Formulación que comprende un anticuerpo contra la selectina P.

Formulación farmacéutica que comprende:

mAb_hu-selectina P 1 a 50 mg/ml,

tampón de HCl de L-histidina 20 mM

, polisorbato al 0,02%,

trehalosa 240 mM,

a pH 6,0,

en la que el mAb_hu-selectina P es un anticuerpo contra la selectina P que comprende el dominio variable de cadena ligera definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 3 y el dominio variable de cadena pesada definido por SEC ID nº 4.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/061692.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Inventor/es: MAHLER,HANNS-CHRISTIAN, STAUCH,OLIVER BORIS, GRAUSCHOPF,ULLA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales caracterizadas por un aspecto... > A61K9/19 (liofilizados)

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Fragmento de la descripción:

Formulación que comprende un anticuerpo contra la selectina P

La presente invención se refiere a una formulación farmacéutica según la reivindicación 1 de un anticuerpo contra la selectina P y a usos de la formulación.

La formulación según la invención puede encontrarse en una forma líquida, en una forma liofilizada o en una forma líquida reconstituida a partir de una forma liofilizada.

Los anticuerpos contra la selectina P se conocen a partir de, por ejemplo, la patente US n° 4.783.399, el documento n° WO 93/6863, Geng et al. (J. Biol. Chem. 266:22313-22318, 1991), y los documentos n° WO 93/21956 y n° WO 25/142. El documento n° US 23/138417 da a conocer una formulación farmacéutica que comprende 5 y 1 mg/ml del anticuerpo anti-selectina L HuEP5C7 en tampón de histidina 5 mM, cloruro sódico 125 mM y Tween- 8 al ,1% a pH 6,.

Se describen anticuerpos ejemplares contra la selectina P en el documento n° WO 25/142 y se incluyen anticuerpos que se caracterizan porque la secuencia de aminoácidos de la CDR3 de cadena pesada variable de dicho anticuerpo se selecciona de entre el grupo que consiste de las secuencias de CDR3 de cadena pesada SEC ID n° 38, 39, 4, 41 ó 42.

Los anticuerpos se caracterizan porque dicho anticuerpo se une a la selectina P y comprende regiones variables pesada y ligera seleccionadas de entre el grupo que consiste del dominio variable de cadena pesada definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID n° 4 y el dominio variable de cadena ligera definido por SEC ID n°3.

Las secuencias de CDR pueden determinarse según la definición estándar de Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a edición, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991. Las CDR en cada cadena se encuentran separadas por aminoácidos de marco. Las CDR de SEC ID n° 1 a 22 se muestran en la SEC ID n° 29 a n° 52.

En una realización, el anticuerpo se caracteriza por la unión a selectina P pero no se une al factor del complemento C1q y/o al receptor de Fe. Estos anticuerpos no inducen la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y/o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Preferentemente, dicho anticuerpo se caracteriza porque se une a selectina P, contiene una parte Fe derivada de origen humano y no se une al factor del complemento Clq. Más preferentemente, dicho anticuerpo es un anticuerpo humano o humanizado.

En otra realización, el anticuerpo se caracteriza porque las cadenas constantes son de origen humano. Dichas cadenas constantes son bien conocidas del estado de la técnica y se describen en, por ejemplo, Kabat (ver, por ejemplo, Johnson y Wu, Nucleic Acids Res. 28:214-218, 2). Por ejemplo, una reglón constante de cadena pesada humana útil comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada independientemente de entre el grupo que consiste de SEC ID n° 24, 25, 26, 27 y 28. Por ejemplo, una reglón constante de cadena ligera humana útil comprende una secuencia de aminoácidos de una reglón constante de cadena ligera kappa de secuencia SEC ID n° 23.

La expresión "de unión a la selectina P" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a la unión del anticuerpo a la selectina P en un ensayo BIAcore (Pharmacia Blosensor AB, Uppsala, Suecia) o en un ELISA en el que se utilizan selectina P purificada o CHO transfectantes de selectina P para recubrir placas de mlcrotltulaclón.

En el ensayo BIAcore, el anticuerpo se une a una superficie y se mide la unión a la selectina P mediante resonancia del plasmón superficial (RPS). La afinidad de la unión se define con los términos ka (constante de tasa para la asociación del anticuerpo del complejo de antlcuerpo/antígeno), kd (constante de disociación) y Kd (kd/ka). En otra realización adicional, los anticuerpos muestran una KD de 1"8 o inferior, preferentemente de entre aproximadamente 1"11 y 1"9 M (ver Ejemplos). De acuerdo con lo anteriormente expuesto, un anticuerpo preferente es el indicado anteriormente, en el que el anticuerpo se une a la selectina P con un valor de Kd inferior a 1'8 M en un ensayo BIAcore, preferentemente en el que el Intervalo de Kd es de 1"11 a 1"9 M.

