Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.

Un anticuerpo aislado o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de un anticuerpo para una SEQ ID NO: 87 de polipéptido de BAFFR diana, caracterizado porque el anticuerpo o proteína funcional comprende

(i) un polipéptido VH que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia con al menos una de SEQ ID NOs: 50 - 56 y una secuencia del polipéptido VL que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia con al menos una de SEQ ID NOs: 43 a 49 y (ii) una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 16-21 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NOs: 16-21 y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 37-42 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NOs: 37-42 y en donde dicho anticuerpo o proteína funcional se une al polipéptido del BAFFR con una KD de 100 nM o menos e inhibe la proliferación de células B humanas inducida por BLyS con una IC50 alrededor de 10 nM o menos y agota las células B in vivo o in vitro.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/059030.

Solicitante: NOVARTIS AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: LICHTSTRASSE 35 4056 BASEL SUIZA.

Inventor/es: HEUSSER, CHRISTOPH, DR., URLINGER STEFANIE, NEUGEBAUER,JULIA, SCHAADT,EVELINE, WOISETSCHLAEGER,MAXIMILIAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/395 (Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/06 (Inmunosupresores, p. ej. medicamentos para el tratamiento del rechazo en injertos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas del... > A61P19/02 (para problemas de las articulaciones, p.ej. artritis, artrosis)

PDF original: ES-2547270_T3.pdf

 

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Ilustración 1 de Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.
Ilustración 2 de Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.
Ilustración 3 de Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.
Ilustración 4 de Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.
Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos.

Fragmento de la descripción:

Composiciones y métodos de uso para anticuerpos terapéuticos La presente invención se refiere a anticuerpos que se unen específicamente al receptor de BAFF (BAFFR) . La invención se refiere más específicamente a anticuerpos específicos que son antagonistas del BAFFR con actividad de agotamiento de células B in vivo y las composiciones y métodos de uso de dichos anticuerpos para el tratamiento 5 de trastornos patológicos que se pueden tratar por destrucción o agotamiento de las células B, tales como lupus eritematoso sistémico o artritis reumatoide u otras enfermedades autoinmunes o linfomas, leucemias y mielomas.

El BAFFR (también conocido como BR3, TNFRSF13C, o CD268) es un miembro de la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral. Se expresa predominantemente en los linfocitos B y en un subconjunto de células T. El BAFFR une específicamente el miembro de la familia del factor de necrosis tumoral BLyS (también conocido como 10 BAFF, CD257, TALL-1, THANK, TNFSF13B, ZTNF4) que se puede expresar por una variedad de diferentes tipos de células, las células mieloides más notablemente. Funcionalmente, el par ligando receptor BLyS/BAFFR está involucrado críticamente en la maduración de las células B transitorias inmaduras y para la supervivencia, migración y activación de células B maduras, incluyendo el cambio de clase de isotipo. BLyS puede actuar solo o en concierto con el receptor de células B (BCR) , la interleuquina-4, la interleuquina-21 o ligando de CD40. Debido a la presencia 15 del BAFFR en algunas células T, BLyS puede actuar como factor co-estimulador de la activación de células T. BLyS también se puede unir a dos receptores adicionales que se encuentran en las células B, TACI y BCMA.

La sobreexpresión de BLyS o BAFFR en ratones conduce a hiperplasia de células B y el desarrollo de la autoinmunidad sistémica con características clásicas de lupus eritematoso sistémico (SLE) . Además, ratones MRL-lpr/lpr autoinmunes y (NZBxNZW) F1 enfermos que representan modelos animales de SLE contienen 20 concentraciones incrementadas de BLyS en el suero y los niveles de BLyS se correlacionan con la progresión de la enfermedad. Los niveles de BLyS incrementados también se encuentran en pacientes humanos que sufren de SLE, artritis reumatoide, síndrome de Sjogren, granulomatosis de Wegener y neoplasias malignas de células B. Además, el fenotipo de la enfermedad en modelos en animales de enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide (por ejemplo artritis inducida por colágeno) , SLE y la esclerosis múltiple (por ejemplo encefalomielitis auto-inmune 25 experimental) puede ser parcialmente revertida mediante el bloqueo de BLyS con proteínas de fusión del receptor soluble. Del mismo modo, el tratamiento con proteína de fusión BAFFR:Fc inhibe la enfermedad crónica de injerto contra huésped (cGVHD) mediante el bloqueo de la supervivencia de células B. Datos de eficacia clínica con un anticuerpo anti-BLyS de bloqueo en pacientes con artritis reumatoide y SLE subrayan el papel patogénico de BLyS en estos trastornos autoinmunes. 30

La señalización inducida por BLyS también parece estar implicada en la supervivencia de las células B malignas. La apoptosis de las células B-CLL puede ser rescatada por adición de BLyS o APRIL recombinantes.

