contenga los aminoácidos 609-645 de SEC ID NO:

Polipéptido para la inducción de una respuesta inmunitaria de protección contra Staphylococcus aureus.

Referencia cruzada con solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica los beneficios de la Solicitud Provisional de EE.UU. Nº 60/489.840, presentada el 24 de julio, 2003 y de la Solicitud Provisional de EE.UU. Nº 60/520.115, presentada el 14 de noviembre, 2003.

Antecedentes de la invención

Las referencias citadas a lo largo de la presente solicitud no se admiten como técnica anterior de la invención reivindicada.

Staphylococcus aureus es un patógeno responsable de una extensa gama de enfermedades y trastornos. Los ejemplos de enfermedades y trastornos causados por S. aureus incluyen bacteriemia, endocarditis infecciosa, foliculitis, furunculosis, ántrax, impétigo, impétigo bulloso, celulitis, botriomicosis, síndrome del shock tóxico, síndrome de la piel escaldada, infecciones del sistema nervioso central, enfermedades oftalmológicas infecciosas e inflamatorias, osteomielitis y otras infecciones de articulaciones y huesos, e infecciones de las vías respiratorias. (The Staphylococci in Human Disease, Crossley y Archer (eds.), Churchill Livingstone Inc., 1997).

Es posible emplear estrategias de base inmunológica para intentar controlar las infecciones por S. aureus y la diseminación de S. aureus. Las estrategias de base inmunológica incluyen las inmunizaciones pasiva y activa. La inmunización pasiva utiliza inmunoglobulinas que tiene como diana S. aureus. La inmunización activa induce respuestas inmunitarias contra S. aureus.

Las vacunas potenciales contra S. aureus tienen como diana los polisacáridos y polipéptidos de S. aureus. El establecimiento de las dianas se puede lograr utilizando como componentes de la vacuna polisacáridos y polipéptidos apropiados de S. aureus. Ejemplos de potenciales componentes polisacáridos de la vacuna incluyen los polisacáridos capsulares de tipo 5 y tipo 8 de S. aureus. (Shinefield et al., N. Eng. J. Med. 346:491-496, 2002). Ejemplos de polipéptidos que se puede usar como posibles componentes de vacuna incluyen el colágeno adhesina, proteínas que fijan fibrinógeno, y el factor de aglomeración (o virulencia). (Mamo et al., FEMS Immunology and Medical Microbiology 10:47-54, 1994; Nilsson et al., J. Clin. Invest. 101:2640-2649, 1998; Josefsson et al, The Journal of Infectious Diseases 184:1572-1580, 2001).

La información relativa a las secuencias de polipéptidos de S. aureus se ha obtenido de la secuenciación del genoma de S. aureus. (Kuroda et al., Lancet 357:1225-1240, 2001; Baba et al., Lancet 359:1819-1827, 2000; Kunsch et al., Publicación de Patente Europea EP 0.786.519, publicada el 30 de julio, 1997). En cierta medida, se ha utilizado bioinformática en los intentos de caracterizar las secuencias de polipéptidos obtenidas de la secuenciación del genoma. (Kunsch et al., Publicación de Patente Europea EP 0.786.519, publicada el 30 de julio, 1997).

Como parte de los intentos de identificar los genes que codifican antígenos potenciales, se pueden utilizar técnicas tales como las que implican tecnología de expresión y sueros de pacientes infectados. (Foster et al., Publicación Internacional Número WO 01/98499, publicada el 27 de diciembre, 2001; Meinke et al., Publicación Internacional Número WO 02/059148, publicada el 1 de agosto, 2002).

Resumen de la invención

La presente invención muestra polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos relacionados estructuralmente con SEC ID NO: 1, los usos de tales polipéptidos, y los sistemas de expresión para producir estos polipéptidos. SEC ID NO: 1 es un derivado truncado de un polipéptido de longitud completa de S. aureus. El polipéptido de longitud completa se designa en este documento como "ORF0657n" de longitud completa. Los polipéptidos que contienen la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 1 han demostrado producir una respuesta inmunitaria de protección contra S. aureus.

La referencia a inmunidad o respuesta inmunitaria "protectora" indica la existencia de un nivel detectable de protección contra la infección de S. aureus. El nivel de protección se puede evaluar usando modelos animales tales como los que se describen en este documento.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un inmunógeno polipeptídico que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en la menos 90% a SEC ID NO: 1, en el que el polipéptido no contiene un extremo terminal carboxilo producido por los aminoácidos 609-645 de SEC ID NO: 2, y el polipéptido confiere inmunidad de protección contra S. aureus. SEC ID NO: 2 proporciona un polipéptido ORF0657n de longitud completa, en el que los aminoácidos 609-645 ofrecen el dominio terminal carboxilo que se inicia en el resto LPXTG (al que se hace referencia en este documento como "señal de clasificación de la pared celular").

