Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos.

Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A,

C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora CRM197 mediante un grupo conector y, a continuación se mezclan; (ii) la composición comprende, al menos, 10μg y ≤ 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis y (iii) en la que cada dosis, los antígenos sacáridos del serogrupo individual A, C, W135 e Y tienen una proporción en peso de 2: 1: 1: 1 y están presentes en una cantidad de 5 μg o 10 μg.

Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos.

Campo técnico La presente invención pertenece al campo de las vacunas, particularmente frente a la meningitis bacteriana.

Técnica antecedente Neisseria meningitidis es un patógeno humano gramnegativo [1] que provoca meningitis bacteriana. Está estrechamente emparentado con N. gonorrhoeae, aunque una característica que diferencia claramente a los meningococos es la presencia de una cápsula de polisacáridos que está presente en todos los meningococos patógenos.

Basándonos en el polisacárido capsular de los organismos, se han identificado doce serogrupos de N. meningitidis (A, B, C, H, I, K, L, 29E, W135, X, Y & Z) . El serogrupo A ('MenA') es la causa más habitual de enfermedadesepidémicas en el África subsahariana. Los serogrupos B & C son responsables de la mayoría de los casos en los países desarrollados, mientras que los casos restantes están causados por los serogrupos W135 & Y.

Al igual que se usa para la clasificación, el polisacáridos capsulares se han utilizado para la vacunación. Durante muchos años se ha conocido una vacuna tetravalente inyectable de polisacáridos capsulares de los serogrupos A, C, Y & W135 [2, 3] y está autorizada para su uso en seres humanos. Aunque es eficaz en adolescentes y adultos, induce una respuesta inmunitaria pobre y de corta duración y protección, y no puede usarse en niños [por ejemplo, 4]. Los polisacáridos de esta vacuna no están conjugados y están presentes en una proporción ponderal de 1:1:1:1 [5]. Mencevax ACWY™ y Menomune™ contienen ambos 50 µg de cada polisacárido purificado una vez reconstituidos a partir de sus formas liofilizadas. Los sacáridos de la cápsula de los serogrupos A, C, W135 & Y también se han combinado en forma de conjugados [6-9] para dar vacunas tetravalentes, por ejemplo, el producto no coadyuvado Menactra™.

Los oligosacáridos conjugados del serogrupo C se han aprobado para su uso en seres humanos, incluyendo Menjugate™ [10, 11], Meningitec™ y NeisVac-C™. Los productos Menjugate™ y Meningitec™ tienen antígenos de oligosacáridos conjugados con un portador CRM197, mientras que NeisVac-C™ usa el polisacárido completo (des-Oacetilado) conjugado con un portador toxoide tetánico.

Permanece sin embargo, la necesidad de mejoras en las vacunas conjugadas frente a los serogrupos A, W 135 e Y, y en su elaboración. Esa necesidad es abordada por los productos, procesos y usos desvelados en la referencia 7, pero aún queda ámbito para modificaciones y mejoras adicionales.

Divulgación de la invención La presente invención se refiere a una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos inyectables de los serogrupos A, C, W135 e Y de N. meningitidis, en la que dichos sacáridos capsulares están conjugados a la proteína portadora CRM197 a través de un grupo conector y son opcionalmente oligosacáridos, y en la que la composición comprende ≤ 50 μg de sacáridos de meningococos por dosis. La invención proporciona específicamente una composición inmunógena inyectable de la reivindicación 1 y una composición inmunógena inyectable de la reivindicación 2.

La invención también proporciona dicha composición inmunógena inyectable, la composición comprende adicionalmente un antígeno de uno o más de: (a) serogrupo B de N. meningitidis; (b) Haemophilus influenzae de tipo B; y / o (c) Streptococcus pneumoniae.

La proporción (p / p) de sacárido MenA: sacárido MenB puede ser mayor de 1 (por ejemplo, 2:1; 3:1; 4:1; 5:1; 10:1 o superior) .

La proporción (p / p) de sacárido MenY: sacárido MenW135 puede ser mayor de 1 (por ejemplo, 2:1; 3:1; 4:1; 5:1;

10:1 o superior) y / o la proporción (p / p) de sacárido MenY: sacárido MenC puede ser menor de 1 (por ejemplo, 1:2; 1:3; 1:4; 1:5, o inferior) .

