Anticuerpo monoclonal anti-CD40.

Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo que se produce mediante el hibridoma KM341-1-19 (n.º de registro FERM BP-7759)

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E08017499.

Solicitante: KYOWA HAKKO KIRIN CO., LTD..

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 1-6-1, OHTEMACHI, CHIYODA-KU TOKYO JAPON.

Inventor/es: SCHOENBERGER, STEPHEN P., MIKAYAMA, TOSHIFUMI, YOSHIDA, HITOSHI, CHEN,XINGJIE, FORCE,WALKER R, TAKASHI,NOBUAKI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P35/00 (Agentes antineoplásicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/13 (Inmunoglobulinas)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/10 (Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/395 (Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN... > Preparación de péptidos o de proteínas (proteína... > C12P21/08 (Anticuerpos monoclonales)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > A61P7/00 (Medicamentos para el tratamiento de trastornos de la sangre o del fluido extracelular)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/06 (Inmunosupresores, p. ej. medicamentos para el tratamiento del rechazo en injertos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/08 (Agentes antialérgicos (agentes antiasmáticos A61P 11/06; antialérgicos oftálmicos A61P 27/14))
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS... > Medicamentos para el tratamiento de problemas inmunológicos... > A61P37/04 (Inmunoestimulantes)

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpo monoclonal anti-CD40

Campo técnico La presente invención se refiere a un anticuerpo o un fragmento funcional del mismo que reconoce un antígeno CD40 humano presente sobre la superficie de células dendríticas (DC) , células B humanas, y similares. Específicamente, la presente invención se refiere a un anticuerpo anti-CD40 humano o un fragmento funcional del mismo que es sustancialmente antagonista frente a un antígeno CD40 humano sobre la superficie de células dendríticas (DC) , y a un anticuerpo anti-CD40 humano agonista o un fragmento funcional del mismo que se espera que tenga un efecto terapéutico mayor que los de anticuerpos anti-CD40 humano convencionales.

Antecedentes de la técnica

1. CD40

CD40 es un antígeno con un peso molecular de 50 kDa que está presente en la superficie de membranas celulares. CD40 se expresa sobre células B, células dendríticas (DC) , determinados tipos de células cancerosas y células epiteliales tímicas. Se sabe que CD40 desempeña un papel clave en la proliferación y diferenciación de células B y DC. Se ha identificado CD40 como antígeno que se expresa en la superficie de células B humanas (E. A. Clark et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4494, 1986, 1. Stamenkovic et al., EMBO J. 8:1403, 1989) . Basándose en la homología de secuencia de aminoácidos, se cree que CD40 es un miembro de la familia de receptores de TNF, a la que pertenecen un receptor de NGF de baja afinidad, receptor de TNF, CD27, OX40, CD30 y similares. El gen de un ligando (CD40L) para CD40 humano y de ratón se ha clonado recientemente, revelando que es una proteína de membrana de tipo II, y se expresa en células T CD4+ activadas. Se ha mostrado también que CD40L introduce señales de activación fuertes en células B humanas y de ratón.