La referencia a "inmunógeno" indica la capacidad para conferir inmunidad de protección.

La referencia a que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO: 1 indica que se encuentra presente una región relacionada con SEC ID NO: 1 y que puede haber presentes regiones polipeptídicas adicionales. Si hay presentes secuencias polipeptídicas adicionales, entonces el polipéptido carece del resto LPXTG carboxilo aportado por los aminoácidos 609-645 de SEC ID NO: 2.

Otro aspecto de la presente invención describe un inmunógeno que comprende una secuencia de aminoácidos que ofrece inmunidad de protección contra S. aureus. El inmunógeno comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO: 1, y una o múltiples regiones o restos adicionales unidos de forma covalente en el extremo terminal carboxilo o en el extremo terminal amino, en donde dichas regiones o restos adicionales no confieren un extremo terminal carboxilo que contiene los aminoácidos 609-645 de SEC ID NO: 2, en donde cada región o resto se selecciona independientemente de una región o resto que posee al menos una de las siguientes propiedades: potencia la respuesta inmunitaria, facilita la purificación, o facilita la estabilidad de polipéptidos.

La referencia a "región o resto adicional" indica una región o resto diferente de un polipéptido relacionado con ORF0657n que se produciría en un hospedador biológico, tal como un hospedador procariótico o eucariótico. La región o el resto adicionales pueden ser, por ejemplo, una región polipeptídica o no peptídica adicional.

Otro aspecto de la presente invención describe una composición capaz de inducir inmunidad de protección contra S. aureus en un paciente. La composición comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad inmunológicamente efectiva de un inmunógeno, según se ha descrito anteriormente, confiriendo inmunidad de protección contra S. aureus. Una cantidad inmunológicamente efectiva es una cantidad suficiente para proporcionar inmunidad de protección contra infecciones de S. aureus. La cantidad debe ser suficiente para prevenir de manera significativa la probabilidad o la gravedad de una infección de S. aureus.

Otro aspecto de la presente invención describe un ácido nucleico que comprende un gen recombinante que codifica un polipéptido, según se ha descrito anteriormente, que confiere inmunidad de protección contra S. aureus. Un gen recombinante contiene ácido nucleico recombinante que codifica un polipéptido, junto con elementos reguladores para la transcripción y el procesamiento adecuados (que pueden incluir elementos traduccionales y postraduccionales). El gen recombinante puede existir de forma independiente de un genoma hospedador, o puede formar parte de un genoma hospedador.

Un ácido nucleico recombinante es un ácido nucleico que, en virtud de su secuencia y/o forma, no se produce en la naturaleza. Ejemplos de ácidos nucleicos recombinantes incluyen ácido nucleico purificado, dos o más regiones de ácido nucleico combinadas entre sí, que proporcionan un ácido nucleico diferente del hallado en la naturaleza, y la ausencia de una o múltiples regiones de ácido nucleico (por ejemplo, regiones corriente arriba y corriente abajo), que se encuentran asociadas de manera natural entre sí.

Otro aspecto de la presente invención describe una célula recombinante. La célula comprende un gen recombinante que codifica...

1. Un inmunógeno polipeptídico que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO: 1, en el que dicho polipéptido confiere inmunidad de protección contra S. aureus, y en el que si una o más regiones polipeptídicas adicionales están presentes, estas regiones adicionales no proporcionan un extremo carboxilo terminal que contenga los aminoácidos 609-645 de SEC ID NO: 2.

2. El polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido consiste en una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO: 3, o a un fragmento de la misma, que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 90% a SEC ID NO: 1.

3. El polipéptido según la reivindicación 2, en el que dicho polipéptido consiste en una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 94% a SEC ID NO: 3, o a un fragmento de la misma, que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica en al menos 94% a SEC ID NO: 1.

4. El polipéptido según la reivindicación 3, en el que dicho polipéptido consiste en una secuencia idéntica en al menos 94% a SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3 o SEC ID NO: 42.

5. El polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido es SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3 o SEC ID NO: 42, o difiere de dichas secuencias en hasta 25 alteraciones de aminoácidos.

