Una composición que comprende una clorotoxina (SEQ ID NO:1) o su fragmento que tiene la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEQ ID NO:

8), para su uso en el diagnóstico de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en un mamífero, en la que la composición se administra al mamífero, y la detección de la unión de la composición en el mamífero indica la presencia de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en el mamífero

Diagnóstico y tratamiento de cánceres de células mieloides y linfoides.

Campo de la invención

La invención se refiere al tratamiento de trastornos mieloproliferativos y linfoproliferativos con una clorotoxina o sus derivados.

Antecedentes de la invención

Las células sanguíneas, en general, se clasifican como linfoides (por ejemplo, linfocitos, etc.) o mieloides (por ejemplo, granulocitos, monocitos, eritrocitos y plaquetas). Por consiguiente, las malignidades hematológicas se clasifican como trastornos linfoproliferativos o mieloproliferativos. Cada uno de estos trastornos se clasifica operativamente como agudo o crónico, dependiendo de la proporción de células precursoras inmaduras (blastos) en la médula ósea. En el linaje mieloide, la presencia de más del 30% de blastos en la médula ósea define la leucemia mieloide aguda. Un trastorno mieloide que no es la leucemia mieloide aguda se denomina síndrome mielodisplásico o una enfermedad mieloproliferativa crónica basándose, respectivamente, en la presencia o la ausencia de displasia morfológica de tres linajes, que implica principalmente a los eritrocitos. Las enfermedades mieloproliferativas crónicas incluyen la leucemia mielógena crónica (CML), la trombocitopenia esencial, la policitemia vera y la metaplasia mieloide agnogénica. A veces un trastorno mieloide crónico no puede clasificarse como síndrome mielodisplásico ni como enfermedad mieloproliferativa crónica. Los ejemplos incluyen CML atípica y leucemia neutrófila crónica.

Como grupo, las enfermedades mieloproliferativas crónicas están interrelacionadas porque el proceso clonal se origina al nivel de las células progenitoras mieloides y, de forma secundaria, puede producir fibrosis de la médula o sufrir una transformación leucémica. Entre las enfermedades mieloproliferativas crónicas, sólo la CML se ha caracterizado biológicamente por la presencia de una translocación genética recíproca entre los cromosomas nueve y veintidós. Una anomalía genética coherente similar no se ha asociado con las otras enfermedades mieloproliferativas crónicas, y el diagnóstico clínico se basa en la presencia o en la ausencia de ciertas características clínicas y de laboratorio. Se requiere un aumento en la masa de eritrocitos para el diagnóstico de la policitemia vera. De manera similar, la presencia de una fibrosis sustancial de la médula ósea no asociada con la CML ni con la policitemia vera es la característica de la metaplasia mieloide agnogénica. El diagnóstico de la trombocitemia esencial es de exclusión, representando una trombocitosis clonal que no puede clasificarse como metaplasia mieloide agnogénica, policitemia vera, síndrome mielodisplásico ni CML.

Los trastornos linfoproliferativos pueden dividirse en dos categorías principales: el linfoma no hodgkiniano que incluye más de veinte entidades discretas (véase la tabla 1), y el linfoma hodgkiniano que se localiza en los nódulos linfáticos. En la actualidad, se emplea la inmunohistoquímica para diferenciar los linfomas hodgkinianos y no hodgkinianos. En la mayoría de los casos de la enfermedad de Hodgkin, en las biopsias se descubre una célula concreta denominada célula de Reed-Sternberg. Esta célula no se encuentra habitualmente en otros linfomas, así que éstos se denominan linfomas no hodgkinianos. Los linfomas no hodgkinianos (NHL) son un grupo de malignidades linfoides con una patología y una historia natural diversas. Este diversidad se ilustra por los diferentes subtipos histológicos y las clasificaciones de los NHL que han aparecido a través de los años. Con el avance rápido que se ha producido en nuestra comprensión de la biología de los linfomas han aparecido nuevos sistemas de clasificación que describen mejor este grupo de enfermedades.

Neoplasmas de células B

Linfoma/leucemia linfoblástica de precursores de células B

Neoplasmas de células B maduras

Neoplasmas de células T

Aunque se han producido avances significativos en el tratamiento del linfoma no hodgkiniano en las últimas dos décadas aún debe desarrollarse un régimen curativo para pacientes con linfomas de células B y T. Además, una remisión duradera en pacientes tratados con diversos regímenes para linfomas de grado intermedio y alto refractarios es relativamente rara (Klimo (1988), Chemotherapy for aggressive non-Hodgkin's lymphomas, en DeVita et al. (eds.), Cancer: Principles and Practice of Oncology, Lippincott, 1-12). Intentos recientes que emplean la quimioterapia supraletal combinada con radioterapia, seguido de un transplante de médula ósea, han producido una tasa de supervivencia exenta de enfermedad a largo plazo de aproximadamente 20% (Applebaum et al. (1987), J. Clin. Oncol., 5, 1340-1341). Sin embargo, la mayoría de los pacientes tratados de esta manera mueren de linfoma o de complicaciones relacionadas con el tratamiento. Por tanto, son necesarias nuevas estrategias para el tratamiento de los linfomas no hodgkinianos. Estas estrategias deberían tener como objetivo la maximización del efecto terapéutico acoplado con la minimización de la toxicidad.

