Método y aparato para reducir el contenido en proteínas en extendedores de células espermáticas.

Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación

, que comprende las etapas de:

- obtener una pluralidad de células espermáticas;

- someter dicha pluralidad de células espermáticas a tensiones de clasificación;

- seleccionar dicha pluralidad de células espermáticas para una característica deseada;

- añadir un extendedor de células espermáticas que contienen yema de huevo a dicha pluralidad de células espermáticas para formar una primera mezcla de células espermáticas extendidas que tiene un primer valor de contenido de proteínas;

- enfriar dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas a una temperatura menor que 10 grados Celsius para crear una primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada;

- añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector libre de proteínas que tiene un volumen igual a un volumen de dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada que tiene un segundo valor de contenido de proteínas que incluye más de 0,4 a 3,2 por ciento en volumen de yema de huevo;

- mantener dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada en un estado sin clarificar;

- someter a centrifugación a dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada;

- añadir un extendedor de células espermáticas que contiene proteínas suplementario a la segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada centrifugada para aumentar el contenido total en proteínas de un extendedor de células espermáticas que contiene proteínas de este tipo que tiene un tercer valor de contenido de proteínas mayor que el primer valor de contenido de proteínas y que incluye más de 1 a 50 por ciento en volumen de yema de huevo;

-congelar dicha mezcla de células espermáticas extendidas.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2006/028846.

Solicitante: XY, LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 22575 STATE HIGHWAY 6 SOUTH NAVASOTA, TX 77868 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SCHENK,JOHN L.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA > CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES... > Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes... > A01N1/02 (Conservación de partes vivas)

PDF original: ES-2538979_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Método y aparato para reducir el contenido en proteínas en extendedores de células espermáticas La presente invención se refiere a un método para congelar células espermáticas clasificadas.

El documento US2003 0157 475 describe un método para la crioconservación de esperma.

Extendedores de células espermáticas pueden ser utilizados comúnmente en una diversidad de disciplinas biológicas que requieren que se trabaje con células espermáticas. Por ejemplo, una disciplina que puede hacer un amplio uso de extendedores de células espermáticas es el campo de la inseminación artificial. Considerando que la inseminación natural puede implicar una inseminación macho a hembra, la inseminación artificial puede implicar típicamente la recogida de las células espermáticas de un macho, la realización de un grado de manipulación humana de tales células espermáticas retiradas de su entorno natural, y luego insertar en una hembra las células espermáticas manipuladas. El grado exacto de la manipulación humana puede variar dependiendo de la naturaleza precisa de la aplicación particular. Por ejemplo, una cierta manipulación humana puede implicar simplemente dividir una muestra de esperma recogida en múltiples dosis para su uso en múltiples eventos de inseminación, posiblemente con múltiples animales hembras. Sin embargo, otras aplicaciones pueden requerir una manipulación humana más intensa.

Por ejemplo, la manipulación humana en algunas aplicaciones puede implicar la clasificación células espermáticas en poblaciones basadas en características exhibidas por las células del esperma. Una de estas aplicaciones puede incluir el uso de citometría de flujo para separar las células espermáticas en poblaciones de células del esperma portadoras de cromosoma X y portadoras del cromosoma Y. Un citómetro de flujo típicamente puede lograr una separación de este tipo haciendo fluir las células espermáticas arrastradas en una corriente de fluido de una en una a través de una región de interrogación, donde se puede obtener información acerca de cada una de las células espermáticas. La interrogación puede lograrse normalmente a través del uso de la óptica, por ejemplo tal vez por la intersección de un haz de láser con una célula espermática y la medición de la dispersión de la luz o fluorescencia resultante. La determinación de una característica de sexo tal vez puede hacerse mediante la tinción de las células espermáticas con un colorante fluorescente que se une al ADN dentro de las células espermáticas individuales. Cuando un láser ilumina células espermáticas individuales, el colorante puede emitir fluorescencia. Se puede entonces logara una clasificación de las células espermáticas de acuerdo con una característica del sexo, tal vez mediante el reconocimiento de que las células espermáticas que portan un cromosoma X tienen más ADN que las células espermáticas que portan un cromosoma Y, por lo tanto, posiblemente, emitiendo más luz fluorescente cuando son excitadas por un láser y tal vez permitiendo que la célula sea identifica y separada.

