Secuenciación de ácidos nucleicos mediante detección en nanoporos de moléculas de etiqueta.

Método para la secuenciación de ácidos nucleicos, comprendiendo el método:



a) proporcionar una molécula de ácido nucleico y un chip que comprende una pluralidad de nanoporos individualmente direccionables, en el que dicha pluralidad de nanoporos individualmente direccionables están a una densidad de al menos 500 nanoporos individualmente direccionables por mm2, en el que dicha pluralidad de nanoporos individualmente direccionables comprende un nanoporo en una bicapa lipídica, teniendo dicho nanoporo una ácido nucleico polimerasa unida al nanoporo adyacente a la entrada de dicho nanoporo, estando dicha bicapa lipídica dispuesta adyacente a al menos un electrodo y separando al menos unas disoluciones de electrolito primera y segunda, en el que dicho al menos un electrodo detecta características eléctricas de la bicapa lipídica incluyendo flujo de corriente iónica a través del nanoporo individualmente direccionable, y en el que la etiqueta liberada se transloca a través de dicho nanoporo; b) proporcionar un flujo de corriente iónica a través del nanoporo individualmente direccionable entre las disoluciones de electrolito primera y segunda mediante un potencial aplicado;

c) dirigir dicha molécula de ácido nucleico a la ácido nucleico polimerasa unida al nanoporo individualmente direccionable;

d) extender un cebador hibridado a la molécula de ácido nucleico usando nucleótidos marcados con etiqueta, en el que cada nucleótido marcado con etiqueta tiene una etiqueta unida al 5'-fosfato del nucleótido marcado con etiqueta, y en el que una etiqueta asociada con un nucleótido individual se libera a partir del nucleótido marcado con etiqueta con al menos un fosfato unido a la etiqueta tras la incorporación del nucleótido marcado con etiqueta en el cebador mediante la polimerasa, y en el que la etiqueta liberada se transloca a través de dicho nanoporo; y

e) detectar el cambio en el flujo de corriente iónica a través del nanoporo individualmente direccionable cuando la etiqueta liberada se transloca a través del nanoporo, determinando así la secuencia de ácido nucleico de la molécula de ácido nucleico.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2013/035630.

Solicitante: THE TRUSTEES OF COLUMBIA UNIVERSITY IN THE CITY OF NEW YORK.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: West 116th Street and Broadway New York, NY 10027 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: CHEN,ROGER, JU,JINGYUE, DAVIS,RANDALL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones.
  • C12Q1/68 C12Q […] › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2779699_T3.pdf

 

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