Una estrategia implica el uso de anticuerpos monoclonales que reconocen antígenos asociados a tumores como un medio para dirigir fármacos o radioisótopos hacia células tumorales. Esta estrategia es particularmente atractiva en el caso de los linfomas no hodgkinianos, puesto que las células tumorales de estos linfomas muestran una diversidad de antígenos restringidos a los tumores sobre su superficie celular que pueden estar disponibles para el transporte dirigido (McMichael (1987), Leukocyte Typing III, Oxford University Press, 302-363 y 432-469). De todas las malignidades que se han tratado con anticuerpos monoclonales hasta la fecha, los linfomas han producido los resultados más espectaculares. Sin embargo, la mayoría de las respuestas tumorales han sido incompletas y de duración relativamente corta. Debido a estos resultados limitados, existe la necesidad de dirigir agentes que no sean anticuerpos, que sean útiles para la detección y el tratamiento de los linfomas.

La clorotoxina es una proteína de treinta y seis aminoácidos derivada en la naturaleza del veneno del escorpión Leiurus quinquestriatus (DeBin et al. (1993), Am. J. Physiol., 264: C361-369). Se han desarrollado composiciones (véanse las patentes de EEUU 5.905.027 y 6.429.187) y métodos (véanse la patentes de EEUU 6.028.174 y 6.319.891, y el documento WO 03/101474) para diagnosticar y tratar tumores neuroectodérmicos (por ejemplo, gliomas y meningiomas) y el cáncer...

1. Una composición que comprende una clorotoxina (SEQ ID NO:1) o su fragmento que tiene la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEQ ID NO:8), para su uso en el diagnóstico de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en un mamífero, en la que la composición se administra al mamífero, y la detección de la unión de la composición en el mamífero indica la presencia de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en el mamífero.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que la clorotoxina o su fragmento está unido a un segundo polipéptido.

3. La composición de la reivindicación 2, en la que el segundo polipéptido es un anticuerpo o su fragmento que se une específicamente con un epitopo expresado sólo por una célula de cáncer mieloide o linfoide.

4. La composición de la reivindicación 2, en la que el segundo polipéptido se selecciona del grupo que consiste en polihistidina y albúmina de suero humana.

5. Una composición que comprende una clorotoxina (SEQ ID NO:1) o su fragmento que tiene la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEQ ID NO:8), para su uso en el tratamiento de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en un mamífero, en la que la clorotoxina o su fragmento está unido a un agente citotóxico.

6. La composición de la reivindicación 5, en la que el agente citotóxico se selecciona del grupo que consiste en gelonina, ricina, saponina, exotoxina de pseudomonas, proteína antivírica de la hierba carmín, toxina de la difteria y proteínas del complemento.

7. La composición de la reivindicación 5 o de la reivindicación 6, en la que el mamífero es un ser humano y en la que la cantidad de clorotoxina administrable comprende entre 0,01 µg/kg de peso corporal y 2,0 mg/kg de peso corporal.

8. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el trastorno linfoproliferativo es un linfoma no hodgkiniano.

9. La composición de la reivindicación 8, en la que el linfoma no hodgkiniano es un neoplasma de células B o un neoplasma de células T.

10. La composición de la reivindicación 9, en la que el neoplasma de células B es un linfoma/leucemia linfoblástica de precursores de células B o un neoplasma de células B maduras.

11. La composición de la reivindicación 10, en la que el neoplasma de células B maduras se selecciona del grupo que consiste en linfoma linfocítico pequeño/leucemia linfocítica crónica de células B, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de células B de la zona marginal esplénica, leucemia de células pilosas, linfoma de células B de la zona marginal extranodal, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma de la zona marginal nodal, linfoma de células B grandes difuso, linfoma de Burkitt, plasmacitoma, y mieloma de células plasmáticas.

12. La composición de la reivindicación 9, en la que el neoplasma de células T se selecciona del grupo que consiste en leucemia prolinfocítica de células T, leucemia linfocítica de células T grandes granulares, leucemia de células NK, linfoma de células NK/T extranodal, micosis fungoides, linfoma de células grandes anaplásico cutáneo primario, linfoma de células T de tipo panniculitis subcutáneo, linfoma de células T intestinal de tipo enteropático, linfoma de células T gamma-delta hepatoesplénico, linfoma de células T angioinmunoblástico, linfoma de células T periféricas, linfoma de células grandes anaplásico, y linfoma de células T adultas.

13. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el mamífero es un ser humano.

14. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el trastorno mieloproliferativo se selecciona del grupo que consiste en policitemia vera (PV), trombocitemia esencial (ET), metaplasia mieloide agnogénica (AMM), también denominada mielofibrosis idiopática (IMF), y leucemia mielógena crónica (CML).

15. La composición de la reivindicación 1, en la que la clorotoxina o su fragmento están marcados.

16. La composición de la reivindicación 15, en la que el marcador es ¹³¹I.

17. Un método para detectar la presencia de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en un mamífero, que comprende:

(a) poner en contacto una muestra biológica aislada a partir del mamífero, con una composición que comprende una clorotoxina (SEQ ID NO:1) o su fragmento que tiene la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEQ ID NO:8), y

(b) detectar la unión de la composición a la muestra, en el que la unión indica la presencia de un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en el mamífero.

18. El método de la reivindicación 17, modificado por las características de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, y 8 a 16.

19. El uso de una composición que comprende una clorotoxina (SEQ ID NO:1) o su fragmento que tiene la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEQ ID NO:8), para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno linfoproliferativo o mieloproliferativo en un mamífero, en la que la clorotoxina o su fragmento está unido a un agente citotóxico.

20. El uso de la reivindicación 19, modificado por las características de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 14.