Por el contrario, la apoptosis de las células de B-CLL se ve aumentada por la adición de proteínas de fusión de BAFFR solubles o por anticuerpos anti-APRIL, lo que indica que BLyS y APRIL podrían servir como factores de crecimiento autocrinos para las células B malignas. BAFFR se expresa en una variedad de tejidos enfermos, 35 incluyendo el mieloma múltiple y linfoma no Hodgkin. Actualmente los tratamientos disponibles para estas enfermedades autoinmunes son inmunosupresores con efectos secundarios graves que no curan la enfermedad pero tienen como objetivo la mejora de los signos y síntomas de la enfermedad (fármacos modificadores de la enfermedad) . La mayoría de los inmunosupresores utilizados actualmente en SLE y RA como corticoesteroides, ciclofosfamida, metotrexato y azatioprina conducen a un efecto anti-inflamatorio en general que conlleva el riesgo de 40 infecciones graves ya que afecta a todas las armas efectoras del sistema inmune. Por lo tanto, todavía existe una necesidad de composiciones y métodos para tratar SLE y/o RA y otras enfermedades autoinmunes relacionadas, tales como agentes que interfieran con la señalización de BAFFR en la cual se sospecha que BLyS contribuye a la enfermedad.

El documento WO 2006/073941 revela ciertos anticuerpos anti BAFFR (BR3) antagónicos humanizados y humanos. 45

El documento WO 2008/008482 revela variantes de Fc de los anticuerpos revelados en el documento WO 2006/073941.

Lee, C.V., et al. (2006, Blood, vol. 108, no. 9, p3103-3111) revela varios anticuerpos anti-BAFFR derivados de fagos que se puede unir con el BAFFR humano y murino.

Lee, W.Y., et al. (2007, Blood, vol. 110, no. 12, p3959-3967) revela la caracterización de uno de estos anticuerpos, 50 designado CB2, incluyendo los estudios in vivo en ratones BALB/c donde se muestra el anticuerpo para agotar ciertos subconjuntos de células B.

Por lo tanto, en un aspecto, la invención provee un anticuerpo aislado o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de un anticuerpo para un polipéptido del BAFFR diana (SEQ ID NO: 87) , caracterizado porque el anticuerpo o la proteína funcional comprende (i) un polipéptido de VH que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia con al menos una de SEQ ID NOs: 50 - 56 y una secuencia del polipéptido VL que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia con al menos una de SEQ ID NOs: 43-49 y (ii) una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 16-21 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en 5 comparación con la SEQ ID NOs: 16 - 21 y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 37-42 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NOs: 37- 42 y en donde dicho anticuerpo o proteína funcional se une a polipéptido del BAFFR con una KD de 100 nM o menos e inhibe la proliferación de células B humanas inducida por BLyS con una IC50 alrededor de 10 nM o menos y agota las células 10 B in vivo o in vitro.

En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de dicho anticuerpo para un diana en polipéptido del BAFFR (SEQ ID NO: 87) , caracterizado porque el anticuerpo o proteína funcional se une específicamente al polipéptido del BAFFR. En un aspecto, el anticuerpo o proteína funcional es de un mamífero, que tiene un origen tal como humano o camélido, o es un anticuerpo 15 humanizado. En un aspecto particular, el anticuerpo anti-BAFFR se caracteriza por tener una porción de unión a antígeno que es específica para el BAFFR de la proteína diana y se une a BAFFR o un fragmento de BAFFR.

En una realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención son antagonistas del BAFFR sin o con baja actividad agonística. En ciertas realizaciones, el anticuerpo o fragmento funcional une el BAFFR de la proteína diana y disminuye o inhibe la unión de BLyS con BAFFR. En una realización relacionada, el anticuerpo o fragmento 20 funcional inhibe la proliferación de células B inducida por BLyS, y/o la producción de IgG1.