Otro ejemplo de la manipulación humana puede implicar, quizás, la congelación de células espermáticas para su uso en un momento posterior. La congelación de células espermáticas a menudo puede ser crítica para el uso eficaz de células espermáticas, porque la congelación puede preservar, al menos en cierta medida, la viabilidad de las células espermáticas durante un período de tiempo que se prolonga más allá de un punto en el que dicha viabilidad, de lo contrario, puede llegar a verse típicamente comprometida. Tal extensión de la viabilidad de células espermáticas puede lograrse en técnicas de congelación, tal vez ralentizando el metabolismo de las células espermáticas y quizás prolongando su vida útil de manera correspondiente. En particular, tal vez puede conocerse que el metabolismo de células espermáticas se puede disminuir en torno a un 50% aproximadamente por cada 10 grados Celsius a los que se enfría una célula espermática. Además, las células espermáticas congeladas se pueden envasar en formatos convenientes para aplicaciones particulares, por ejemplo tal vez como pajas congelados, gránulos congelados, u otras formas de muestras artificiales congeladas. Células espermáticas congeladas también pueden prestarse por sí mismas a transporte a lo largo de grandes distancias, por ejemplo tal como en un centro de recogida de células espermáticas, centro de dilución de células espermáticas y las instalaciones de la inseminación artificial pueden estar muy dispersadas en diferentes lugares.

Se puede apreciar que la separación de esperma de su entorno natural puede separarlo de mecanismos de apoyo naturales que mantienen su viabilidad. Extendedores de células espermáticas pueden actuar para restaurar al menos un grado de ese apoyo a las células espermáticas. Por ejemplo, una función de los extendedores de células espermáticas puede ser para tamponar las células espermáticas, por ejemplo tal vez mediante el ajuste del pH o la osmolalidad de un medio en el que se colocan las células espermáticas. Otra función de los extendedores de células espermáticas quizá pueda ser la de proporcionar nutrientes a las células espermáticas o para servir como una fuente de energía de las células espermáticas. En aplicaciones de congelación, una función adicional puede ser para servir como un crioprotector para minimizar los efectos adversos de la congelación sobre células espermáticas. Se puede apreciar que tales funciones de los extendedores de células espermáticas pueden llevarse a cabo, al menos en cierto grado, por las partes constituyentes que componen cualquier extendedor de célula espermática individual.

Por ejemplo, el contenido de proteínas puede ser una parte constituyente utilizada con frecuencia de diversos tipos de extendedores de células espermáticas. El contenido de proteínas puede cumplir una o más funciones en un extendedor de células espermáticas. Un propósito principal del contenido de proteínas puede ser proporcionar nutrientes y tal vez servir como una fuente de energía para las células espermáticas. Sin embargo, algunos tipos de proteínas también pueden tener una función crioprotectora, por ejemplo, tal vez el uso de lipoproteínas para reemplazar los lípidos perdidos de las membranas de las células espermáticas, lo cual puede ser debido a un proceso de congelación. Además de ello, el contenido de proteínas en los extendedores de células espermáticas puede adoptar una diversidad de formas. Alguna parte del contenido de proteínas puede ser de base vegetal, por ejemplo lecitina derivada de la soja. Otro contenido de proteína puede ser de base animal, por ejemplo, tal vez la yema de huevo derivada de fuentes que incluyen huevos de gallina común.

Los crioprotectores también pueden ser un ejemplo de una parte constituyente utilizado con frecuencia de diversos tipos de extendedores de células espermáticas. Además de ello, los crioprotectores pueden adoptar una diversidad de formas en extendedores de células espermáticas. Un crioprotector comúnmente utilizado puede ser glicerol. El glicerol puede proteger a las células espermáticas durante un proceso de congelación, tal vez mediante la unión a agua contenida dentro y que rodea a una célula espermática, resultando tal vez en la deshidratación de la célula espermática y, por consiguiente reduciendo tal vez la formación de hielo intracelular que puede causar daño a la célula espermática. Sin embargo, utilizando glicerol para crioproteger células espermáticas también puede implicar ciertas desventajas. Por ejemplo, glicerol puede suponer al menos un grado de toxicidad para las células espermáticas, volviéndose más pronunciado... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación, que comprende las etapas de:

-obtener una pluralidad de células espermáticas; -someter dicha pluralidad de células espermáticas a tensiones de clasificación; -seleccionar dicha pluralidad de células espermáticas para una característica deseada; -añadir un extendedor de células espermáticas que contienen yema de huevo a dicha pluralidad de células espermáticas para formar una primera mezcla de células espermáticas extendidas que tiene un primer valor de contenido de proteínas; -enfriar dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas a una temperatura menor que 10 grados Celsius para crear una primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada; -añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector libre de proteínas que tiene un volumen igual a un volumen de dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada que tiene un segundo valor de contenido de proteínas que incluye más de 0, 4 a 3, 2 por ciento en volumen de yema de huevo; -mantener dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada en un estado sin clarificar; -someter a centrifugación a dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada;

-añadir un extendedor de células espermáticas que contiene proteínas suplementario a la segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada centrifugada para aumentar el contenido total en proteínas de un extendedor de células espermáticas que contiene proteínas de este tipo que tiene un tercer valor de contenido de proteínas mayor que el primer valor de contenido de proteínas y que incluye más de 1 a 50 por ciento en volumen de yema de huevo;

-congelar dicha mezcla de células espermáticas extendidas.

2. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de obtener una pluralidad de células espermáticas comprende la etapa de obtener una pluralidad de células espermáticas de mamífero.

3. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según

se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de seleccionar dicha pluralidad de células espermáticas para una característica de sexo seleccionada del grupo que consiste en una característica portadora de cromosoma X y una característica portadora de cromosoma Y.

4. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contienen yema de huevo a dicha pluralidad de células espermáticas para formar una primera mezcla de células espermáticas extendidas comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contienen yema de huevo a dicha pluralidad de células espermáticas seleccionadas para formar una primera mezcla de células espermáticas extendidas que tiene 3, 2 por ciento en volumen de yema de huevo.

5. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector libre de proteínas a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene glicerol a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada.

6. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 5, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene glicerol a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene glicerol que tiene un porcentaje en volumen de glicerol seleccionado del grupo que 50 consiste en más de 3 por ciento en vol. de glicerol, más de 6 por ciento en vol. de glicerol, más de 12 por ciento en vol. de glicerol y más de 24 por ciento en vol. de glicerol.

7. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector libre de proteínas a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para 55 formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un 17 5

extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector estéril a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada.

8. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector libre de proteínas a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de gradiente de baja densidad a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada.

9. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 8, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de gradiente de baja densidad a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de densidad sustancialmente uniforme a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada.

10. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 8, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de gradiente de baja densidad a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector sustancialmente sin partículas de compactación de células espermáticas.

11. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 8, en el que dicha etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de gradiente de baja densidad a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada comprende la etapa de añadir un extendedor de células espermáticas que contiene crioprotector de baja viscosidad a dicha primera mezcla de células espermáticas extendidas enfriada para formar una segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada.

12. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, que comprende, además, la etapa de decantar una parte de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada, sin clarificar, centrifugada.

13. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 1, en el que dicha etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células espermáticas de pre-congelación comprende la etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células espermáticas de precongelación apropiada para las especies.

14. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 13, en el que dicha etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células espermáticas de pre-congelación apropiada para las especies comprende la etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células espermáticas de pre-congelación seleccionada del grupo que consiste en una concentración de pre-congelación de células espermáticas bovina, una concentración de pre-congelación de células espermáticas equinas, una concentración de pre-congelación de células espermáticas porcinas, una concentración de pre-congelación de células espermáticas ovinas, una concentración de pre-congelación de células espermáticas de cérvidos, una concentración de pre-congelación de células espermáticas caninas y una concentración de pre-congelación de células espermáticas de delphinidae.

15. Un método para congelar células espermáticas clasificadas comprometidas por un evento de clasificación según se describe en la reivindicación 13, en el que dicha etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células espermáticas de pre-congelación apropiada para las especies comprende la etapa de ajustar una concentración de células espermáticas de dicha segunda mezcla de células espermáticas extendidas enfriada a una concentración de células

espermáticas seleccionada del grupo que consiste en menos de 100 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 50 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 40 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 30 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 20 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 15 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 10 millones de células espermáticas por mililitro, menos de 5 millones de células espermáticas por mililitro y menos de 2 millones de células espermáticas por mililitro.