Una cantidad típica de cada antígeno de sacáridos de meningococo por dosis oscila entre 1 µg y 20 µg, por ejemplo, aproximadamente 1 µg, aproximadamente 2, 5 µg, aproximadamente 4 µg, aproximadamente 5 µg o aproximadamente 10 µg (expresado como sacárido) .

Las proporciones preferidas (p / p) para los sacáridos de los serogrupos A: C: W135: Y son: 1:1:1:1; 1:1:1:2; 2:1:1:1; 4:2:1:1; 8:4:2:1; 4:2:1:2, 8:4:1:2; 4:2:2:1; 2:2:1:1; 4:4:2:1; 2:2:1:2 y 2:2:2:1. Las proporciones preferidas (p / p) para los sacáridos de los serogrupos C: W135 : Y son: 1:1:1; 1:1:2; 1:1:1; 2:1:1; 4:2:1; 2:1:2; 4:1:2; 2:2:1 y 2:1:1. Se prefiere utilizar una masa sustancialmente igual de cada sacárido.

Purificación de los polisacáridos capsulares Los polisacáridos capsulares de los meningococos se preparan típicamente mediante un proceso que comprende las etapas de precipitación del polisacárido (por ejemplo, usando un detergente catiónico) , fraccionamiento con etanol, extracción fría con fenol (para eliminar la proteína) y ultracentrifugación (para eliminar el LPS) [por ejemplo ref. 15].

Un proceso más preferido [7], implica sin embargo la precipitación del polisacárido seguido de una solubilización del polisacárido precipitado usando un alcohol inferior. La precipitación puede conseguirse usando un detergente catiónico tal como sales de tetrabutilamonio y de cetiltrimetilamonio (por ejemplo, las sales de bromuro) , o bromuro de hexadimetrina y sales de miristiltrimetilamonio. Particularmente se prefiere el bromuro de cetiltrimetilamonio (Cetyltrimethylammonium bromide, 'CTAB') [16]. La solubilización del material precipitado puede conseguirse usando un alcohol inferior tal como metanol, propan-1-ol, propan-2-ol, butan-1-ol, butan-2-ol, 2-metil-propan-1-ol, 2-metilpropan-2-ol, dioles, etc., pero el etanol es particularmente adecuado para solubilizar complejos de CTABpolisacárido. El etanol se añade preferiblemente al polisacárido precipitado para dar una concentración final de etanol (basada en el contenido total de etanol y agua) de entre el 50% y el 95%.

Después de la resolubilización, el polisacárido puede tratarse adicionalmente para eliminar contaminantes. Esto es particularmente importante en situaciones en las que no es aceptable siquiera una contaminación menor (por ejemplo, para la producción de vacunas humanas) . Esto implicará típicamente una o más etapas de filtración, por ejemplo, puede usarse filtración profunda, filtración a través de carbono activo, filtración por tamaños y/o ultrafiltración.

Una vez filtrado para eliminar contaminantes, el polisacárido puede precipitarse para un tratamiento y/o procesado adicionales. Esto puede conseguirse convenientemente mediante el intercambio de cationes (por ejemplo, mediante la adición de sales de calcio o de sodio) .

Como alternativa a la purificación, los sacáridos capsulares de la presente invención pueden obtenerse mediante una síntesis total o parcial, por ejemplo, la síntesis de Hib se desvela en la ref. 17, y la síntesis de MenA en la ref.

18.

El polisacárido puede modificarse químicamente. Por ejemplo, puede modificarse para sustituir uno o más grupos hidroxilo por grupos bloqueantes. Esto es particularmente útil para reducir la hidrólisis del serogrupo A [19] (véase a continuación) . También puede realizarse una des-O-acetilación de los sacáridos.