La expresión de CD40 se ha confirmado más a menudo en células dendríticas que en células B, de modo que ha quedado claro que CD40 desempeña un papel importante. La unión de CD40 con CD40L provoca la activación de células presentadoras de antígeno (APC) . Específicamente, potencia la expresión de moléculas de coestimulación tales como CD80 (B7-1) y CD86 (B7-2) , o la producción de IL-12 (Caux, C., et al.: Activation of human dendritic cells through CD40 cross-linking. J. Exp. Med., 180:1263, 1994) , (Shu, U., et al: Activated T cells induce interleukin-12 production by monocyte via CD40-CD40 ligand interaction. Eur. J. Immunol. 25: 1125, 1995) . Las células dendríticas muestran una fuerte capacidad de presentación de antígenos, y tienen una fuerte capacidad de activación de células T auxiliares (Th) . Además, se cree que las células dendríticas controlan la diferenciación de células Th vírgenes en células Th1 o Th2. Cuando se hace que las células dendríticas (DC1) maduren cultivando monocitos de sangre periférica que son células dendríticas mieloides en presencia de GM-CSF e IL-4 y usando CD40L, las DC1 in vitro pueden producir IL-12, estimular y activar células Th alovírgenes, y por tanto inducen células T que producen IFN (específicamente, promueven la diferenciación en Th1) . Puesto que esta acción se inhibe por anticuerpos anti-IL-12, la reacción puede estar mediada por IL-12. Por otro lado, cuando se preparan linfocitos-células dendríticas (DC2) cultivando regiones T de tejido linfático o células T plasmacitoides presentes en sangre periférica con IL-3 y ligandos de CD40, las DC2 no pueden producir IL-12, estimular ni activar células Th alovírgenes, inducen células T que producen IL-4 y por tanto promueven la diferenciación en Th2. Se cree que las células Th1 están implicadas en la activación de inmunidad celular, y las células Th2 están implicadas en la potenciación de la capacidad para inmunidad humoral así como la supresión de la capacidad para inmunidad celular. Células T citotóxicas (CTL) activadas con la ayuda de células Th1 pueden eliminar factores causantes (muchos virus, Listeria monocytogenes, bacilo de la tuberculosis, protozoos toxoplasma y similares) que se multiplican en el citoplasma y células tumorales.

Se ha mostrado que anticuerpos monoclonales anti-CD40 que reconocen CD40 expresado sobre las superficies de membranas ejercen una variedad de actividades biológicas en células B. Los anticuerpos monoclonales anti-CD40 se clasifican en gran medida en anticuerpos agonistas y antagonistas que tienen un impacto en la interacción entre CD40 y CD40L.

2. Anticuerpo agonista Se conoce la activación de células B como una acción de anticuerpos agonistas. Por ejemplo, se ha notificado que anticuerpos anti-CD40 inducen adhesión celular (Barrett et al., J. Immunol. 146: 1722, 1991; Gordon et al., J. Immunol. 140: 1425, 1988) , potencian el tamaño celular (Gordon et al., J. Immunol. 140: 1425, 1988; Valle et al., Eur. J. Immunol. 19: 1463, 1989) , inducen la división de células B que se activan sólo con anticuerpos anti-IgM, anticuerpos anti-CD20 o éster de forbol (Clark y Ledbetter, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4494, 1986; Gordon et al., LEUCOCYTE TYPING III. A. J. McMicheal ed. Oxford University Press. Oxford, p. 426; Paulie et al., J. Immunol. 142: 590, 1989) , inducen la división de células B en presencia de IL4 (Valle et al., Eur. J. Immunol. 19: 1463, 1989; Gordon et al., Eur. J. Immunol. 17: 1535, 1987) , inducen la expresión de IgE (Jabara et al., J. Exp. Med. 172: 1861, 1990; Gascan et al., J Immunol. 147: 8, 1991) , IgG e IgM (Gascan et al., J. Immunol. 147: 8, 1991) de células estimuladas con IL-4 y cultivadas sin células T, potencian la secreción y la expresión sobre la célula (Challa A,

Allergy, 54: 576, 1999) de Fc RII/CD23 soluble a partir de células B mediante IL-4 (Gordon y Guy, Immunol. Today

8: 339, 1987; Cairns et al., Eur. J. Immunol. 18: 349, 1988) y promueven la producción de IL-6 (Clark y Shu, J. Immunol. 145: 1400, 1990) . Además, se ha notificado que se establecen clones de células B a partir de células B en cultivo primario humanas añadiendo IL-4 y anticuerpos anti-CD40 en presencia de células de adhesión CDw32+ (Bancherau et al., Science 241:70, 1991) , y la inhibición de la apoptosis de células centrales germinales está mediada por CD40, independientemente de la función de receptores de antígenos (Liu et al., Nature 342: 929, 1989) . Tal como se describió anteriormente, se ha identificado CD40 como un antígeno expresado en la superficie de células B humanas. Por tanto, la mayoría de los anticuerpos aislados se han evaluado principalmente usando la función para inducir la proliferación y diferenciación de células B humanas y la actividad para inducir muerte celular en células cancerosas como indicadores (Katira, A. et al., LEUKOCYTE TYPING V. S. F. Schlossossman, et al. eds.

p. 547. Oxford University Press. Oxford, W. C. Flansow et al., LEUKOCYTE TYPING V. S. F. Schlossossman, et al. eds. p. 555. Oxford University Press. Oxford, J. D. Pound et al., International Immunology, 11: 11, 1999) .

