PROCEDIMIENTO MEJORADO PARA LA OBTENCION DE PRECURSORES DE INSULINA CON PUENTES CISTINA CORRECTAMENTE UNIDOS.
Procedimiento para la preparación de insulinas o de un derivado de insulina con puentes cistina correctamente unidos a partir de un precursor de insulina o del derivado de insulina,
sometiéndose el precursor, en presencia de cisteína o de hidrocloruro de cisteína y de un coadyuvante caótropo, a un proceso de plegado, tras lo cual se obtiene una insulina o un derivado de insulina con puentes cistina correctamente unidos a partir del precursor por escisión enzimática median-te tripsina o una enzima similar a tripsina y, eventualmente, además, por medio de carboxipeptidasa B y subsiguiente puri-ficación en una resina adsorbente, caracterizado porque para la realización del proceso de plegado se ejecutan sucesivamente las siguientes etapas:
(a) mezcladura de una suspensión acuosa del precursor de la insulina o del derivado de insulina con una cantidad de cisteína o hidrocloruro de cisteína que da por resultado 1 a 15 restos SH de la cisteína o del hidrocloruro de cisteína por cada resto cisteína del precursor,
(b) incorporación de la suspensión del precursor, con contenido en cisteína o hidrocloruro de cisteína, a una solución desde 4 hasta 9 molar del coadyuvante caótropo a un valor del pH desde aproximadamente 8 hasta aproximadamente 11,5 y una temperatura desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 55ºC, mantenimiento de la mezcla obtenida durante aproximadamente 10 a 60 minutos a esta temperatura y
(c) incorporación de la mezcla, a un valor del pH desde aproximadamente 8 hasta aproximadamente 11,5 y una temperatura desde aproximadamente 5ºC hasta aproximada mente 30ºC, a una cantidad de agua que da por resultado una dilución de la concentración de la cisteína o del hidrocloruro de cisteína en la mezcla que varía entre aproximadamente 1 y 5 mM, y de la del coadyuvante caótropo que varía entre 0,2 y 1,0 M.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: HOECHST MARION ROUSSEL DEUTSCHLAND GMBH.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: BRUNINGSTRASSE 50,65929 FRANKFURT AM MAIN.
Inventor/es: KELLER, REINHOLD, DR., RUBRIDER, FRANZ-JOSEF, DR.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 2 de Mayo de 2002.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/62 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Insulinas.
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