Preferentemente, el anticuerpo es del subtipo lgG1 ó lgG4 humano.

Más preferentemente, el anticuerpo se caracteriza porque el anticuerpo es un anticuerpo de subclase lgG1 humana, que contiene por lo menos una mutación en L234, L235, D27, N297, E318, K32, K322, P331 y/o P329 ó un anticuerpo de la subclase lgG4 humana, que contiene por lo menos una mutación en L235 y S228 (numeración según el índice EU).

En el ELISA específico para la selectina P, la selectina P purificada se utiliza para recubrir placas de mlcrotltulación y se detecta la unión del anticuerpo a la selectina P con un anticuerpo anti-lgG humana blotlnllado y se llevan a cabo las etapas habituales de un ELISA. Los valores de EC5 en dicho ensayo preferentemente son de entre ,2 y ,3

[jg/ml en células CHO con selectina P, es decir, los anticuerpos preferentes son aquellos en los que los valores de EC5 para la unión de la selectina P se encuentran comprendidos en el intervalo de entre ,2 y ,3 mg/ml en células CHO presentadoras de selectina P en un ensayo ELISA. En un ensayo en el que se utilizan CHO transfectantes que expresan selectina P para recubrir la placa de microtitulación, los valores de EC5 se encuentran comprendidos entre ,1 y ,8 mg/ml, preferentemente entre ,1 y ,4 pg/ml.

Los valores de EC5 de transfectantes de selectina E y selectina L preferentemente son superiores a 1 pg/ml. Los anticuerpos preferentes se caracterizan porque se unen por lo menos 1. veces más específicamente a la selectina P que a la selectina E y/o selectina L según miden los valores de EC5 en un ensayo ELISA, en el que se utilizan la selectina P y la selectina E y/o la selectina L para recubrir la placa de microtitulación.

Los anticuerpos preferentemente son capaces de unirse a la selectina P en presencia del fragmento de selectina P de aminoácidos 6 a 75 (Swiss-Prot secuencia P1619) y/o no inhiben competitivamente la unión de un anticuerpo secretado por una línea celular denominada ATCC n° de acceso HB1141 a la selectina P.

Los anticuerpos preferentemente no inhiben la interacción de la selectina P y la glucoproteína de membrana plaquetaria GPIba en un formato de ensayo ELISA. En el ELISA, la glucocalicina, la parte extracelular soluble de GPIba, se inmovilizó sobre los pocilios de las placas de microtitulación, tal como se ha descrito (Romo et al., J. Exp. Med. 19:83, 1999), y la unión de la selectina P purificada tras la preincubación con los mAb_hu de selectina P se detectó con un anticuerpo policlonal anti-selectina P.

El anticuerpo preferente se caracteriza porque no se une a la proteína C3, más preferentemente se caracteriza porque no induce citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Además, el anticuerpo puede caracterizarse porque no se une a receptores de Fcy sobre las células efectoras NK. Preferentemente, el anticuerpo se caracteriza porque es un anticuerpo de subclase lgG1 humana, que contiene por lo menos una mutación en L234, L235, D27, N297, E318, K32, K322, P331 y/o P329 ó un anticuerpo de la subclase lgG4 humana que contiene por lo menos una mutación en L235 y S228 (numeración según el índice EU). El anticuerpo preferente se caracteriza porque no induce citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC).

Los anticuerpos comprenden el dominio variable de cadena ligera definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID n° 3 y el dominio variable de cadena pesada definido por SEC ID n° 4.

Los anticuerpos preferentes se caracterizan porque los anticuerpos son de la subclase lgG4 humana o porque comprenden por lo menos una mutación de aminoácido causante de... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Formulación farmacéutica que comprende:

mAb_hu-selectina P 1 a 5 mg/ml,

tampón de HCI de L-histidina 2 mM, polisorbato al ,2%, trehalosa 24 mM, a pH 6,,

en la que el mAb_hu-selectina P es un anticuerpo contra la selectina P que comprende el dominio variable de 1 cadena ligera definido por la secuencia de aminoácidos SEC ID n° 3 y el dominio variable de cadena pesada definido por SEC ID n° 4.

2. Formulación según la reivindicación 1, que es una formulación líquida o una formulación liofilizada o una formulación líquida reconstituida a partir de una formulación liofilizada.

3. Formulación según la reivindicación 1 ó 2 para la utilización en el tratamiento del asma o alergias.