Serogrupo B de N. meningitidis Algunas composiciones de la invención incluyen un antígeno del serogrupo B de N. meningitidis. Al contrario que los serogrupos A, C, W135 e Y, el sacárido capsular de MenB no es adecuado para su uso como inmunógeno en seres humanos debido a su similitud con los antígenos propios. Si se va a usar un antígeno de sacárido de MenB, es necesario por lo tanto usar un sacárido modificado, tal como aquel en el que los grupos N-acetilo de los residuos de ácido siálico del sacárido se han sustituido por grupos N-acilo. Los grupos N-acilo adecuados son grupos acilo de C1 a C8, tales como N-propionilo [20]. En lugar de usar un antígeno de sacárido, se prefiere usar sin embargo un antígeno de polipéptido.

Por lo tanto, la composición puede incluir uno o más antígenos de polipéptidos que inducen una respuesta inmunitaria que protege frente a la infección por MenB y/o que es bactericida frente a MenB. De forma más general, la composición puede inducir preferiblemente, tras su administración a un sujeto, una respuesta de anticuerpos en ese sujeto que es bactericida frente a dos o más (por ejemplo, 2 ó 3) de los linajes hipervirulentos A4, ET-5 y el linaje 3 del serogrupo B de N. meningitidis.

Se ha publicado la secuencia del genoma de la cepa MC58 de MenB [21] y los antígenos adecuados pueden elegirse de entre los polipéptidos codificados [22]. Los antígenos preferidos se desvelan en... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora CRM197 mediante un grupo conector y, a continuación se mezclan; (ii) la composición comprende, al

menos, 10 μg y ≤ 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis y (iii) en la que cada dosis, los antígenos sacáridos del serogrupo individual A, C, W135 e Y tienen una proporción en peso de 2: 1: 1: 1 y están presentes en una cantidad de 5 μg o 10 μg.

2. Una composición inmunógena inyectable que comprende sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de Neisseria meningitidis, en la que: (i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora CRM197 mediante un grupo conector y, a continuación, se mezclan; (ii) los conjugados tienen una proporción sacárido : proteína (p / p) con exceso de proteína; (iii) la composición comprende, al menos, 10 μg y ≤ 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis; y (iv) la composición comprende manitol o trehalosa.

3. La composición de la reivindicación 2, en la que cada dosis, la cantidad de antígeno sacárido del serogrupo individual A, C, W135 e Y es de 5 μg.

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en una dosis de 0, 5 ml.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en las que el sacárido capsular del serogrupo A se modifica para reemplazar uno o más grupos hidroxilo con grupos bloqueantes.

6. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende, además, un antígeno no meningococócico y no neisserial.

7. La composición de la reivindicación 6, en la que el antígeno procede de pneumococcus, el virus de la hepatitis A, el virus de la hepatitis B, Bipertussis, difteria, tétanos, polio y / o H. influenzae.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende, además, un antígeno de proteína de meningococo.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que los sacáridos capsulares de la composición son oligosacáridos.

10. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende, además, un adyuvante de sal de aluminio.

11. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su uso en la mejora de la respuesta inmune de un paciente.

12. La utilización de sacáridos capsulares de los serogrupos A, C, W135 e Y de Neisseria meningitidis en la fabricación de un medicamento con composición inmunógena inyectable para mejorar una respuesta inmune protectora contra enfermedad meningocócica en un paciente, en el que:

(i) dichos sacáridos capsulares se conjugan por separado a una proteína portadora CRM197 mediante un grupo conector y, a continuación, se mezclan; (ii) la composición comprende, al menos, 10 μg y ≤ 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por dosis y (iii) en la que cada dosis, los antígenos sacáridos del serogrupo individual A, C, W135 e Y tienen una proporción en peso de 2: 1: 1: 1 y están presentes en una cantidad de 5 μg o 10 μg O

(i) dichos sacáridos capsulares están conjugados con una proteína portadora CRM197 mediante un grupo conector y, a continuación, se mezclan; (ii) los conjugados tienen una proporción sacárido: proteína (p / p) con exceso de

proteína; (iii) la composición comprende, al menos, 10 μg y ≤ 25 μg de sacáridos capsulares de meningococo por

dosis; y (iv) la composición comprende manitol o trehalosa.

13. La utilización de la reivindicación 12, en la que el medicamento es una composición de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 10.