6. El polipéptido según la reivindicación 5, en el que dicho polipéptido es SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3 o SEC ID NO: 42, o difiere de dichas secuencias en hasta 10 alteraciones de aminoácidos.

7. El polipéptido según la reivindicación 6, en el que dicho polipéptido es SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3 o SEC ID NO: 42, o difiere de dichas secuencias en hasta 5 alteraciones de aminoácidos.

8. El polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido es SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 3 o SEC ID NO: 42.

9. El polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NOs: 1, 3, 7, 17, 20 ó 42, y hasta 20 aminoácidos adicionales.

10. El polipéptido según la reivindicación 5, en el que dicho polipéptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NOs: 7, 17 ó 20.

11. El polipéptido según cualquier reivindicación anterior, exento de la totalidad o de la mayor parte de los restantes polipéptidos a los que el polipéptido se encuentra asociado de manera natural.

12. Un inmunógeno consistente en los polipéptidos según cualquier reivindicación anterior, en el que dicho inmunógeno consiste en dicha secuencia de aminoácidos y una o múltiples regiones o restos adicionales, unidos covalentemente con dicha secuencia en el extremo carboxi o amino terminal, en el que cada región o resto se selecciona de manera independiente de una región o resto que tiene al menos una de las propiedades siguientes: potencia la respuesta inmunitaria, facilita la purificación, o facilita la estabilidad del polipéptido.

13. Una composición capaz de inducir una respuesta inmunitaria de protección en un paciente, que comprende una cantidad inmunológicamente efectiva del inmunógeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. La composición según la reivindicación 13, en el que dicha composición comprende, adicionalmente, un adyuvante.

15. Un ácido nucleico que comprende un gen recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el inmunógeno polipeptídico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

16. El ácido nucleico según la reivindicación 15, en el que el gen recombinante no codifica una secuencia que codifique un péptido señal celular, y no codifica una secuencia de señal de clasificación de pared celular.

17. El ácido nucleico según la reivindicación 16, en el que dicho gen recombinante contiene uno o múltiples codones optimizados para la expresión en una levadura.

18. El ácido nucleico según la reivindicación 17, en el que dicha secuencia nucleotídica está optimizada a nivel de codones en al menos 50% para la expresión en levadura.

19. El ácido nucleico según la reivindicación 16, en el que dicha secuencia nucleotídica se selecciona del grupo consistente en: SEC ID NO: 30; SEC ID NO: 31; SEC ID NO: 32; SEC ID NO: 33; SEC ID NO: 34; SEC ID NO: 35; SEC ID NO: 36; SEC ID NO: 37; SEC ID NO: 38; SEC ID NO: 39; SEC ID NO: 40; SEC ID NO:41; SEC ID NO: 46; SEC ID NO: 47; SEC ID NO: 48; SEC ID NO: 49; SEC ID NO: 50; SEC ID NO: 51; SEC ID NO: 52 y SEC ID NO: 53.

20. El ácido nucleico según la reivindicación 15 ó 19, en el que dicho ácido nucleico es un vector de expresión.

21. Una célula recombinante que comprende el ácido nucleico de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 20.

22. Un procedimiento para preparar un polipéptido de S. aureus que ofrece inmunidad de protección, que comprende las etapas de:

23. El procedimiento según la reivindicación 22, en el que dicha célula recombinante es un S. cerevisiae.

24. Un inmunógeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para utilizar en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano mediante una terapia.

25. El inmunógeno según la reivindicación 24, para ofrecer inmunidad de protección contra S. aureus.

26. El inmunógeno según la reivindicación 25, en el que dicho paciente es un ser humano.

27. El inmunógeno según la reivindicación 25, en el que dicho paciente recibe tratamiento profiláctico contra una infección de S. aureus.

28. El inmunógeno según la reivindicación 24, para inducir una respuesta anamnésica.

29. El inmunógeno según la reivindicación 28, en el que dicha respuesta anamnésica da como resultado un aumento de al menos 3 veces del título geométrico con respecto al título preexistente, en un plazo de 3 días.

30. Uso de un inmunógeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para la fabricación de un medicamento para ser usado en un procedimiento según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 25 a 29.

31. Un inmunógeno según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en combinación con inmunógenos adicionales seleccionados de: uno o múltiples inmunógenos de S. aureus adicionales; uno o múltiples inmunógenos dirigidos contra uno o múltiples organismos Staphylococcus adicionales; y uno o múltiples inmunógenos dirigidos contra otros organismos infecciosos.