Métodos y composiciones para la modificación genética dirigida a través de la transformación múltiple en una sola etapa.

Un método para modificar un locus genómico objetivo en una célula de mamífero,

que comprende:

(a) introducir en la célula un agente tipo nucleasa que produce una ruptura de simple o doble cadena dentro del locus genómico objetivo;

(b) introducir en la célula un primer vector de transformación grande (LTVEC) que es de al menos 10 kb de longitud y comprende un primer inserto de ácido nucleico flanqueado por un primer brazo de homología 5' y un primer brazo de homología 3', y un segundo LTVEC que es de al menos 10 kb de longitud y comprende un segundo inserto de ácido nucleico flanqueado por un segundo brazo de homología 5' y un segundo brazo de homología 3',

en donde el tamaño combinado del primer inserto de ácido nucleico y el segundo inserto de ácido nucleico es de al menos 100 kb,

en donde el primer brazo de homología 3' del primer LTVEC tiene una primera secuencia de superposición homóloga al segundo brazo de homología 5' del segundo LTVEC, y el primer brazo de homología 5' del primer LTVEC y el segundo brazo de homología 3' del segundo LTVEC son homólogos a los segmentos genómicos correspondientes dentro del locus genómico objetivo,

en donde la primera secuencia de superposición es de al menos 1 kb, y

en donde el locus genómico objetivo se modifica mediante la integración del primer inserto de ácido nucleico y el segundo inserto de ácido nucleico entre los segmentos genómicos correspondientes; y

(c) seleccionar una célula transformada que comprende el primer inserto de ácido nucleico y el segundo inserto de ácido nucleico integrado en el locus genómico objetivo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/066681.

Solicitante: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 777 Old Saw Mill River Road Tarrytown, NY 10591 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: MURPHY, ANDREW, J., MACDONALD,LYNN, VORONINA,VERA, ZAMBROWICZ,BRIAN.

Fecha de Publicación: 9 de Octubre de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

A01K67/027 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01K CRÍA DE ANIMALES; AVICULTURA; APICULTURA; PISCICULTURA; PESCA; ANIMALES PARA CRIA O REPRODUCCIÓN, NO PREVISTOS EN OTRO LUGAR; NUEVAS VARIEDADES DE ANIMALES. › A01K 67/00 Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales. › Nuevas razas de vertebrados.
C12N15/85 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células animales.
C12N15/90 C12N 15/00 […] › Introducción estable de ADN extraño en el cromosoma.
C12N9/22 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Ribonucleasas.

PDF original: ES-2760508_T3.pdf

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