En otra realización, los anticuerpos de acuerdo con la invención agotan las células B in vitro e in vivo. Más preferiblemente, los anticuerpos... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo aislado o una proteína funcional que comprende una porción de unión a antígeno de un anticuerpo para una SEQ ID NO: 87 de polipéptido de BAFFR diana, caracterizado porque el anticuerpo o proteína funcional comprende (i) un polipéptido VH que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia con al menos una de SEQ ID NOs.

50. 56 y una secuencia del polipéptido VL que tiene al menos 90 por ciento de identidad de secuencia 5 con al menos una de SEQ ID NOs: 43 a 49 y (ii) una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 16-21 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NOs: 16-21 y una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs.

3. 42 o una secuencia de aminoácidos que tiene una o dos sustituciones, deleciones o adiciones 10 de aminoácidos en comparación con la SEQ ID NOs.

3. 42 y en donde dicho anticuerpo o proteína funcional se une al polipéptido del BAFFR con una KD de 100 nM o menos e inhibe la proliferación de células B humanas inducida por BLyS con una IC50 alrededor de 10 nM o menos y agota las células B in vivo o in vitro.

2. El anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende (a) una secuencia del polipéptido VH de la SEQ ID NO: 51 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 44; o 15

(b) una secuencia del polipéptido VH de la SEQ ID NO: 52 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 45; o (c) una secuencia del polipéptido VH de SEQ ID NO: 53 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 46; o (d) una secuencia del polipéptido VH de SEQ ID NO: 54 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 47; o (e) una secuencia del polipéptido VH de SEQ ID NO: 55 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 48; o (f) una secuencia del polipéptido VH de SEQ ID NO: 56 y una secuencia del polipéptido VL de la SEQ ID NO: 49. 20

3. Un anticuerpo aislado o una proteína funcional de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende (a) una secuencia de aminoácidos CDR1 de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 2-7; y (b) una secuencia de aminoácidos de CDR2 de la región variable de cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 9-14; y 25

(c) una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena pesada seleccionada entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 16-21; y (d) una secuencia de aminoácidos CDR1 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs.

2. 28; y (e) una secuencia de aminoácidos de CDR2 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que 30 consiste en SEQ ID NOs.

3. 35; y (f) una secuencia de aminoácidos de CDR3 de la región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs.

3. 42.

4. El anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con la reivindicación 3 que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 2; una región variable de cadena pesada CDR2 de 35 SEQ ID NO: 9; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 16; una región variable de cadena ligera CDR1 de SEQ ID NO: 23; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 30; y una región variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 37; o (b) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 3; una región variable de cadena pesada CDR2 de SEQ ID NO: 10; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 17; una región variable de cadena 40 ligera CDR1 de SEQ ID NO: 24; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 31; y una región variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 38; o (c) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 4; una región variable de cadena pesada CDR2 de SEQ ID NO: 11; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 18; una región variable de cadena ligera CDR1 de SEQ ID NO: 25; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 32; y una región 45 variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 39; o (d) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 5; una región variable de cadena pesada CDR2 de SEQ ID NO: 12; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 19; una región variable de cadena ligera CDR1 de SEQ ID NO: 26; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 33; y una región variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 40; o (e) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 6; una región variable de cadena pesada CDR2 de 5 SEQ ID NO: 13; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 20; una región variable de cadena ligera CDR1 de SEQ ID NO: 27; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 34; y una región variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 41; o (f) una región variable de cadena pesada CDR1 de SEQ ID NO: 7; una región variable de cadena pesada CDR2 de SEQ ID NO: 14; una región variable de cadena pesada CDR3 de SEQ ID NO: 21; una región variable de cadena 10 ligera CDR1 de SEQ ID NO: 28; una región variable de cadena ligera CDR2 de SEQ ID NO: 35; y una región variable de cadena ligera CDR3 de SEQ ID NO: 42.

5. El anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende una cadena pesada de longitud completa que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO.

75. 78 y una cadena ligera de 15 longitud completa que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95% idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO.

7. 74.

6. Un anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende:

(a) una secuencia de cadena pesada de SEQ ID NO: 75 y una secuencia de cadena ligera de SEQ ID NO: 71; o (b) una secuencia de cadena pesada de SEQ ID NO: 76 y una secuencia de cadena ligera de SEQ ID NO: 72; o 20

(c) una secuencia de cadena pesada de SEQ ID NO: 77 y una secuencia de cadena ligera de SEQ ID NO: 73; o (d) una secuencia de cadena pesada de SEQ ID NO: 78 y una secuencia de cadena ligera de SEQ ID NO: 74.

