Plataforma de fabricación escalable para la purificación de vectores virales y vectores virales purificados de este modo para su utilización en terapia génica.

Procedimiento para purificar partículas de vector de virus adenoasociados (VAA) genuinas que comprenden un transgén que codifica para una proteína terapéutica o fragmento de la misma a partir de una preparación de VAA que comprende unas partículas de vector de VAA,

cápsides vacías e impurezas de la célula huésped, comprendiendo dicho procedimiento:

a) recolectar células y sobrenadante celular que comprenden unas partículas de VAA;

b) concentrar dichas células y dicho sobrenadante por medio de filtración de flujo tangencial

c) lisar dichas células por microfluidización para formar un lisado;

d) filtrar, clarificando de ese modo el lisado de la etapa c);

e) purificar unas partículas de VAA que comprenden unas partículas de vector de VAA genuinas mediante cromatografía en columna de intercambio iónico para producir un eluato, y entonces opcionalmente concentrar el eluato de la columna mediante filtración de flujo tangencial;

f) mezclar dicho eluato con cloruro de cesio y someter dicha mezcla a ultracentrifugación en gradiente para separar vectores de VAA genuinos de impurezas relacionadas con el vector de VAA;

g) recoger unas partículas de VAA que comprenden unas partículas de vector de VAA genuinas separadas en la etapa f) y someter las mismas a un intercambio de tampón mediante filtración de flujo tangencial;

h) formular dichas partículas de VAA que comprenden unas partículas de vector de VAA genuinas de la etapa g) con tensioactivo para proporcionar una formulación de partículas de VAA;

i) filtrar dicha formulación de la etapa h) para eliminar las impurezas restantes, en el que dichas partículas de vector de VAA genuinas están presentes en el filtrado resultante en una cantidad de por lo menos el 90%.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/022371.

Solicitante: THE CHILDREN'S HOSPITAL OF PHILADELPHIA.

Inventor/es: QU,Guang, WRIGHT,John Fraser, HAUCK,BERND, HIGH,KATHERINE.

Fecha de Publicación: 11 de Septiembre de 2018.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/86 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores virales.
C12N7/02 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Aislamiento o purificación.

PDF original: ES-2680915_T3.pdf

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