Se mostró que anticuerpos anti-CD40 provocan la maduración de DC (Z. H. Zhou et al., Hybridoma, 18: 471 1999) . Además, se ha notificado el papel de células CD4T en la sensibilización de células T CD8 específicas de antígeno para activar DC por medio de señalización por CD40-CD40L. Se mostró que el papel de células T auxiliares CD4 en la activación de células dendríticas (DC) puede reemplazarse por el de anticuerpos monoclonales (AcM) anti-CD40 (Shoenberger, S.P., et al.: T cell help for cytotoxic T lymphocytes is mediated by CD40-CD40L interactions. Nature, 480, 1998) . Además, se mostró en ratones que el organismo puede protegerse no sólo de células tumorales que expresan CD40 sino también de células tumorales que no expresan el mismo mediante la administración de anticuerpos anti-CD40 (French, R. R., et al.:... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo que se produce mediante el hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) .

2. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos de una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de un anticuerpo producido mediante el hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) .

3. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos de las porciones maduras de una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de un anticuerpo producido mediante el hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) , estando representadas la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera respectivamente por SEQ ID NO: 28 y 30.

4. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos de las porciones maduras de una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de un anticuerpo, estando representadas la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera respectivamente por SEQ ID NO: 28 y 30.

5. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos que oscilan respectivamente entre la 21ª Q y la 148ª S de SEQ ID NO: 28 y que oscilan entre el 21º E y la 124ª K de SEQ ID NO: 30.

6. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos de las porciones maduras de una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera, estando codificadas la secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera respectivamente por secuencias de ácido nucleico aisladas a partir del hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) .

7. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo, que tiene secuencias de aminoácidos que están codificadas respectivamente por secuencias de ácido nucleico que oscilan entre la 110ª C y la 493ª A de SEQ ID NO: 27 y que oscilan entra la 89ª G y la 400ª A de SEQ ID NO: 29.

8. Anticuerpo o fragmento funcional del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que es un anticuerpo humano.

9. Composición farmacéutica que contiene como principio activo el anticuerpo del fragmento funcional del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Agente inmunopotenciador, agente antitumoral o agente anti-enfermedad autoinmunitaria, que contiene como principio activo el anticuerpo o el fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

11. Uso del anticuerpo o el fragmento funcional del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la producción de una composición farmacéutica para el tratamiento de pacientes que necesitan inmunopotenciación, para el tratamiento de tumores, o para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.

12. Hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) .

13. Ã?cido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de la porción madura de una región variable de cadena pesada aislada a partir del hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) , en el que la región variable de cadena pesada está codificada por una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO: 27.

14. Ã?cido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de la porción madura de una región variable de cadena ligera aislada a partir del hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) , en el que la región variable de cadena ligera está codificada por una secuencia de ácido nucleico representada por SEQ ID NO: 29.

15. Ã?cido nucleico según la reivindicación 13 ó 14, que es ARN o ADN.

16. Vector que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 13 ó 14.

17. Célula huésped que comprende el vector según la reivindicación 16.

18. Método de producción de un anticuerpo o un fragmento funcional del anticuerpo, que comprende cultivar la célula huésped que comprende un vector que tiene el ácido nucleico según la reivindicación 13 y el ácido nucleico según la reivindicación 14 y que expresa el anticuerpo o el fragmento funcional del anticuerpo.

19. Fragmento funcional según la reivindicación 2, que comprende una región variable de cadena pesada o una región variable de cadena ligera de un anticuerpo producido mediante el hibridoma KM341-1-19 (nº de registro FERM BP-7759) .

20. Fragmento funcional según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, que comprende las porciones maduras de una región variable de cadena pesada representada por SEQ ID NO: 28 o una región variable de cadena ligera representada por SEQ ID NO: 30.