7. El anticuerpo aislado o la proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, en donde dicho anticuerpo o proteína funcional reduce las células B in vitro con una EC50 de 10 nM o menos, 1 nM o menos, o 100 pM o menos, según se mide en un ensayo ADCC de agotamiento de células B humanas. 25

8. El anticuerpo o la proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, en donde dicho anticuerpo o proteína funcional es capaz de reducir in vivo el porcentaje de células B hasta el 90% en comparación con el control no tratado, según lo medido por clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS ) de las células B.

9. El anticuerpo o proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, en donde dicho 30 anticuerpo o proteína funcional no tiene actividad agonista.

10. El anticuerpo según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, que es un anticuerpo IgG1 humanizado o totalmente humano.

11. El anticuerpo según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, que comprende una región Fc de aminoácido mutada o modificada químicamente, en donde dicha región Fc mutada o modificada químicamente 35 proporciona una mayor actividad ADCC en comparación con la región Fc de tipo salvaje.

12. El anticuerpo o proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, en donde dicho anticuerpo o proteína es hipofucosilada o no fucosilada y tiene cantidades reducidas de o ausencia de residuos fucosil.

13. El anticuerpo según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, que da como resultado por expresión 40 recombinante en una línea celular que carece de fucosiltransferasa, por ejemplo, una línea celular de mamífero con la expresión deficiente del gen FUT8 que codifica la fucosiltransferasa, lo que aumenta la actividad de ADCC de anticuerpos producidos en el mismo, en comparación con la línea celular que expresa gen FUT8 de tipo salvaje.

14. El anticuerpo o proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, que es bloqueado con cruzamiento a partir de la unión a BAFFR por al menos un anticuerpo de la reivindicación 6. 45

15. El anticuerpo o proteína funcional según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, que bloquea con cruzamiento o es bloqueado con cruzamiento por al menos un anticuerpo de la reivindicación 6, a partir de la unión a BAFFR.

16. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con cualquier reivindicación anterior.

17. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, en combinación con uno o más de un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

18. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 16 o 17, que comprende adicionalmente otros 5 ingredientes activos.

19. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, para uso como un medicamento.

20. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, para su uso en el tratamiento de enfermedades autoinmunes. 10

21. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 20 para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjögren, el pénfigo vulgar o la esclerosis múltiple.

22. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, para su uso en el tratamiento de la neoplasia de células B. 15

23. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 22, en donde la neoplasia de células B es linfoma, leucemia o mieloma.

24. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 22 o la reivindicación 23 para su uso en el tratamiento de linfomas de células B no Hodgkin.

25. El anticuerpo, proteína funcional o composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 24, en 20 donde un linfoma de células B no Hodgkin es el linfoma linfocítico pequeño, linfoma linfoplasmocitoide, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma del tejido linfoide asociado a la mucosa, linfoma difuso de células grandes, y el linfoma de Burkitt; precursor de leucemia B-linfoblástica; y leucemia linfocítica crónica de células B y mieloma múltiple.

26. Un ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo o proteína funcional de acuerdo con una cualquiera de las 25 reivindicaciones 1-25.

27. Un vector de clonación o de expresión que comprende uno o más ácidos nucleicos de acuerdo con la reivindicación 26.

28. Un vector de clonación o expresión de acuerdo con la reivindicación 27, que comprende al menos un ácido nucleico seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO.

7. 86. 30

29. Una célula huésped que comprende uno o más vectores de clonación o expresión de acuerdo con la reivindicación 27 o la reivindicación 28.

30. Un proceso para la producción de un anticuerpo o proteína funcional de una cualquiera de las reivindicaciones 1-25, que comprende cultivar la célula huésped de la reivindicación 29 y aislar dicho anticuerpo o proteína funcional.

31. El procedimiento de la reivindicación 30, en donde dicha célula huésped es una línea celular que carece de la 35 expresión de fucosiltransferasa.

32. El procedimiento de la reivindicación 31, en donde dicha línea celular es una célula de mamífero deficiente para la expresión de un gen que codifica la fucosiltransferasa, preferiblemente una línea celular CHO deficiente del gen FUT8.